艾纳香油对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路的作用研究

旨在通过研究NF-κB、Nrf2/HO-1通路来揭示艾纳香油（Blumea balsamifera（L.）DC Oil,BBO）发挥抗炎效果的作用机制。本研究利用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,试验分为空白组、LPS模型组、BBO组（低、中、高剂量）、BBO阴性对照组,每组3个重复,采用Hoechst 33342和PI双染检测BBO对细胞凋亡的影响;采用ELISA和分光光度法检测BBO对LPS诱导巨噬细胞后分泌IL-1β、TNF-α、PGE₂、LTB₄、NO含量及iNOS活力的影响;采用RT-PCR检测BBO对TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平的影响;采用Western blotting检测BBO对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白水平的影响。结果显示,BBO在80 μg·mL^-1剂量范围内可以扭转LPS导致的巨噬细胞形态变化及细胞凋亡发生;与LPS模型组相比,BBO 60~80 μg·mL^-1剂量下可以极显著抑制LPS诱导的细胞炎性因子和炎症介质IL-1β、TNF-α、PGE₂、LTB₄、NO的分泌及iNOS活力（P<0.01）,并极显著抑制LPS导致的细胞IL-1β、TNF-α mRNA表达（P<0.01）;同时,BBO 60~80 μg·mL^-1剂量下极显著下调LPS导致的COX-2、5-LOX、p-IKKα、p-P65、p-IκB-α、胞质Nrf2蛋白表达（P<0.01）,极显著促进HO-1、核Nrf2蛋白表达（P<0.01）,并呈现剂量依赖性关系。结果提示,艾纳香油有良好的抑制细胞炎性和抗凋亡效果,其可能通过抑制NF-p-IκBB通路中关键蛋白磷酸化和炎症因子的产生从而促进Nrf2/HO-1通路中主要抗炎基因表达最终发挥抗炎作用。     

痛风雏鹅肠道菌群通过TLR4/MyD88/NF-κB通路促进肾损伤的研究

旨在研究痛风雏鹅的肠道菌群对肾损伤的影响及作用机制.本研究选取具有典型痛风特征的雏鹅15只,相同日龄及生长环境下的健康雏鹅15只,利用16S rDNA测序技术分析盲肠内容物中菌群的差异;用改良苦味酸法测定血清肌酐(Cr),用酶比色法测定血清尿酸(UA),用脲酶-谷氨酸脱氢酶法测定血清尿素氮(BUN);用RT-qPCR和...     

急性非洲猪瘟脑损伤及NF-κB介导脑水肿形成机制研究

【目的】 在试验条件下研究非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）所致急性脑损伤及核因子κB （NF-κB）介导脑水肿发生的相关病理机制。【方法】 18头健康长白猪随机分为2组,攻毒组（13头）和对照组（5头）,攻毒组肌内注射剂量为10²HAD₅₀/mL （HAD₅₀：半数红细胞吸附量）的ASFV毒株Pig/HLJ/18,对照组注射等体积生理盐水,试验期为15 d。试验期间观察临床症状,剖检死亡猪并观察脑部病变;利用原位PCR检测进行病毒定位;HE染色及甲苯胺蓝染色观察脑组织病理变化;免疫组化染色法检测脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、干扰素-γ（IFN-γ）、NF-κB、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、水通道蛋白4（AQP-4）的表达。【结果】 攻毒组9头猪表现出临床神经症状,脑部剖检病变主要为脑膜充血和不同程度的脑实质水肿;ASFV主要位于脑部微血管中;病变早期主要为脑水肿,脑皮质区结构疏松、血管周围间隙增宽、神经元肿胀变圆、染色变淡,中后期除了表现脑水肿的特征外,还可见脑血管充血、多量微血栓形成及淋巴细胞浸润;免疫组化结果显示,攻毒组TNF-α、IL-1β、IFN-γ、NF-κB及MMP-9主要在神经元及胶质细胞中表达,AQP-4的阳性细胞主要是微血管周围的星形胶质细胞,与对照组相比,攻毒组上述6种因子的阳性表达率均极显著增高（P<0.01）。【结论】 急性非洲猪瘟脑损伤的主要表现为脑膜血管充血出血和脑实质水肿、组织学病变显示病毒性脑炎,ASFV感染脑部,促进炎性因子的异常高表达,通过激活NF-κB信号通路对TNF-α、IL-1β、IFN-γ的转录进行调控,使这几种炎性因子的产生和释放增多,扩大炎症反应,影响血脑屏障的通透性,还能上调MMP-9与AQP-4的表达,破坏血脑屏障,促进脑水肿的发生发展。     

