白藜芦醇对甲基乙二醛损伤BRL-3A细胞的抑制作用

为研究甲基乙二醛(MGO)对大鼠肝细胞BRL-3A细胞的损伤机制,在MGO存在的情况下,以50μmol/L白藜芦醇处理BRL-3A,分别用MTT法检测细胞活力;DNPH法检测细胞内Schiff base浓度;DCFH-DA荧光探针法检测ROS水平;以及脂质过氧化产物MDA含量的检测。结果表明,MGO导致细胞内Schiff base、ROS和MDA显著增加,诱导细胞发生氧化应激,白藜芦醇处理可有效改善MGO对细胞的损伤作用。     

H2O2诱导BRL-3A细胞模拟大鼠肝脏氧化应激损伤的研究

动物冷暴露过程中,肝脏因发生氧化应激而受损.利用不同浓度过氧化氢(H2O2)作用BRL-3A细胞,根据细胞存活率确定500 μmol/L H2O2作用细胞3h为施加条件,然后通过检测蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性,探讨在细胞水平上建立冷暴露大鼠肝脏损伤模型.结果显示,H2O2处理组细胞存活率下降,蛋白质羰基含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性均降低.与对照组相比,其存活率、细胞内蛋白质羰基含量和CAT活性,均差异极显著(P＜0.01),细胞内SOD和GSH-Px活性,差异显著(P＜0.05).结果表明,500 μmol/L H2O2作用于BRL-3A细胞可导致氧化应激的发生,其相关指标与大鼠冷暴露后肝脏受损指标改变趋势类似,利用BRL-3A细胞建立冷暴露引起的肝脏氧化损伤模型,为进一步探讨冷应激对肝脏损伤的机制奠定基础.     

棕榈酸通过上调ACC/FAS/DGAT2通路表达诱导BRL 3A细胞脂肪变性

为探究棕榈酸诱导BRL 3A细胞脂肪变性的机制,以不同浓度的PA（0、0.2、0.4、0.6 mmol·L^-1）处理BRL 3A细胞24 h,用CCK-8法、RTCA技术检测细胞增殖情况;油红O染色,观察细胞脂滴生成情况;DAPI/F-actin双染,观察细胞核及骨架形态;采用比色法测定TG含量;采用RT-PCR检测脂肪合成相关基因Acaca、Fasn、Dgat2转录水平;采用Western blot检测脂肪合成关键蛋白ACC、FAS、SCD1、GPAM、DGAT2表达量。结果显示：与对照组相比,0.2、0.4 mmol·L^-1 PA对细胞增殖无影响,0.6 mmol·L^-1 PA抑制细胞增殖;油红O染色结果显示0.4 mmol·L^-1 PA处理细胞24 h,脂滴大量蓄积,发生明显脂肪变性;随PA浓度升高,细胞核发生皱缩、变形、碎裂,细胞骨架被破坏,微丝断裂;TG含量极显著增加（P<0.01）;不同浓度PA（0.2、0.4、0.6 mmol·L^-1）处理组脂肪合成关键基因Acaca、Fasn、Dgat2 mRNA转录水平均显著升高（P<0.05）,ACC、FAS、SCD1、GPAM、DGAT2蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）;0.6 mmol·L^-1 PA组与0.4 mmol·L^-1 PA组相比,SCD1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。高浓度棕榈酸抑制BRL 3A细胞增殖,对细胞核及骨架产生损伤;棕榈酸诱导细胞发生脂滴蓄积,TG增加,通过上调脂肪合成关键基因Acaca、Fasn、Dgat2 mRNA转录水平及ACC/FAS/DGAT2通路蛋白表达水平诱导细胞发生脂肪变性。     

