栉孔扇贝三倍体研究进展和展望

扇贝养殖具有食物链短、定居性强、育苗和养殖基础好、成本相对较低等特点,已成为我国沿海地区海水养殖的重要支柱产业之一。近十几年来,我国的扇贝养殖业发展迅速。１９８５年全国扇贝养殖产量只有０．６万ｔ,至１９９６年已达上百万ｔ,在养殖规模和产量上均居世界第一位。随着社会经济的迅速发展,人们对扇贝产品的需求量也越来越大。而国内外市场的不断扩大,又为扇贝养殖业的发展创造了十分有利的条件。但从整体上讲,我国扇贝养殖产量的提高主要依靠养殖规模的扩大和人力、物力的大量投入。随着养殖面积和养殖密度的不断增大以及生…     

栉孔扇贝自然采苗初步总结

<正> 栉孔扇贝[Chlamys farrefi(J et P)]是珍贵海产品,其闭壳肌是制“干贝”的原料,含蛋白质高达61.8%,是特供和出口的高档商品。栉孔扇贝在我困主要分布在北方沿海,尤以山东、辽宁为最多。山东更以长岛县为主要产地。但在六十年代以后,产量急剧下降,资源严重衰退。     

栉孔扇贝养殖

“干贝”味道鲜美，营养丰富，是珍贵海产品，它出自栉孔扇贝，这种扇贝的养殖方法有两种：     

抗菌素在栉孔扇贝育苗中的应用

在贝类人工育苗过程中,抑制水中有害微生物的繁殖使用抗菌素是行之有效的方法,是提高成活率的关键。为此,我们在1987年做了这方面试验,现将结果报告如下:     

温岭浅海栉孔扇贝生产性养殖试验

在我国北方,扇贝的养殖技术已经普及,而且获得显著的经济和社会效益。而浙江一带,特别是浙江中部沿海──温岭,浅海养殖扇贝几乎为零。主要是由于水浑、浪大、流急、台风频繁等自然因素,制约了浙江浅海贝类养殖的发展。为此,我们率先在温岭市龙门引进栉孔扇贝,进行...     

栉孔扇贝的生殖周期

本文介绍了栉孔扇贝生殖细胞的发生、生殖腺成熟度和生殖周期的研究结果。作者把栉孔扇贝的卵细胞发生分为卵原细胞期、无卵黄期、卵黄形成前期、卵黄形成后期和成熟期五个阶段；把精子的发生过程分为精原细胞期、初级精母细胞期、次级精母细胞期、精细胞期和精子期五个阶段。对于栉孔扇贝生殖腺的发育过程，作者根据生殖细胞在滤泡中所占的比例，把它分成增殖期、生长期、成熟期、生殖期和休止期五个阶段。栉孔扇贝的性腺发育在青岛海区为一年一个周期，但其繁殖高峰则有二次，这表明栉孔扇贝的成熟期和生殖期二者是相互重叠的。此外，作者也观察到了栉孔扇贝的雌雄同体现象。     

长牡蛎精子膜蛋白的提取及其部分生化性质的研究

从提取时间和TritonX-100浓度两个方面对长牡蛎(Crassosstrea gigas)精子膜蛋白提取条件进行优化,确定最佳提取条件:将精液150 g离心去除精原细胞,经PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液清洗后,3 000 g离心10 min(4 ℃)得精子悬液;然后加入3倍体积含1% TritonX-100的膜蛋白提取液,冰浴振摇1 h;50 000 g离心15 min(4 ℃),收集上清液即为精子膜蛋白溶液.SDS-PAGE电泳后,考马斯亮蓝R-250染色检测到21种膜蛋白,分子量在26～156 kD之间,PAS染色检测到糖蛋白有14种,苏丹黑B染色检测到脂蛋白有17种,其中有13种膜蛋白既是糖蛋白又是脂蛋白.实验结果还发现1种分子量为38 kD的r16膜蛋白既为糖蛋白又为脂蛋白,且高碘酸-Shiff试剂和苏丹黑B染色最深,条带最清晰,蛋白丰度最高,与此相对的分子量为55 kD的r12膜蛋白,考马斯亮蓝R-250染色也较深,条带清晰,但其糖蛋白和脂蛋白染色相对r16膜蛋白较浅,说明r16和r12两种膜蛋白其蛋白丰度相差不大,其糖基化程度及脂化程度可能相差较大,此两种膜蛋白有待于进一步分离纯化.此研究结果可为长牡蛎精子膜蛋白在精子发生和受精过程中作用的研究提供基础资料.     

