鸭疫里默氏杆菌病疫苗研究进展

鸭疫里默氏杆菌病是危害水禽养殖健康发展的主要疫病,本文从疫苗的应用类型及免疫机理两方面对该病疫苗近年来相关研究进行了综述.     

鸭疫里默氏杆菌免疫原性研究

本研究对Ｉ型鸭凤里默氏杆菌的荚膜提取物的免疫的性进行了研究,结果表明,荚且提物和经过苯酚抽纯化后的荚膜提取物经２次免疫７日龄北京鸭后对同源细菌的攻毒保护率分别为９０％和７０％;采用ＥＬＩＳＡ检测荚膜提取物免疫后抗体产生的免疫组,前者抗体下降速度较后者慢。     

浅谈鸭疫里默氏杆菌病及其防控措施

鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎,由鸭疫里默氏杆菌引起,是一种急性、慢性细菌性传染病。各日龄阶段鸭均能感染,2～3周龄鸭感染后死亡率最高。鸭场一旦发病,细菌可长期存在,很难根除,给养鸭业造成了严重的经济损失。文章综述了鸭疫里默氏杆菌的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断及防控措施,以期为鸭疫里默氏杆菌病的防控提供参考。     

鸭疫里默氏杆菌疫苗研究进展

文章对目前国内外研制的鸭疫里默氏杆菌疫苗,包括灭活疫苗、弱毒活疫苗、亚单位疫苗和基因工程疫苗等研究情况进行综述,分析各种疫苗的优缺点,指出今后的研究方向,为鸭疫里默氏杆菌病的免疫防控提供参考。     

鸭疫里默氏杆菌研究现状

为调查鸭疫里默氏杆菌的研究现状,方法：综述了鸭疫里默氏杆菌的诊断方法、致病机理、疫苗研制、耐药性现状以及药物防治方面取得的重大成果,结果：发现各方面研究成果显著,总结：提出检测不同地区RA的优势血清型和耐药性,成为一项常态化的工作。     

鸭疫里默氏杆菌病原及其防控关键技术研究

文章回顾了鸭疫里默氏杆菌的病原鉴定、主要抗原、耐药机制等若干基础问题的研究进展,分析了鸭疫里默氏杆菌全基因组测序工作的完成对进一步深入开展致病机理研究和疫苗研发的重要意义。同时,从我国水禽生产的角度对鸭疫里默氏杆菌病的防控关键技术进行了详细阐述。     

鸭疫里默氏杆菌病的防治

鸭浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌引起的传染病，该菌有21个血清型。本试验通过对发病鸭的临床诊断和病原进行分离鉴定。用本场的菌株制作灭活苗进行预防免疫，取得了很好的防治效果，保护率高达90％以上。     

2型鸭疫里默氏杆菌的分离

从北京地区两个发病的鸭场中分离到两株细菌,经过染色,生化鉴定,凝集试验和琼扩试验,鉴定为２型鸭设里默氏杆菌,经过致病性试验,其中一株有很强烈致病性,另一株在实验室条件下,人工感染小鸭未能引起小鸭发病。     

鸭疫里默氏杆菌研究进展

我国是水禽养殖量及相关产品消费的第一大国.鸭疫里默氏杆菌是水禽的一种重要细菌性病原,主要导致10～50日龄的雏鸭发病,给水禽的健康养殖带来了较大的经济损失.本文针对该病原的流行病学、病原学、耐药性及当前的疫苗研究工作进行了概述,期望对鸭疫里默氏杆菌的科学用药、新型疫苗研发和疾病的综合防控提供一定的理论基础.     

