福建地区部分猪场猪等孢球虫感染情况调查与分析

检测福建省9个地区的29个猪场1⁸周龄仔猪粪便样品2 173份,结果:猪等孢球虫(Isospora suis)阳性场28个,占检测猪场数的96.56%;猪等孢球虫卵囊总阳性率为9.76%(212/2173)。不同猪场间仔猪等孢球虫卵囊阳性率最高为27.78%,阳性猪每克粪便卵囊数(OPG值)在258周龄仔猪粪便样品2 173份,结果:猪等孢球虫(Isospora suis)阳性场28个,占检测猪场数的96.56%;猪等孢球虫卵囊总阳性率为9.76%(212/2173)。不同猪场间仔猪等孢球虫卵囊阳性率最高为27.78%,阳性猪每克粪便卵囊数(OPG值)在25¹15 100;卵囊阳性率与对数化的OPG值呈显著正相关(R=0.445,P=0.016)。福建省沿海6个地区的平均气温与猪等孢球虫的卵囊阳性率呈显著正相关(R=0.937,P=0.006)。第1至第8周龄仔猪等孢球虫卵囊阳性率2.66%115 100;卵囊阳性率与对数化的OPG值呈显著正相关(R=0.445,P=0.016)。福建省沿海6个地区的平均气温与猪等孢球虫的卵囊阳性率呈显著正相关(R=0.937,P=0.006)。第1至第8周龄仔猪等孢球虫卵囊阳性率2.66%¹7.46%,其中2周龄仔猪的OPG值经对数化后分析,显著高于其他周龄仔猪(P<0.01)。高床垫料饲养育成猪的等孢球虫阳性率和OPG值均极显著高于漏缝地板饲养的仔猪(P<0.01)。不使用抗球虫药物的猪场与使用其他抗球虫药的猪场仔猪的等孢球虫阳性率、OPG值均显著高于使用百球清的猪场(P<0.01,P<0.05)。     

仔猪感染猪等孢球虫排卵囊规律观察

为了进一步研究猪等孢球虫的排卵囊规律,本实验室通过对仔猪进行9次人工感染猪等孢球虫试验,对其进行研究。结果表明:①潜隐期集中出现在感染后5 d,显露期为4~7 d。②感染1万、5万及100万组在第1次排卵囊结束1~2 d后出现第2次排卵囊高峰。③卵囊孢子化后出现厚壁型与薄壁型卵囊。④排卵囊后期薄壁型卵囊逐渐增多。     

广东省部分猪场猪等孢球虫的调查

本文首次报道了广东省部分猪场的猪等孢球虫感染。在所调查的１１个场中猪等孢球虫阳性场为５４．５４％，总感染率５．２７％，多发于５～１５日龄的仔猪（１５．９１％），少见于１５日龄以上的猪（２．１７％），母猪粪中没有检出卵囊。感染猪无明显的季节差异。     

河南省猪球虫感染情况及种类鉴定

为掌握河南省猪场球虫感染情况及感染球虫种类分布,更好地制定切实可行的预防措施,笔者于2018年8—11月和2019年3—5月选取河南省豫东、豫西、豫南、豫北和豫中部分市县的25个规模化猪场及专业户和6个农村散养户猪球虫感染情况和种类分布情况进行了初步的调查,共检查样品2051份。结果显示,仔猪感染日龄主要集中在11~20日龄,猪场阳性率为61.29%,球虫的最高感染率为83.33%,平均感染率为23.29%;其次在1~10日龄,猪场阳性率为41.94%,球虫的最高感染率为66.67%,平均感染率为17.71%;在21~30日龄,猪场阳性率为35.48%,球虫的最高感染率为85.71%,平均感染率为13.35%;在31~40日龄,猪场阳性率为38.71%,球虫的最高感染率为80.00%,平均感染率为7.04%;在41日龄以上猪场阳性率也为48.39%,球虫的最高感染率为37.50%,平均感染率为7.95%。用Miaspro图象分析处理系统测量卵囊、孢子囊大小及卵囊周长、面积、形状因子(卵囊长度:卵囊宽度)等,结合显微镜下观察卵囊、孢子囊、子孢子的形态、大小和数量,共分离、鉴定出河南省各猪场猪感染的球虫有8种,分别是猪等孢球虫(Isospora suis),杨陵艾美耳球虫新种(Eimeria yanglingensis sp.Nov.),种猪艾美耳球虫(E.porci),蒂氏艾美耳球虫(E.debliecki),猪艾美耳球虫(E.suis),极细艾美耳球虫(E.perminuta),粗糙艾美耳球虫(E.scabra)和新蒂氏艾美耳球虫(E.neodebliecki)。研究结果表明:仔猪球虫病在河南省普遍存在,感染种类多达8种,优势虫种和主要致病种为猪等孢球虫。     

伊川县规模化猪场猪球虫种类及感染情况调查

应用沉淀法和浮集法,调查了伊川县10个规模化猪场猪球虫感染情况,检查750份粪便样品.结果发现,场阳性率为100%,各猪场的感染率7.1%～31.5%,其中母猪感染率为22.2%,哺乳仔猪为31.8%,保育猪为13.3%,生长猪为17.4%,育肥猪为14.7%,总感染率为20.0%.在球虫阳性粪便中初步鉴定出8种球虫,有刺艾美耳球虫和猪等孢球虫为优势种.     