栉孔扇贝半人工采苗技术报告

栉孔扇贝是山东蓬莱市海水养殖主要种类之一。随着栉孔扇贝养殖生产的大发展,全人工育苗已远远满足不了殖养生产的需要,严重制约了扇贝养殖的发展,而且成本较高。为解决这一矛盾,我们于1990—1993年在沿海重点乡、镇养殖区进行半人工采苗试验,并取得了成功。通过三年的实践探索出了一整套适宜我市海区应用的栉孔扇贝半     

紫外辐射对栉孔扇贝精子遗传失活及形态结构的影响

报道了紫外辐射对栉孔扇贝精子遗传失活及形态结构的影响。采用光照强度为800μW/cm2·s的紫外线辐射40～50s的栉孔扇贝精子,与正常的卵子受精可以得到雌核发育的单倍体胚胎。随着辐射时间的增加,受精率明显下降,且受精卵极少发育到D形幼虫。扫描电镜观察发现,辐射后部分精子的顶体膜破裂,顶体丝伸出,辐射时间越长顶体受到的破坏越严重,证明紫外辐射可以诱导精子的顶体反应;精子的鞭毛在紫外辐射过程中也会受到破坏,随着辐射时间的增加鞭毛脱落的比例也逐渐增加。推测紫外辐射导致精子结构的破坏是受精率下降的原因之一。     

以栉孔扇贝闭壳肌为例的几种DNA提取方法的比较研究

以栉孔扇贝(Chlamys farreri)闭壳肌为试验材料，采用浓盐法、酚抽提法、LiCl法及改进的浓盐法和酚抽提法等提取其DNA，通过紫外吸收值测定及琼脂糖凝胶电泳法对提取的DNA质量进行分析比较。结果表明，这5种方法都能提到DNA，但改进的浓盐法和酚抽提法可将其中的蛋白质及RNA较为有效地除去，得到比较纯净的DNA。     

三倍体栉孔扇贝的生殖腺观察

在栉孔扇贝（Chlamys farreri)的繁殖季节，对人工诱导的三倍体栉孔扇贝的生殖腺进行了外观，组织学及电镜观察，结果表明，三本栉孔扇贝的生殖腺外观呈透明状，分不出雌雄，组织切片观察，三倍体雌性的生殖腺滤泡细胞数量少，为一大的空腔，沿滤泡壁排列着单层不连续的卵原细胞，呈不规则形态，另外有许多三倍体的生殖腺组织内含有大量的不定性细胞，可能是尚未分化的生殖细胞，分布在稀少的滤泡内及及其周围，未发现卵原细胞和精原细胞，无法根据滤泡的组织学牧场生区分雌雄，在检查的样品中未发现雄性个体，电镜下观察到了三倍体的精母细胞，细胞结构呈梭形，核开始收缩，细胞质内线粒体较发达，但与二倍体相比细胞及线粒体数量稀少，说明三倍体栉孔扇贝存在着雄性个体，生殖细胞增殖分化出精原细胞和少数初级精母细胞后即停止了发育。     

氮杂螺环酸毒素在栉孔扇贝体内的代谢规律

氮杂螺环酸毒素(azaspiracids,AZAs)隶属八大类海洋贝类毒素,为一类含氮且具独特螺环结构的聚醚类毒素。采用液相色谱-三重四级杆复合离子阱质谱,研究了分离自中国近海的1株氮杂螺环酸产毒藻腹孔环胺藻(Azadinium poporum,AZDY06)所产氮杂螺环酸毒素在栉孔扇贝体内的蓄积、分布和生物转化机制。通过将栉孔扇贝暴露产毒藻的方式,分析扇贝内脏团、裙边、闭壳肌和其他可食组织4个组织部位的AZAs及其代谢产物分布,研究栉孔扇贝对毒素的代谢机理。结果表明,AZDY06主要产生AZA2毒素,单细胞产毒能力最高为(7.05±0.52)fg/cell;扇贝12 h内摄食5×10~7个产毒藻细胞后,体内AZAs毒素含量已超欧盟安全限量,达165.3μg AZA1eq/kg,蓄积效率为78.2%。AZAs毒素在扇贝各组织间分布存在显著差异:内脏团其他可食组织外套膜闭壳肌。AZA2在扇贝中潜在转化方式为羟基化、去羧基化和氧化,共生成4种代谢产物:AZA6、AZA12、AZA19和AZA23,其中AZA19为最主要代谢产物,约占总毒素40%,其他代谢产物含量较低。本研究证明中国近海分布氮杂螺环酸产毒藻毒性危害较强,建议有关部门加快制定AZAs限量标准。     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体适宜参数的探索