鸭疫里默氏杆菌疫苗的研究进展

鸭疫里默杆菌病由鸭疫里默氏杆菌(Riemerla anatipesfer,RA)引起的一种严重危害世界各国养鸭业的主要细菌性传染病之一.目前,国内外研制的RA疫苗有灭活疫苗、弱毒疫苗和亚单位疫苗.本文综述了RA疫苗研究现状,探讨了各种RA疫苗的优缺点,并指出了RA疫苗今后的研究方向.     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Riemerella anatipestifer from Muscovy Duck

In order to understand the drug resistance of Riemerella anatipestifer from Muscovy duck,this study carried out bacterial isolation and culture,Gram staining microscopy,pathogen detection,biochemical test,16S rRNA sequence analysis,PCR identification,drug sensitivity test and drug resistance gene detection for Muscovy duck suspected of Riemerella anatipestifer infection.The results of bacterial isolation showed that on the blood agar medium,the isolated bacteria grew creamy needle tip size colonies with smooth surface,neat edge,luster and translucency.The Gram-negative bacillus brevis was detected by Gram-negative staining microscopy,and it was named GZQN201907.In the biochemical test of GZQN201907,urea reaction was positive,but glucose,maltose,lactose and other biochemical reactions were negative.The 16S rRNA phylogenetic tree was in the same branch as Riemerella anatipestifer.And the OmpA gene of PCR identification results of the isolated strain were positive.The drug sensitivity test was sensitive to 18 antibiotics including cefuroxime,erythromycin and ceftazidime,moderately sensitive to carboxypicillin and ciprofloxacin,and sensitive to neomycin and cotrimoxazole.And the resistance genes could detect the β-lactam resistance genes VIM and TEM,tetracycline resistance genes tetB,macrolide resistance genes ermB and ermF.The results of drug sensitivity test and drug resistance gene detection indicated that GZQN201907 showed the same resistance phenotype and gene detection results for β-lactam,tetracycline and macrolide.In the animal regression test,all the ducklings inoculated with GZQN201907 died within 72 h,while the control group showed no symptoms,indicating that GZQN201907 was virulent to the ducklings.One strain of Riemerella anatipestifer from Muscovy duck was successfully isolated,which laid a foundation for the prevention and treatment of Riemerella anatipestifer from muscovich.     

番鸭源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性,本研究对疑似鸭疫里默氏杆菌感染的发病番鸭进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、病鸭病原检测、生化试验、16S rRNA序列分析、PCR鉴定、药敏试验和耐药基因检测。细菌分离结果显示,分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面光滑、边缘整齐、有光泽、半透明的奶油状针尖大小菌落;革兰氏染色镜检呈革兰氏阴性短小杆菌,命名为GZQN201907。GZQN201907生化试验中尿素反应阳性,葡萄糖、麦芽糖、乳糖等生化反应呈阴性。其16S rRNA系统进化树与鸭疫里默氏杆菌处于同一分支;并且分离菌鸭疫里默氏杆菌OmpA基因PCR鉴定结果为阳性。其对头孢呋辛、红霉素、头孢他啶等18种抗菌药耐药,对羧苄西林和环丙沙星中度敏感,对新霉素和复方新诺明敏感。而耐药基因能检测出β-内酰胺类耐药基因VIM、TEM,四环素类耐药基因tetB,大环内酯类耐药基因ermB和ermF。药敏试验与耐药基因检测结果说明,GZQN201907对β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类3类药物的耐药表型和耐药基因检测结果一致。动物回归试验中接种GZQN201907的雏鸭在72 h内全部死亡,而对照组雏鸭未出现任何症状,说明GZQN201907对雏鸭有致病力。试验成功分离到1株番鸭源鸭疫里默氏杆菌,为鸭疫里默氏杆菌病的防治奠定基础。     