猪等孢球虫的分离、分子生物学初步鉴定及PCR诊断方法的建立

取福州市某猪场仔猪腹泻粪便,经过孢子化检查确定为猪等孢球虫感染。为建立猪等孢球虫病的PCR诊断方法,根据Genbank上的Isospora suis 18S rRNA基因全序列(U97523)设计1对特异性引物,并进行了敏感性和特异性试验。该方法可以快速诊断猪等孢球虫的感染,缩短了孢子化的时间,极大提高检测效率。     

仔猪感染等孢球虫的鉴定

猪等孢球上属于艾美科等孢球虫属,主要寄生于仔猪小肠上皮细胞内,繁殖快,破坏性强,临床症状是仔猪泻出水样或糊状粪便,呈黄色或白色,偶而由于潜血而呈棕色。据文献记载［1］,仔猪发病要一般较高,可达50％～70％,死亡率高低不一,有的可高达75％。近年在美国、日本、台湾等地区流行普遍。我国云南［1］、北京［3］、江苏［5］等地区在猪球虫种类调查中,发现有2种等孢球虫。1991年深圳某猪场仔猪黄白痢病情严重,发病率、死亡率和病死率高达60．6％、19．4％和31．9％。笔者对该猪场进行了仔猪黄白痢病原调查,结果除检出致病性大肠…     

猪等孢球虫研究进展

猪等孢球虫是一种能引起仔猪球虫病的专性寄生性原虫,可引起仔猪严重腹泻甚至死亡,其发病率可高达50%~75%,病死率高达75%,呈世界性流行,严重危害养猪业发展。目前对仔猪球虫病的防控主要以药物预防为主,随着耐药虫株的不断产生及公众对药物残留的高度关注,使得这一防控手段面临巨大挑战,新型抗猪球虫药物、疫苗及其他防控手段亟待研究开发。论文对猪等孢球虫的生活史、基因组学、免疫学及其与其他微生物的互作关系等方面进行综述,以期为仔猪球虫病的综合防控提供参考。     

检测猪等孢球虫抗体的间接ELISA方法的建立

以纯化的猪等孢球虫孢子化卵囊为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗,建立了检测猪等孢球虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为:2.5μg/孔纯化的猪等孢球虫抗原包被酶标板;抗原最佳包被条件是37℃,2h;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶10000;血清、酶标二抗的作用时间分别为30min、45min。     

猪囊等孢球虫孢子化与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质组学分析

通过比较猪囊等孢球虫孢子化卵囊与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质,以期从蛋白质组学角度研究其发育机制,并为此类球虫的发育机制及该病的免疫预防或化学防治找到新的“关键”分子奠定基础。首先建立哺乳仔猪的猪囊等孢球虫感染模型,然后运用iTRAQ技术,结合LC-MS/MS分析差异表达蛋白质,并采用荧光定量PCR验证iTRAQ数据。结果共鉴定出174个蛋白,差异表达蛋白40个,其中38个蛋白上调表达,2个蛋白下调表达,差异蛋白主要涉及代谢、抗生素的生物合成、次生代谢产物的生物合成和糖酵解/糖异生过程等通路。研究结果为阐明猪囊等孢球虫孢子化发育机制以及发现新的生物标志物提供参考。     

猪等孢球虫检测及防控研究进展

猪等孢球虫是一种危害仔猪生长的专性寄生性原虫,感染该寄生虫的仔猪生长缓慢,且常表现出腹泻症状,甚至死亡,对养猪业造成极大危害。本文综合了国内外研究成果,从流行病学特征、形态特征、生活史、检测方法及防控措施等方面对仔猪等孢球虫进行了综述,并对猪等孢球虫的防控手段、内生发育史、基因组学等生物学特性以及与肠道菌群的相互作用等问题进行了展望,以期为猪等孢球虫的病原鉴定及有效防控提供科学依据。     

福建省部分规模化猪场球虫感染情况调查

2：010年3—12月,对福建省26个规模化进行猪球虫病调查,其中22个猪场检出猪球虫（占84.6%）,说明福建省大多数规模化猪场仍有猪球虫病。在受检的1 040份粪样中共检出73份有球虫卵囊（7.02%）,其中等孢球虫39份（3.75%）、猪艾美耳球虫24份（2.3%）、猪蒂氏艾美耳球虫10份（0.96%）,可见福建省猪场的球虫病仍以等孢球虫为主（占球虫粪样的53.4%）,其次为猪艾美耳球虫（占球虫粪样的32.8%）、蒂氏艾美耳球虫（占球虫粪样的13.7%）,未检出其它种类球虫。     