Effect of Compound Chinese Herbal Medicinal Polysaccharides on MyD88 Dependent Pathway Mediated by TLR4 in Lymphocytes of Chicken with Different MHC B-LβⅡ Genotypes

To investigate the effects of different doses of compound Chinese herbal medicinal polysaccharides (cCHMPS) on TLR4 and downstream MyD88 dependent signal transduction pathway components in chicken lymphocytes of different MHC B-LβⅡ genotypes,PCR-SSCP technique was applied to group layer according to different MHC B-LβⅡ genotypes.The peripheral blood lymphocytes of chicken with different MHC B-LβⅡ genotypes were collected,and added with 100,75,50 and 0 μg/mL cCHMPS (high,middle and low dose groups and control group),respectively,then co-culturing for 16,24,32 and 48 h.The expression of TLR4,MYD88 and TRAF-6 mRNA were detected using Real-time PCR method.The results showed that compared with control group,cCHMPS could significantly improve the expression levels of TLR4,MYD88 and TRAF-6 mRNA of different MHC B-Lβ Ⅱ genotypes chickens (P < 0.05);The expression levels of TLR4,MYD88 and TRAF-6 mRNA of AA genotype chicken lymphocyte in middle and low dose groups were higher than those of high dose group (except TLR4 gene cultured for 16 h);The expression of TLR4,MyD88 and TNAF-6 mRNA of BB genotype in high dose group were higher than those of other dose groups (except TLR4 gene cultured for 32 and 48 h);The expression of TLR4,MyD88 and TNAF-6 mRNA of BC genotype in low dose were higher than that of other dose groups (except TLR4 gene cultured for 16 h).There results indicated that cCHMPS played an important role in the body’s immune regulatory mechanism by binding to TLR4 in the surface of lymphocytes,activating the downstream MyD88-dependent signal transduction pathway,regulating cellular immunity,and cCHMPS optimum immunomodulatory does were different in each MHC B-Lβ Ⅱ genotype chickens.     

α-倒捻子素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导IEC-6细胞的炎症

旨在证明α-倒捻子素可以缓解脂多糖(LPS)诱导的IEC-6细胞的炎症并揭示其机制。笔者在体外培养的IEC-6细胞中构建LPS诱导的炎症模型,并通过流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、定量PCR(Q-PCR)、蛋白印迹(Western blot)的方法检测α-倒捻子素对LPS诱导的炎症是否有缓解作用。结果表明,5μmol·L-1的α-倒捻子素预处理可以显著降低LPS诱导的前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在IEC-6细胞中的分泌,以及环氧合酶2(COX-2)、IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的表达(P<0.05)。通过对炎症相关信号通路NF-κB的探究可见,α-倒捻子素能显著抑制Toll样受体4(TLR4)mRNA和NF-κB相关蛋白磷酸化IκBα(pIκBα)和磷酸化p65(pp65)的激活(P<0.05)。综上所述,α-倒捻子素可以通过TLR4/NF-κB信号通路来抑制LPS诱导的IEC-6细胞的炎症,并且可能是治疗炎症疾病的潜在选择。     

β-羟基丁酸通过激活TLR4/NF-κB通路诱导奶牛乳腺上皮细胞炎性反应

旨在探究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子kappaB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)通路在β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate, BHBA)诱导奶牛乳腺上皮细胞炎性反应的分子作用机制。通过添加不同浓度的BHBA诱导奶牛乳腺上皮细胞MAC-T以模拟奶牛高酮血症中乳腺上皮细胞的炎性反应,并利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞42 h后加入3.6 mmol/L BHBA再处理24 h;通过RT-qPCR检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1beta, IL-1β)和IL-6等炎性因子的表达变化,并采用Western blot法测定TLR4/NF-κB通路关键蛋白的相对表达水平。结果表明,与对照组相比,不同浓度BHBA处理后,乳腺上皮细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平升高,当BHBA浓度为1.2 mmol/L或以上时,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值和TRAF6蛋白水平显...     