鸭疫里默氏菌感染对鸭肠道菌群结构的影响

试验旨在分析鸭疫里默氏菌（RA）感染不同时期鸭肠道菌群结构变化规律,探讨鸭疫里默氏菌对鸭肠道微生物的影响及引起鸭致病的可能机制。采用细菌16S V4-V5区扩增通用引物,扩增鸭疫里默氏菌未感染组（鸭疫里默氏菌感染0 d组）,鸭疫里默氏菌感染后1、2、3、5、9和14 d的鸭直肠内容物样本DNA,将扩增得到的产物进行DNA建库后基于Ion S5^TMXL测序平台测序。测序得到的Raw Reads数据总量为4 710 688条序列,平均每个样本84 119条序列。共注释到数据库的操作分类单元（OTUs）数目为4 528。Alpha多样性分析结果表明,菌群多样性指数Shannon和Simpson在鸭疫里默氏菌感染组和未感染组间差异不显著（P>0.05）,菌群丰富度指数Chao1、Ace、Observed-species和PD-whole-tree在鸭疫里默氏菌感染后0~5 d逐渐降低,从5~14 d又逐渐增加,尤其在鸭疫里默氏菌感染后3和5 d均显著低于未感染组（P<0.05）。Beta多样性分析表明,未感染组与6个时间点的感染组间菌群差异均显著（P<0.05）,其中,未感染组与感染后3 d的物种差异最大,之后依次为感染后2、5、9、1和14 d。物种丰度聚类热图显示,在未感染组和不同时间感染组,物种丰度相对较高的微生物菌属均不同。在门水平,鸭疫里默氏菌感染组主要以厚壁菌门（Firmicutes）、unidentified-Bacteria、拟杆菌门（Bacteroidetes）、梭杆菌门（Fusobacteria）及变形菌门（Proteobacteria）为主;在属水平,Bacteroides在感染组和未感染组均为优势菌属,感染组中弯曲杆菌属（Campylobacter）和梭杆菌属（Fusobacterium）明显增加。本试验分析了鸭疫里默氏菌未感染组和感染不同时间组肠道菌群的差异,寻找到一些特征菌属,可为鸭疫里默氏菌的致病性研究提供理论依据。     

鸭疫里默氏菌明胶酶对小鸭部分血液指标影响

用鸭疫里默氏菌明胶酶以颈静脉方式注射10日龄健康鸭,于注射后3、6、9、12 h测定部分血液指标.结果显示,注射明胶酶后雏鸭红细胞、白细胞和淋巴细胞数量显著减少(P<0.05或P<0.01);血清谷草/谷丙转氨酶活性、碱性磷酸酶活性及总胆固醇和血清葡萄糖水平显著升高(P<0.05或P<0.01).结果表明,鸭疫里默氏菌明胶酶对10日龄鸭的谷草转氨酶等血液指标影响明显.     

鸭疫里默菌实验室诊断方法研究进展

鸭疫里默菌病是危害养鸭业的重大疾病之一,在临床初步诊断的基础上,实验室诊断必不可少。目前已报道的鸭疫里默菌实验室诊断方法主要有细菌的分离鉴定、琼脂扩散试验、凝集试验、荧光抗体试验、间接ELISA、PCR、间接免疫酶组化法等7种,文章对这些方法进行了综述。     

与鸭C4结合蛋白互作的鸭疫里默菌外膜蛋白的筛选及鉴定

旨在筛选并鉴定与鸭C4结合蛋白（C4b-binding protein,C4BP）互作的鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer）外膜蛋白。本研究将保存的R.anatipestifer复苏培养,提取外膜蛋白,以鸭C4BPα作为诱饵蛋白进行His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱鉴定,筛选与鸭C4BP可能发生互作的候选外膜蛋白;将各候选蛋白进行克隆、原核表达,免疫小鼠制备多克隆抗体,利用Far-western blot验证与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白;针对候选蛋白及C4BPα各功能结构域进行克隆及原核表达,利用Far-western blot鉴定候选蛋白及与C4BP的相互作用位点;利用ELISA对补体因子C3b、C4b及C4BP在R.anatipestifer表面沉积情况进行测定,验证候选蛋白的功能。结果显示,经His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱分析,共筛选出3个与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白,即ECE-1、SODs和Omp62;成功获得3个外膜蛋白多克隆抗体,ELISA检测3种多克隆抗体效价均超过1∶6 400,Western blot检测3种多克隆抗体可以与重组蛋白发生特异性反应;Far-western blot结果显示,仅ECE-1能够与C4BP发生相互作用,并且只有ECE-1全长能与鸭C4BP相互作用,而鸭C4BP与ECE-1的相互作用区域位于C4BPα的SCR 2和SCR 3;当健康鸭血清稀释度为3.125%时,ECE-1抗体能够显著促进补体因子C3b、C4b在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05）,当健康鸭血清稀释度为6.25%时,ECE-1抗体能够显著抑制C4BP在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05）。本研究成功筛选并鉴定出1个与C4BP互作的R.anatipestifer外膜蛋白ECE-1,为进一步阐明R.anatipestifer免疫逃逸机制奠定了基础。     