采用照射强度为1500μw/cm2的紫外线对长牡蛎(Crassostrea gigas)精子照射60s,将处理后的精子分别与长牡蛎和栉孔扇贝(Chlamys farreri)的卵子进行受精试验,受精后11.5h用浓度为60mg/L的6-DMAP对栉孔扇贝受精卵分别持续处理15、20、25、30min,运用热滴片法对各实验组进行倍性检测。结果表明,长牡蛎同源单倍体组中单倍体率为75.6%;栉孔扇贝异源单倍体组中单倍体率为14.7%,最佳药物持续处理时间为20min,其二倍体率为24.1%;异源诱导栉孔扇贝单倍体组和二倍体组中胚胎均可以发育到D形幼虫期,其单倍体组中的D形幼虫率为5.0%,20min药物加倍二倍体组D形幼虫率最高为6.1%。本实验结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了诱导参数依据。     

栉孔扇贝对单细胞藻类生长间接作用的研究

采用室内实验生态学方法研究了栉孔扇贝对藻类生长的间接促进作用，结果显示，栉孔扇贝对浮游植物有明显的促长作用，并且浮游植物的增长与栉孔扇贝的密度呈正相关，符合如下模式：Y＝40．85lnX 44.87(r^2=0.979,p=0.05,n=15)。栉孔扇贝对浮游植物的促长作用随藻类种类的不同具有较大的差别，主要取决于藻类对营养盐的需求量。     

栉孔扇贝亲贝室外饲养试验

在室外塑料大棚中以自然（接种）繁殖方法，使饵料生物的总密度超过６万个细胞／ｍｌ；饲养栉孔扇贝亲贝３０天，亲贝的成活率在９６％以上，性腺成熟并产卵，亲贝的各项生物指标均明显好于自然海区。     

扇贝多肽对氧化所致胸腺细胞凋亡的影响

观察扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys ferreri)(PCF)对实验性氧化所致小鼠胸腺细胞凋亡的影响。采用台盼蓝(Trypan Blue)活细胞拒染法在普通光学显微镜下观察细胞的存活率；以四甲基氮唑盐(MTT)法测定细胞的增殖活性；以生化检测(DNA ladder)法观察PCF对细胞DNA片断化的影响；用透射电镜观察细胞的超微形态结构变化。台盼蓝染色法证实PCF能增强细胞的活性并与PCF浓度成正比；MTT法表明PCF不仅能保护细胞免受损伤，而且还能促进细胞的增殖，并有PCF依赖性；生化检测显示PCF能减少细胞凋亡的DNA片断化数目；细胞的超微结构还表明PCF能维持细胞结构的完整性。PCF可明显抑制实验性氧化损伤小鼠胸腺细胞的凋亡并有药物依赖性，而且明显优于维生素C。     

栉孔扇贝（♀）×虾夷扇贝（♂）精子入卵过程的电镜观察

采用扫描电镜和透射电镜技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri,)×虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis,)的精子入卵过程进行观察。结果表明,这2种扇贝杂交与亲本自交的精子入卵过程没有本质的区别。成熟的精卵相遇时,相互激活,产生一系列胞间反应,卵子的激活集中表现为皮层反应、受精膜举起、成熟分裂重新启动;精子激活集中表现为顶体反应和受精锥形成。在16～18℃条件下,精子入卵的时间集中在精卵混合后的第6 min。8 min后,精子的线粒体随精核一起进入卵子中。精子入卵后精核略微膨胀,卵细胞中的线粒体在精核附近出现聚集现象。杂交中有多精入卵现象。本研究目的旨为优化扇贝种间杂交技术及探讨种间受精生物学过程提供基础依据。     

虾夷扇贝EST-SSR标记在栉孔扇贝中的通用性研究

为研究虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)和栉孔扇贝(Chlamys farreri)的群体遗传多样性并分析其亲缘关系,对在虾夷扇贝中开发的60个EST-SSR位点在栉孔扇贝中的通用性进行了研究。结果显示,21个位点可在栉孔扇贝中扩增出特异性条带,通用性比例达35.00%,其中,17个位点具有多态性,多态性比例达28.33%。在虾夷扇贝和栉孔扇贝群体中,平均等位基因数(N_a)分别为2.7647和2.3529;平均有效等位基因数(N_e)分别为1.9487和1.6350;平均观测杂合度(H_o)为0.6314和0.3333;平均期望杂合度(H_e)为0.4569和0.3139;平均多态信息含量(PIC)为0.3726和0.2597;Nei's(1973)基因多样性指数(I)分别为0.4493和0.3087;Shannon信息指数分别为0.7176和0.5041;固定指数(F_(is))检测发现,7个位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;遗传分化系数(F_(st))为0.2398。本研究开发的21对通用性EST-SSR标记,为进一步开展虾夷扇贝和栉孔扇贝遗传多样性分析、分子辅助育种、基因发掘和种质资源评价奠定了基础。