紫锥菊通过调控TLR4-NF-κB通路增强免疫抑制鸡的免疫功能

紫锥菊是一种重要的免疫增强剂,常作为替抗药物用于饲料添加剂,但其作用机制有待进一步研究。本试验旨在研究紫锥菊对免疫抑制鸡免疫功能的影响及其机制。将120羽7日龄的雏鸡随机均分为：对照组、环磷酰胺组、紫锥菊组、紫锥菊+环磷酰胺组(联合组)。环磷酰胺组和联合组雏鸡连续3 d胸肌注射生理盐水配制的环磷酰胺溶液(80 mg·kg^-1),同时对照组和紫锥菊组连续3 d注射等量生理盐水,除紫锥菊组和联合组每天饲喂含紫锥菊全草粉末(含量为1%)的基础日粮外,其余各组雏鸡饲喂基础日粮,每天称重并记录,连续饲喂21 d。试验结束时,分析体重及脾脏指数的变化,检测炎性因子(NF-κB、IκB、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ)和TLR家族(TLR2、TLR4、TLR7、MyD88)基因mRNA及蛋白的表达含量。结果显示,紫锥菊处理提高了雏鸡的生长性能,环磷酰胺抑制了雏鸡的生长并显著降低了脾脏系数(P<0.05),且环磷酰胺组脾组织病理变化明显,而在联合组中上述病理变化得到缓解。与对照组相比,环磷酰胺组的NF-κB、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TLR2、TLR4、TLR7、MyD88的mRNA水平均显著下调(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而联合组相比于环磷酰胺组,除TLR7外,上述基因mRNA表达量均显著上调(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。此外,紫锥菊的添加显著提高了炎性因子和TLR家族相关蛋白的表达水平。结果表明：紫锥菊可通过调控TLR4/NF-κB通路增强免疫抑制鸡的免疫功能。     

川射干提取物调节TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导的小鼠急性肺损伤的研究

为了探究川射干提取物对急性肺损伤的防治效果及其对TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响,试验将24只雌性Balb/c小鼠随机分为空白对照(CTR)组、模型(LPS)组、地塞米松(DEX)组及川射干提取物(ITR)组,每组6只。ITR组每只每天灌胃12.5 mg/mL川射干提取物0.2 mL,其他组灌胃等体积生理盐水,连续7 d。末次给药1 h后,LPS组、DEX组和ITR组每只小鼠腹腔注射1 mg/mL脂多糖0.2 mL造模,CTR组腹腔注射等体积生理盐水。DEX组于造模前1小时每只小鼠腹腔注射0.5 mg/mL地塞米松0.2 mL。造模6 h后采集血液,制备血清;处死各组小鼠,分别采集肺泡灌洗液(BALF)和肺脏,通过ELISA法检测血清和肺泡灌洗液中趋化因子1(CXCL1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和IL-10的含量;对肺脏组织进行H.E.染色,观察肺脏病理变化;通过Western-blot检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达情况。结果表明：与LPS组相比,ITR组血清和肺泡灌洗...     

急性冷应激对断奶仔猪全血中HSP70/TLR4/NF-κB通路的影响

为了探讨急性冷应激对断奶仔猪全血中HSP70/TLR4/NF-κB通路关键分子表达的影响,将16头30日龄的断奶仔猪随机分成常温对照组,冷应激2,6,12 h组,每组4头.常温对照组饲养温度为(24±2)℃,冷应激组饲养温度为(4±2)℃.采集4组仔猪的全血,qRT-PCR用于检测分析4组仔猪全血中热休克蛋白70 (H...     

撒坝猪源大肠埃希氏菌HPI对泛素蛋白酶体介导的TLR4/NF-κB信号通路关键因子表达的影响

为探讨撒坝猪源大肠埃希氏菌(E.coli)的耶尔森强毒力岛(HPI)对泛素蛋白酶体(UPS)介导的TLR4/NF-κB信号通路关键因子的影响,将猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)分为5组,空白对照组、HPI阳性株感染组、HPI阴性株感染组、HPI阳性株+MG-132组、HPI阴性株+MG-132组.于试验后的第4、6、1...