Screening and Identification of Outer Membrane Proteins of Riemerella anatipestifer Recruited Duck C4b-binding Protein

The purpose of this experiment was to screen and identify the outer membrane proteins of Riemerella anatipestifer (R. anatipestifer) interacting with duck C4b-binding protein (C4BP). The preserved R. anatipestifer was resuscitated, then the outer membrane proteins of R. anatipestifer were extracted and His pull-down and LC-MS/MS were conducted by using duck C4BPα as the bait protein, and the candidate outer membrane proteins that might interact with duck C4BP were screened out. The candidate proteins were cloned, prokaryotic expression was conducted and the polyclonal antibodies were prepared by immunizing the mice. Far-western blot was conducted to verify the outer membrane proteins of R. anatipestifer interacting with duck C4BP. The clone and prokaryotic expression of functional domains of candidate proteins and C4BPα were conducted, and Far-western blot was used to identify the interaction sites between candidate proteins and C4BP. The deposition of complement C3b, C4b and C4BP on the surface of R. anatipestifer were detected by ELISA to verify the function of the candidate proteins. The results showed that a total of 3 outer membrane proteins of R.anatipestifer interacting with duck C4BP were screened out by His pull-down and LC-MS/MS, namely ECE-1, SODs and Omp62. The polyclonal antibodies of 3 outer membrane proteins were successfully prepared, the titers of 3 polyclonal antibodies were more than 1∶6 400 by ELISA, and the result of Western blot showed that 3 polyclonal antibodies could specifically react with corresponding recombinant proteins. The results of Far-western blot showed that only ECE-1 could interact with C4BP, and only the full length of ECE-1 could interact with duck C4BP, and the interaction region between duck C4BP and ECE-1 was located in SCR 2 and SCR 3 of C4BPα. Anti-ECE-1 antibody could significantly increase the C3b and C4b deposition on the surface of R. anatipestifer using 3.125% normal duck serum (NDS, P<0.05), while anti-ECE-1 antibody could significantly decrease the deposition of C4BP on the surface of R. anatipestifer using 6.25% NDS (P<0.05). The study successfully screened out and identified one outer membrane protein (ECE-1) of R. anatipestifer interacting with duck C4BP, which provide a basis to further study the mechanism of R. anatipestifer immune escape.     

鸭疫里氏杆菌病药物防治研究进展

鸭疫里氏杆菌病是养鸭业常见的严重的细菌病.药物防治是目前有效措施之一,主要药物有抗生素、合成抗菌药、抗菌肽及中草药等.兽用抗生素中尤以β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉类等四类抗生素对其的作用较强.其中氯霉素类药物氟苯尼考自1998年在国内上市以来,主要用于防治该病,效果良好.氟喹诺酮类药物近20多年在兽医临床应用广泛,但耐药现象日益严重.防治该病应选择或开发较新的药物,如加替沙星、奥比沙星、莫西沙星等;磺胺类药物因安全性低、药物残留严重、抗菌活性无明显优势,已逐步被其他药物所替代;抗菌肽及抗菌中药具有独特的抗菌机理且安全性高,有望成为新一代的抗菌药物应用于本病的防治.     

鸭疫里默氏菌研究进展

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏菌引起的一种重要的鸭细菌病。由于该病分布的广泛性以及引起鸭的高死亡率、发育迟缓和淘汰率增加,给养鸭业造成巨大的经济损失。所以,对鸭疫里默氏菌进行深入研究,以便预防和控制、乃至最终消灭本病,有着重要的经济意义。论文从血清型、诊断方法、疫苗等方面概述了近年来鸭疫里默氏菌研究进展。     

鸭疫里默氏菌一个可能新型的鉴定

用常规表型指标、RA种特异性PCR扩增以及16S rRNA序列分析,将来自广东和浙江的5个待检菌株鉴定为鸭疫里默氏菌。随后用玻片凝集试验、试管凝集试验和琼脂扩散沉淀试验进行了血清型鉴定。结果表明,这5株鸭疫里默氏菌为同一个血清型,但其代表菌株C2006与1～19型参考菌株和以往分离到的可能新型菌株C882均不发生可见的交叉凝集反应和交叉沉淀反应,说明这5个分离株可能属于另一个新的血清型。