两种鸡艾美耳球虫冰箱保存后的毒力观察

鸡艾美耳球虫（柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫）卵囊分成两部分处理,一部分常规冰箱保存6个月,到期后增殖1次;另一部分每月繁殖1次,为新鲜对照虫株。之后,进行致病性试验。结果显示：冰箱保存6个月后,虫株毒力明显下降,仅增殖1次不能达到新鲜虫株毒力水平。如果两种球虫卵囊冰箱保存6个月后,用于试验研究前需至少继代繁殖2次。     

强效艾美耳鸡球虫苗的免疫效果

在实验条件下,研究了强效艾美耳牌鸡球虫苗对平养鸡群的免疫效果.实验Ⅰ比较了免疫鸡群和对照鸡群在接种后1,2,3,4,5,6周的肠道病变分。结果表明免疫鸡群较自然感染建立免疫的对照鸡群的免疫整齐度高,判断依据是免疫后2周盲肠细小、内容物亦少的眼观指标。实验Ⅱ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群在攻虫后的三处肠道病变.结果表明免疫鸡群对大剂量卵囊攻击有很强的抵抗力,不免疫不用药组对相同剂量的卵囊攻击抵抗力表现不整齐,不免疫用药鸡群对攻虫没有抵抗力.实验Ⅲ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群的生长情况,结果表明免疫鸡群生长均匀(标准差小),但在接种后第7～14d 有个生长抑制期,第15～21d 有个生长代偿期,第21d 之后生长情况优于不免疫不用药组而不免疫用药组相当.三个实验的排卵囊曲线显示,免疫鸡群有两个排卵囊高峰,第一个在免疫后第5d,第二个在第12～13d.     

柔嫩艾美耳球虫田间分离株对地克珠利和盐霉素的耐药性检测

采用鸡体试验法,利用相对卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫百分数(POAA)和抗球虫指数(ACI)4项指标,测定了2株分离自如东县养殖场的柔嫩艾美耳球虫对地克珠利和盐霉素的耐药性.结果显示,2株分离株对地克珠利无耐药性或轻度耐药,对盐霉素均完全耐药.建议如东县养鸡场停用盐霉素,将地克珠利列入抗鸡球虫病药物方案中.     

柔嫩艾美耳球虫长春株的抗药性试验研究

对柔嫩艾美耳球虫长春株的抗药性进行试验研究。用最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率、相对卵囊产量和抗球虫指数4项指标进行综合判定,观察柔嫩艾美耳球虫长春分离株对氯苯胍、克球粉、地克珠利、马杜拉霉素、氨丙啉、盐霉素、莫能菌素和常山酮的抗药性。表明:柔嫩艾美耳球虫长春分离株对地克珠利和马杜拉霉素敏感,对莫能菌素轻度耐药,对克球粉和常山酮中度耐药,对氯苯胍、氨丙啉和盐霉素重度耐药。本地区防治柔嫩艾美耳球虫可合理使用地克珠利、马杜拉霉素和莫能菌素,对克球粉、常山酮慎用,氯苯胍、氨丙啉和盐霉素暂停使用。     

杨凌地区柔嫩艾美耳球虫早熟株对雏鸡免疫效果的研究

用杨凌地区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株分别免疫鸡,对免疫前后鸡体的平均增重、饲料转化率、盲肠病变记分和卵囊抑制率等指标进行了分析。结果发现,早熟株免疫组对球虫再攻击时的卵囊减少率分别为77.3%和67.6%,高于母株免疫组的41.7%和57.1%,且对同种同株球虫攻虫时的保护力优于同种不同株球虫。经2次免疫后,早熟株免疫组的鸡平均增重、饲料转化率均高于母株免疫组和对照组,而盲肠病变记分小于后者;早熟株免疫组经球虫攻击后卵囊的繁殖量明显减少,且卵囊抑制率均在91%以上。     