猫等孢球虫荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速、准确检测猫等孢球虫的方法,本研究采用GenBank登录的猫等孢球虫18s r RNA基因序列(L76471.1)保守区设计并合成1对特异引物,从经显微镜检测为猫等孢球虫阳性的粪便样品中选取一份提取猫等孢球虫DNA,以其为模板经PCR扩增猫等孢球虫18s r RNA基因片段,构建重组质粒标准品p UCm-T-IF1并经PCR及测序鉴定正确后作为质粒标准品。通过优化反应条件,建立了猫等孢球虫的荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法可以特异性的检测猫等孢球虫DNA,对猫贾第虫、猫滴虫、猫细小病毒、猫冠状病毒DNA/cDNA的检测结果均为阴性;对重组质粒标准品的检测限可达6.26×102拷贝/μL。批内和批间重复性试验的变异系数分别是0.61%～2.06%和0.32%～0.50%。表明本研究建立的方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法对23份临床疑似猫等孢球虫感染的样品进行检测,荧光定量PCR的检出率为78.26%(18/23),明显高于漂浮法检测的阳性率43.48%(10/23),并且经漂浮法检测为阳性的样品采用该方法检测均为阳性。结果表明,本研究建立的荧光...     

猪圆环病毒2型套式PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank登录的猪圆环病毒2型(PCV2)的全基因组序列，设计了2对引物．建立了检测PCV2的套式PCR方法。对该方法用序列分析、酶切等方法进行了鉴定。同时用该套式PCR方法对华南地区287个猪场的1560份样品进行了检测，结果，983份为PCV2阳性，阳性率为63％。     

应用套式PCR方法检测猪圆环病毒2型

根据Genbank中发表的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因序列,设计2对PCV2特异性引物,建立套式PCR检测方法。外测引物p1、p2扩增片段长度为647bp(92-738),内测引物p3、p4扩增长度为219bp(319-537)。其中用外部引物可扩增DNA含量到10-5mg/mL,而套式PCR则比普通PCR灵敏性还要提高103倍。用该方法对山东、安徽和河北10省的899份临床发病猪的肺脏和淋巴结样品进行检测,结果有329份样品检测出阳性,平均阳性检测率达36.6%。由此可见,PCV2感染在全国范围内的发病猪群中普遍存在。     

猪伪狂犬病毒野毒株套式PCR检测方法

为建立能鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒株和疫苗株的实用方法,本文以疫苗株缺失的3.5kb片段为靶基因,设计了2对PCR引物,建立了能够特异性检测PRV野毒株的套式PCR方法。与常规PCR相比,该方法检测极限可达10个病毒拷贝/μL,是常规PCR的1000倍,并与猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒等不存在交叉反应现象。在对临床150份样品检测时,套式PCR的阳性率为21.33%,常规PCR的阳性率为10%。这表明该方法具有特异性高、敏感性强的特点,是一种值得基层推广应用的快速诊断技术,可用于PRV的诊断和流行病学调查等。     

凤台县猪球虫种类及感染情况调查

对凤台县115头猪的球虫感染情况进行了调查,结果在77头猪的粪便中检出了球虫卵囊,感染率为70.0%(77/115),对其孢子化卵囊进行鉴定,结果发现8种球虫,即:极小艾美耳球虫,新蒂氏艾关耳球虫,蒂氏艾关耳球虫,猪艾美耳球虫,粗糙艾美耳球虫,光滑艾美耳球虫、有刺艾美耳球虫和猪等孢球虫.     

应用套式PCR检测和区分猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的试验

根据猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的S基因核苷酸序列，设计合成了2对引物，以猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒细胞培养物为模板，进行PCR特异性片段扩增，猪传染性胃肠炎病毒扩增片段大小为886bp，猪呼吸道冠状病毒扩增片段大小为214bp。建立的套式PCR经过特异性、敏感性试验及对临床送检样品检测，证明本法具有快速、特异和高度敏感的特点。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的套式PCR检测

根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)apxⅣA毒素基因的序列,设计了两对特异性引物P1/P4和P6/P8,建立了检测APP全部15个血清型的套式PCR方法.对APP的15个国际标准血清型和国内的APP菌株进行了PCR检测,都能得到223 bp的特异性扩增产物;检测的灵敏度可达1.3 CFU,最低检出DNA浓度为9 fg.     

东北虎源等孢球虫在猫体内的卵囊排出规律观察

为研究猫体内的卵囊排出规律,本研究分离的东北虎源等孢球虫纯种卵囊,在猫体内多次传代后获得充足的卵囊.对猫进行人工感染30、10~3和10~4个孢子化卵囊,观察猫的卵囊排出规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数(OPG 值).通过对比,验证了潜隐期、显露期、OPG值与感染剂量存在相关关系,即感染剂量越小,潜隐期越长,显露期越长,OPG值越小,反之亦然.