乙酸钠对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞脂肪变性的影响及机制分析

试验向牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)脂肪变性模型中添加不同浓度乙酸钠,探讨乙酸钠对MAC-T细胞脂肪变性模型的改善机制及炎症损伤的保护效果.使用脂多糖(LPS)刺激MAC-T细胞建立MAC-T细胞脂肪变性模型,设立对照组、LPS处理组(使用1 000 μg/L LPS刺激细胞9 h)及不同浓度的乙酸钠+LPS处理组(在LPS处理组基础上分别加入2、4、8 mmol/L乙酸钠),测定细胞甘油三酯(TG)含量及脂合成代谢关键基因乙酰CoA羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)以及分解代谢关键基因肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT-1)、肉碱脂酰转移酶Ⅱ(CPT-2)以及脂酰辅酶A氧化酶(ACO)表达水平,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素IL-6(IL-6)、白细胞介素IL-8(IL-8)含量.结果显示,LPS刺激MAC-T细胞9 h后,细胞TG含量极显著下降(P<0.01),总脂滴面积显著下降(P<0.05).与对照组相比,LPS处理组细胞TG含量显著下降(P<0.05),脂合成代谢相关基因ACC、FAS、SCD-1 mRNA表达水平均极显著下降(P<0.01),脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上调(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8含量均显著上升(P<0.05).与LPS处理组相比,添加4 mmol/L乙酸钠后细胞ACC、FAS、SCD-1 mRNA表达水平均显著上调(P<0.05),CPT-1显著下调(P<0.05),TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.05),TG含量显著上升(P<0.05);添加8 mmol/L乙酸钠后,细胞ACC、FAS mRNA表达水平显著上调(P<0.05),CPT-1、CPT-2 mRNA表达水平显著下调(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-8含量均显著降低(P<0.05),TG含量显著上升(P<0.05).研究表明,4、8 mmol/L乙酸钠会促进MAC-T细胞脂合成代谢,促进TG合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的保护作用.     

As2O3对大鼠BRL-3A和RH-35细胞TRβ1和Cyclin D1因子的影响

为了探明As₂O₃对大鼠肝脏细胞系BRL-3A和肝癌细胞系RH-35中TH信号通路的关键调控因子TRβ1和TRβ1的下游因子Cyclin D1的影响,采用qRT-PCR、Western blot技术检测2种细胞中TRβ1和Cyclin D1的基因和蛋白表达变化。结果显示：(1)与对照组相比,As₂O₃作用BRL-3A细胞12 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达显著降低(P<0.01)、Cyclin D1表达显著升高(P<0.01);6.250μmol/L组TRβ1表达明显降低(P<0.05)、Cyclin D1表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用24 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达明显升高(P<0.05);6.250μmol/L组TRβ1显著升高(P<0.01),Cyclin D1的表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用48 h,...     

脂联素对动物肝脏脂肪变性的影响及机制研究进展

脂联素是一种具有调节脂代谢紊乱、增加胰岛素敏感性以及改善肝脏脂肪堆积等多种抗肝脏脂肪变性等生理病理过程的细胞因子。动物肝脏脂肪变性是由于肝脏中脂肪酸摄入过多或合成增加、脂肪酸氧化减少、胰岛素抵抗和炎症反应等途径发生异常而导致的脂类堆积。本文介绍了动物肝脏脂肪变性的发生原因和发生发展机制,同时重点阐述了脂联素通过AMPK信号通路和PPARα信号通路对动物肝脏脂肪变性的影响机制,并对脂联素作为预防和治疗动物脂肪性肝病的新靶点及临床诊断的参考指标等方面的应用前景进行展望,以期为在生产实践中应用脂联素防治动物脂肪性肝病提供参考。     

连二亚硫酸钠诱导大鼠肝细胞氧化应激模型的建立

【目的】探讨连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)诱导大鼠肝细胞(BRL-3A)氧化应激模型的制备方法,以期建立一种稳定的BRL-3A细胞氧化应激模型。【方法】利用含Na₂S₂O₄的培养基造成细胞缺氧,更换正常培养基对BRL-3A细胞进行复氧培养,造成细胞氧化应激损伤。将BRL-3A细胞分为5组,空白对照组(0 mmol/L Na₂S₂O₄)在细胞培养箱中正常培养,试验组给予含不同浓度(0.1、1、5、10 mmol/L)Na₂S₂O₄的培养基进行缺氧培养4 h、复氧培养2 h的处理后,采用CCK-8法检测细胞存活率。采用荧光探针DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)的释放,利用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,以及BRL-3A细胞中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。【结果】BR...     