毒害艾美耳球虫早熟株对鸡免疫效果的评价

[目的]探讨毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)早熟株对鸡的免疫效果,为获得安全有效的鸡球虫疫苗株提供试验参考依据.[方法]取4日龄健康、体质量50～70 g鸡随机分为4组,分别为对照组、盐酸氨丙啉添加组、一免组和二免组,每组50只鸡地面饲养,试验期81 d.对照组、免疫组(免疫组包括一免组和二免组)鸡饲喂基础日粮,盐酸氨丙啉添加组鸡按照药物说明全程基础日粮加盐酸氨丙啉拌服.一免组鸡4日龄一免,剂量1 000个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊;二免组鸡53日龄二免,剂量200个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊.鸡25日龄、53日龄、74日龄时从地面饲养的各组随机抽取6只鸡移到笼上饲养,同时设置红对照组(鸡不免疫不喂药仅攻毒).笼养鸡除对照组外,其他组鸡均攻毒,攻毒方法为逐只鸡经口接种毒害艾美耳球虫亲本株(10X104个孢子化卵囊/只).肉眼观察鸡临床症状,测定鸡平均相对体增质量、小肠病变记分、小肠病变记分减少率、存活率、卵囊减少率与抗球虫指数等指标.[结果]免疫鸡攻毒后,临床观察对照组鸡精神状态良好,未出现任何异常症状;免疫组与红对照组相比精神状态良好、血便减少.不同日龄鸡(25日龄、53日龄和74日龄)攻毒后第7天,盐酸氨丙啉添加组和免疫组鸡相对体增质量均明显低于对照组但极显著高于红对照组且二免组高于一免组.免疫组鸡小肠平均病变记分均低于红对照组,小肠病变记分减少率高于红对照组,其中二免组不同日龄攻毒后鸡小肠平均病变记分均低于一免组,且74日龄鸡攻毒后小肠病变记分减少率最高.红对照组不同日龄鸡卵囊数极显著高于盐酸氨丙啉添加组和免疫组,其中免疫组53日龄鸡和74日龄鸡攻毒后卵囊数均显著高于盐酸氨丙啉添加组,卵囊减少率低于盐酸氨丙啉添加组,且二免组74日 龄鸡攻毒后卵囊减少率高达90％.免疫组不同日龄鸡抗球虫指数极显著高于红对照组,二免组不同日龄鸡抗球虫指数均高于145且高于一免组,即二免组鸡抗球虫效果达到中效水平.[结论]毒害艾美耳球虫早熟株2次免疫对鸡具有良好的保护效果,且对鸡生长发育的影响较小.     

鸡球虫混合苗免疫程序优化及在集约化鸡场的应用

研究了不同免疫程序下鸡球虫混合苗的免疫效果。结果表明,饮水接种与混料接种所获得的免疫效果无明显差别。应用1次免疫和2次免疫程序的鸡肠道病变、肠道内容物卵囊密度和增重等指标均不如应用3次免疫和4次免疫程序的结果,而3次免疫和4次免疫程序均可使鸡获得理想的保护力,效果基本一致。因此,在临床上,采用3次免疫程序最为经济有效。应用优化程序,共在集约化鸡场免疫肉鸡267．858万羽,蛋鸡33．104万羽。抽查结果表明,免疫鸡群的平均发病率为0．4％,死亡率为0％。     

鸡白介素-2对柔嫩艾美耳球虫亚单位疫苗免疫增强作用的研究

用重组TA4、鸡白介素- 2 (IL- 2 )TA4 IL- 2蛋白 ,分别对 17、2 4日龄鸡进行接种免疫 ,同时设感染非免疫、非感染非免疫组 ,于 3 1d分别给鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 10万个 /只 ,但非感染非免疫组不攻虫 ,分别观察盲肠病变积分、粪便卵囊排出数、体增重情况。结果表明 :攻虫后免疫组平均增重与感染非免疫组差异显著 ,但与非感染非免疫组无明显差别 ;卵囊排出总数检查结果为感染非免疫组是其他免疫组的 2～ 4倍 ,非感染非免疫组无虫卵排出 ;盲肠病变记分结果为感染非免疫组与其他免疫组、非感染非免疫组差异显著     

鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的构建及致病性研究

构建了一种新的鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术 ,并对杨陵柔嫩艾美耳球虫地理株进行了分离 ,对继代增殖的纯种卵囊进行了致病性试验。结果表明 ,该单卵囊分离技术简单易行 ,单卵囊感染成功率可达4 0 % ;该虫株对雏鸡有很强的致病性 ,经口接种 1× 10 5个孢子化卵囊 ,致死率高达 80 %。     