双甲脒对BRL 3A细胞的毒性作用

为了探讨双甲脒对BRL 3A细胞的毒性作用,本试验以0、20、40、60μmol/L的双甲脒分别处理BRL 3A细胞,MTT法检测细胞的相对活力,同时测定细胞培养上清液中细胞乳酸脱氢酶的活性,测定细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和细胞内谷胱甘肽还原酶的活性以及还原型谷胱甘肽和活性以及丙二醛的含量。结果表明,与对照组相比,随着双甲脒浓度的升高,细胞活性显著或极显著下降(P0.05或P0.01),细胞培养上清液中LDH活性和细胞内GSH-Px、SOD、CAT的活性显著或极显著升高(P0.05或P0.01),MDA和GSH的含量增加,但差异不显著(P0.05),GR活性先升高后降低,差异显著或极显著(P0.05或P0.01)。结果表明,双甲脒对细胞有明显的毒性,并且氧化应激在其中起到了重要作用。     

乙酸钠对小鼠摄食及摄食相关基因表达的影响

旨在通过小鼠腹腔注射乙酸钠溶液,探究其对小鼠摄食活动及摄食调控相关基因表达的影响.选取60只昆明小鼠,随机分为3组,分别为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组,每组20只.试验期间对照组每天注射生理盐水,试验组分别注射0.3,0.5 kg/L的乙酸钠.每7d测定小鼠体质量和采食量,并从各组随机选取5只小鼠,观测小肠绒毛和肝脏发育...     

自噬在镉致BRL 3A细胞损伤中的保护作用

以大鼠肝细胞系(BRL 3A)为模型,不同浓度的镉处理细胞,用免疫印迹法和免疫荧光法检测自噬标记分子LC3表达;通过添加雷帕霉素(自噬促进剂)和氯喹(自噬抑制剂)来升高和降低自噬水平,MTT法检测自噬水平的变化对细胞活性的影响。结果显示:与对照组相比,随着镉浓度的升高,细胞LC3-Ⅱ含量先上升后下降,8μmol/L时,LC3-Ⅱ含量最高,差异显著或极显著(P0.05或P0.01)。与镉处理组相比,自噬水平的上升可以显著提高细胞活性(P0.05),自噬水平的下降显著降低细胞活性(P0.05)。结果表明:镉可以引起BRL 3A细胞自噬水平的上升,激活的自噬对镉致细胞损伤具有一定的保护作用。     

NEFAs对BRL-3A氧化应激的作用

用非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFAs)刺激BRL-3A,添加钙释放激活的钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium channel protein 1,CRAR,也叫Orai1)通路抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB),检测不同分组细胞内Orai1 mRNA表达量以及活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平的变化。结果显示,添加NEFAs的BRL-3A细胞中Orai1 mRNA表达量及ROS、MDA水平显著高于对照组,GSH水平显著低于对照组,经过2-APB预处理的NEFAs组细胞的Orai1 mRNA表达量和ROS、MDA水平显著低于NEFAs组,GSH水平显著高于NEFAs组。结果表明,NEFAs通过激活Orai1通路,使BRL-3A细胞的氧化应激水平显著上升,从而导致肝损伤,而抑制Orai1通路可下调NEFAs诱导的大鼠肝细胞氧化应激水平,进而保护肝脏。     

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。     

Preventive Effect of Monoammonium Glycyrrhizinate on the Injury Induced by Sodium Oleate in Hepatocytes of Cows in vitro

Hepatocytes injury is the main pathological feature of fatty liver disease in cows during the perinatal period. The aim of this study was to investigate the preventive effect of monoammonium glycyrrhizinate (MAG) on cell damage induced by sodium oleate in hepatocytes of cows. Primary hepatocytes of cows cultured in vitro were divided into 3 groups according to different treatments:control group (untreated primary hepatocytes) and 2 experimental groups (model group, MAG group:add 0 mg·L^-1, 0.25 mg·L^-1 MAG in culture media respectively, for 12 h and then use sodium oleate at a concentration of 0.25 mmol·L^-1 to induce hepatocytes steatosis), and then the activity of hepatocytes were detected by CCK-8, the cell apoptosis rate was calculated by DAPI fluorescence staining, the content of ALT and AST in the culture solution were detected by ultraviolet colorimetry, the levels of intracellular fat deposition were analyzed by oil red O staining and imageJ. Real-time fluorescence quantification (RT-qPCR) was used to detect the mRNA expression of lipid metabolism-related genes PPARα,SREBP-1c,ChREBP,CPT1,CPT2,MTP and inflammation-related genes TNF-α,NF-κB,IL-1β,IL-6,IL-8. The experimental results showed that hepatocytes preconditioning with 0.25 mg·L^-1 MAG could improve the activity of model cells (P<0.05), and inhibit the apoptosis rate of model cells effectively (P<0.05). The release levels of ALT and AST in the cell culture supernatant of the MAG group were lower than those of the model group (P<0.05). At the same time, compared with the model group, the number of intracellular lipid droplets and the average lipid droplet area of hepatocytes treated with MAG were significantly reduced (P<0.05). And then the levels of lipid metabolism genes ChREBP, PPARα, MTP and inflammation related genes TNF-α, IL-1β, NF-κB, IL-6, IL-8 mRNA were significantly down-regulated in MAG group than the model group (P<0.05). The results showed that MAG could alleviate the impact and relieve lipid deposition induced by sodium oleate in hepatocytes by inhibiting the expression of genes related to lipid metabolism and inflammatory cytokines, which indicated that it could provide protection for the liver.     

油酸和硬脂酸对奶牛乳腺上皮细胞中脂肪酸结合蛋白3表达和脂滴分泌的影响

为确定外源添加长链脂肪酸油酸和硬脂酸对奶牛乳腺上皮细胞中脂肪酸结合蛋白3（FABP3）表达的影响,本试验采用荧光定量RT-PCR检测乳脂合成相关基因的表达情况,确定油酸和硬脂酸的最佳浓度和培养时间分别为75 μmol/L 12 h和100 μmol/L 36 h。采用Western blotting和免疫荧光法检测添加油酸和硬脂酸后FABP3表达和脂滴分泌的情况,为进一步揭示FABP3在乳脂合成信号转导通路中的作用提供理论依据。     

硫氧还蛋白对过氧化氢诱导的BRL-3A细胞损伤的保护作用

本试验利用不同浓度过氧化氢（H₂O₂）作用于BRL-3A大鼠肝细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测BRL-3A细胞存活数量以确定H₂O₂最适损伤浓度。试验随机分为正常对照组、H₂O₂处理组和硫氧还蛋白(2.5和5 μmol/L) 预处理组,用脂质过氧化物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）试剂盒测定细胞的氧化应激变化。结果显示1000 μmol/L H₂O₂对BRL-3A细胞增殖具有显著的抑制作用（P<0.05）;2.5 μmol/L 硫氧还蛋白对H₂O₂损伤的BRL-3A细胞具有保护作用,能显著抑制H₂O₂诱导的BRL-3A细胞损伤产生MDA（P＜0.05）,并显著增加细胞SOD及CAT的活性（P＜0.05）,从而保护肝细胞。本试验结果表明,硫氧还蛋白对H₂O₂诱导BRL-3A细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

钼对TM3小鼠睾丸间质细胞周期和凋亡的影响

以体外培养的小鼠睾丸间质细胞系TM3 为材料,加入不同质量浓度的钼酸钠溶液（0,10,20,40,80,160mg/L）染毒培养,分别在干预4,8,12,24,48h采用MTT法检测细胞的增殖。干预48h后,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的变化。结果表明：与对照组相比,不同剂量钼酸钠作用24h后,睾丸间质细胞的增殖活性均受到抑制;不同质量浓度的钼酸钠作用48h后,细胞周期阻滞于G0/G1期,20mg/L及其以上剂量组G0/G1期细胞百分率与对照组相比显著升高（P〈0.05或P〈0.01）;与对照组相比,各剂量组TM3 小鼠睾丸间质细胞凋亡率显著升高,差异极显著（P〈0.01）;细胞尾部DNA含量及细胞尾长随着钼剂量的增加呈不同程度的增加,且存在着剂量—效应关系。结论说明钼能够引起睾丸间质细胞周期的紊乱,并诱导睾丸间质细胞发生DNA损伤和凋亡。     