柔嫩艾美耳球虫杨凌株SO7基因的克隆表达与保护性试验

【目的】克隆鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因并进行原核表达,检测表达产物的免疫原性,为鸡球虫基因疫苗的制备奠定基础。【方法】以纯化的柔嫩艾美耳球虫杨凌(Eimeria tenella YL)株孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出E.tenella YL株的SO7基因,对其测序后进行序列分析。将SO7基因克隆到表达载体pET-32a中,构建pET-SO7重组质粒,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达出重组蛋白,将重组蛋白纯化后免疫雏鸡,评价其免疫效果。【结果】鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因序列的开放阅读框(ORF)为651个碱基,共编码217个氨基酸。E.tenella YL株SO7基因与E.tenella LS18株、E.tenella BJ株、E.tenella GD株SO7基因ORF区序列相似性分别为99.1%,98.6%和99.1%,其氨基酸序列相似性分别为99.1%,98.6%和99.1%。SDS-PAGE分析表明,表达产物成功地表达出了分子质量为45ku的融合蛋白。各种抗球虫指标的测定结果显示,该蛋白对球虫感染鸡体具有一定的保护性。【结论】SO7基因具有很强的保守性,各虫株之间差异不大;重组蛋白具有一定的保护效果,适合用来制备基因疫苗。     

利用二代测序技术对柔嫩艾美耳球虫T-DNA整合位点的分析及鉴定

为建立一种适用于转基因球虫的快速且准确的分析T-DNA整合位点的方法,本研究利用二代测序技术对转基因柔嫩艾美耳球虫EtM2e虫株进行基因组重测序分析,基于嵌合体reads比对分析T-DNA的插入位点,通过T-DNA特有序列以及外源基因与球虫同源序列的测序深度进而分析T-DNA拷贝数,最后利用PCR扩增验证分析位点。结果表明:1)二代测序下机数据过滤后获得数据7.2 Gb,Q20为96.1%,Q30为89.2%,能够比对至柔嫩艾美耳球虫参考基因组的reads数为23 992 361×2,平均测序深度为80×,reads全基因覆盖结果表明整个染色体被覆盖的较为均匀,测序的随机性比较好,可以进行后续分析;2)比对至T-DNA序列的reads数为3 106和3 036,平均测序深度为140×,嵌合体reads序列信息表明T-DNA只存在一个插入位点,位于HG994969.1:2 704 213~2 705 255;3)T载体骨架特有序列卡那抗性基因的平均测序深度为67×,T-DNA特有序列EYFP基因的平均测序深度为85×,而T-DNA与球虫同源序列His4基因的5′调控区序列的平均测序深度为154×,Actin基因的3′调控区序列的平均测序深度为164×,同源序列的平均测序约为特有序列平均测序深度的2倍,这表明T-DNA为单拷贝,与发现一个插入位点的结果相符合;4)经PCR验证分析成功鉴定了该整合位点。转基因艾美耳球虫EtM2e虫株T-DNA整合位点的鉴定为后续转基因球虫鉴定提供了技术平台,也为球虫活载体疫苗的研发提供了一个潜在的靶位点。     

鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)免疫应答的形态学观察

用柔嫩艾美耳球虫卵囊活苗对京白雏鸡进行一次免疫、二次免疫及涓滴免疫试验,对免疫后、雏鸡腔上囊、脾脏、胸腺及盲肠扁桃体等组织器官的免疫应答作了较为详细的观察。免疫后上述组织器官淋巴细胞明显增多,形成大量淋巴滤泡;通过对免疫组和对照组雏鸡上述免疫组织器官的对照检查,表明三种免疫方法免疫后腔上囊、脾脏、胸腺及盲肠扁桃体均呈现不同程度的增生,其中以涓滴免疫和二次免疫比较明显。试验结果提示,一次免疫、二次免疫及涓滴免疫均可刺激机体免疫组织器官淋巴细胞大量增生,产生有效的免疫应答反应,对强毒攻击表现有效的抵抗力。     

柔嫩艾美耳球虫杨凌株RB1-a基因的克隆表达及免疫保护性研究

【目的】对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)杨凌株RB1-a基因进行克隆与表达,检测表达产物的免疫保护性,为鸡球虫基因工程疫苗的研制奠定基础。【方法】以纯化的E.tenella杨凌株孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出其RB1-a基因,测序后进行序列分析。然后将RB1-a基因N端不含信号肽序列克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-RB1-a重组质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白,将重组蛋白纯化后免疫雏鸡,对其免疫效果进行评价。【结果】柔嫩艾美耳球虫杨凌株RB1-a基因的开放阅读框(ORF)包含618个碱基,编码205个氨基酸,与GenBank报道的柔嫩艾美耳球虫PAPa46株ORF序列相似性为99.84%,两者推导的氨基酸序列相同。SDS-PAGE分析表明,重组质粒表达分子质量为42ku的融合蛋白。免疫效果测定结果显示,RB1-a免疫组和RB1-a+佐剂免疫组的相对增重率分别为64.2%和69.4%,卵囊减少率分别达37.22%和30.56%,抗球虫指数分别为146.2和150.4。【结论】RB1-a基因具有很强的保守性,种间差异不大;RB1-a重组蛋白具有一定的免疫保护效果。     

堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子的制备及纯化试验

自实验感染堆型艾美耳球早熟减毒株卵囊的雏鸡小肠内容物中得到裂殖子悬液,在直径1.5cm、高5cm的DEAE52层析柱中,用PH7.6Tris—Hcl、以0.5～1.5ml/分钟流速洗脱纯化,得到纯净的裂殖子,回收率为50.49％～56.2％。     

堆型艾美耳球虫微线蛋白3及其结构域蛋白的免疫保护作用

[目的]本文旨在研究堆型艾美耳球虫微线蛋白3(EaMIC3)及其结构域蛋白的免疫保护作用。[方法]经原核表达和纯化获得重组蛋白EaMIC3、EaMAR3和EaMAR6,制备3种蛋白的抗血清并测其效价;分离纯化堆型艾美耳球虫卵囊。在腿部肌肉注射重组蛋白和翅静脉注射多克隆抗体血清免疫14日龄雏鸡,间隔7 d进行二免,再7 d后攻毒,评估3种蛋白抵抗堆型艾美耳球虫感染的免疫保护作用。[结果]重组蛋白免疫组和抗重组蛋白血清免疫组中,EaMIC3和EaMAR3的抗球虫指数分别为178、165和180、166,而EaMAR6的抗球虫指数分别为130、159。2种免疫方式与对照组相比,EaMIC3和EaMAR3均显示明显的免疫保护效果,且EaMIC3的免疫保护效果最好,而EaMAR6的免疫保护效果较差。[结论]结构域蛋白的免疫保护作用与其和肠上皮细胞的结合能力一致,也证明结构域蛋白在球虫入侵过程中的关键作用。     

新城疫弱毒苗不同免疫途径免疫效果的比较

近几年来,非典型新城疫仍对养殖业造成很大危害,发病鸡群产蛋率不同程度的下降,降低了养殖效益,因此,鸡群开产后新城疫弱毒苗的免疫仍是十分重要的。目前,养殖户普遍采用三种免疫方法：饮水免疫;滴鼻、点眼免疫;喷雾免疫。本试验对免疫后的鸡群进行新城疫抗体跟踪监测,比较三种免疫途径产生的不同的免疫效果。     

卫士WS-16型手动喷雾器田间应用效果初探

为验证山东卫士植保机械有限公司生产的WS-16型手动喷雾器在田间的应用效果,完善其使用技术,为大面积推广应用提供技术依据,笔者在水稻纵卷叶螟和甜瓜白粉病上进行了喷雾试验,现将试验结果报道如下.     

鸡新城疫二价油乳剂灭活苗的研制及免疫效果观察

用NDLasota弱毒株、NDV地方分离株(F基因VII型)-HD1，分别接种鸡胚，收集尿囊液，制备病毒抗原液，福尔马林灭活后按一定比例混合，与白油佐剂乳化成油包水型乳剂疫苗。对二价苗各项技术指标进行了测定，证明本疫苗安全、无副作用，接种后3周产生免疫保护，攻毒保护率为100％，接种2周后通过免疫抗体检测，NDHI抗体效价达8log2。本疫苗在河南汤阴一些种鸡场和蛋鸡场应用，获得了满意效果，有效的控制了ND的发生与流行。     

上笼产蛋鸡应用新城疫油乳剂灭活苗免疫的效果观察

鸡新城疫是对养鸡业危害较大的传染病。农户每年因此病死亡的鸡只不计其数。为控制该病发生,提高雏鸡成活率,减少经济损失,应加强对鸡新城疫的预防。     

1％威克达防治水稻纵卷叶螟效果试验及应用技术

稻纵卷叶螟是水稻上的一种食叶性害虫,该虫严重发生时,可造成田间大面积白叶,不仅使水稻严重减产,还直接影响稻米品质。近几年,宜兴地区稻纵卷叶螟危害较为严重,2005～2007年稻纵卷叶螟连续大发生,对水稻生产造成重大威胁。为尽快找出可推广应用的高效、长效的替代产品,2007年笔者对河北威远生物化工股份有限公司研制开发的1％威克达（甲胺基阿维菌素苯甲酸盐）EC进行田间小区试验,以明确威克达EC防治稻纵卷叶螟的效果,并观察其对水稻的安全性,确定其最佳使用剂量,为大面积推广应用提供依据。