Effect of METTL3 on Milk Protein and Milk Fat Synthesis of Bovine Mammary Epithelial Cells

In this study,to investigate the regulatory role of methyltransferase-like protein 3 (METTL3) on milk protein and fat synthesis in bovine mammary epithelial cells (BMEC),different BMEC models were established, the expression of related genes and localization of METTL3 were detected,and the impact of METTL3 on milk protein and fat synthesis in BMEC after adding β-estrogen (E),methionine (Met),and overexpression or inhibition of METTL3 were measured using Western blotting and imunofluorescience methods. The results showed that when E and Met were added or the METTL3 expression was promoted,the expressions of mTOR,p-mTOR,GlyRS,p-GlyRS,CSN2 and SREBP-1c were increased,oppositely,the gene expression were decreased. Those results indicated that METTL3 could affect the milk fat and protein synthesis by adjusting the expression of related signaling pathway gene.METTL3 was one of the important regulating milk synthetic molecules and had an positively regulation on milk fat and protein synthesis in cells.     

不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织结构及精原干细胞增殖的影响

通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒对公鸡睾丸组织结构及精原干细胞增殖的影响,以期为禽类繁殖性能的研究提供实验依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0,0．5,1和2mg／kg的亚硒酸钠。通过免疫荧光观察精原干细胞数量。结果显示：日粮中添加适量的硒对睾丸的组织结构及精原干细胞的增殖有显著影响（P〈0．05）,其中0．5mg／kg组显著高于对照组、1mg／kg组和2mg／kg组。结论：适量的硒可以促进鸡睾丸的发育及精原干细胞的增殖,过量的硒对精原干细胞的增殖有一定的抑制作用。     

赭曲霉毒素A对IPEC-J2细胞生长和氧化还原平衡的影响

实验以IPEC-J2细胞为材料,研究不同浓度和时间处理下赭曲霉毒素A(OTA)对仔猪空肠上皮细胞增殖存活的影响,并进一步考察不同浓度OTA对细胞的结构功能完整性和抗氧化防御系统的影响。结果表明:OTA暴露时间和浓度对细胞存活率均有影响(P<0.01),且二者存在显著交互效应(P<0.01)。在OTA暴露24 h条件下,细胞钠钾ATP酶(Na+,K+-ATPase)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽S转移酶(GST)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)随OTA浓度增加呈线性或者二次曲线降低(P<0.01),过氧化氢酶(CAT)活性有降低趋势,丙二醛(MDA)含量呈线性增加(P<0.05);胞外乳酸脱氢酶(LDH)活性随OTA浓度增加呈线性或者二次曲线增加(P<0.01);OTA处理对超氧化物歧化酶(SOD)活性无明显影响(P>0.05)。结果显示,OTA破坏了IPEC-J2细胞的结构功能完整性,最终导致细胞的增殖或存活率降低,氧化应激可能是毒性效应发生的重要机制。     

溶血卵磷脂对肉仔鸡脂类代谢的影响

选200羽1日龄AA肉仔鸡,随机分成对照组和试验组(每组10个重复),试验组日粮添加0.1%溶血卵磷脂,研究溶血卵磷脂对肉鸡脂类代谢的影响。结果表明:溶血卵磷脂降低肝脏系数和肝脂率(P>0.05)、血清总甘油三酯与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P>0.05)、LDL-C/HDL-C和葡萄糖含量(P<0.05),提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和游离脂肪酸含量(P<0.05),上调肉仔鸡肝脏载脂蛋白B(P<0.01)和脂肪酸合成酶(P=0.155)mRNA表达水平;而对肉仔鸡的42日龄体重、腹脂率、皮下脂肪厚、肌间脂肪厚、腿肌和胸肌含脂率以及血清总胆固醇、三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸、促甲状腺激素刺激激素和胰岛素含量均无显著影响(P>0.05)。结果提示:溶血卵磷脂对肉仔鸡有减少肝脂肪沉积及降血脂作用。