1株兔肺源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药分析

为了解四川某养兔场疑似金黄色葡萄球菌感染病例的病原菌及其药物敏感性,采集兔肺脏的化脓灶样品进行细菌分离纯化、染色镜检、培养特性、生化试验、16SrDNA序列鉴定及分离菌株的药敏试验和耐药基因检测。结果表明,分离鉴定出1株对小鼠具有致病性的金黄色葡萄球菌,药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离菌株具有多重耐药性,仅对头孢哌酮、头孢拉定、头孢噻吩、哌拉西林4种药物敏感,其他15种药物均耐受。耐药基因PCR检测结果显示,meca、aac(6′)/aph(2′)、 aph(3′)-III、 ant(4′,4′′)、 plw043耐药基因呈阳性,耐药表型和基因型相一致。     

市售鲜牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

[目的]通过对石河子地区市售鲜牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性的分析,评估该区域鲜牛奶的安全性。[方法]采用稀释涂平板法分离金黄色葡萄球菌,结合接触酶、兔血浆凝固酶试验,nuc基因扩增,16S r RNA基因测序进行鉴定。同时,选用K-B纸片法测定分离菌株的耐药性。[结果]从10份样品中分离得到金黄色葡萄球菌16株。其中,47.8%的菌株表现为多重耐药,12株金黄色葡萄球菌对头孢他啶具有耐药性。[结论]样品中金黄色葡萄球菌多重耐药性严重,应该采取相应的措施加以监管。     

黄瓜生产过程中致病菌调查及耐药性分析

对黄瓜生产过程中黄瓜、土壤、基肥、灌溉用水及植株中感染沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单增李斯特氏菌的情况进行调查,结果表明,共计102批次样本中黄瓜样品、植株及土壤中各检出一株大肠杆菌,植株中检出一株金黄色葡萄球菌。对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌进行8大类13种抗生素的药敏试验,结果表明,土壤中大肠杆菌为敏感菌株且对13种抗生素均敏感,植株中大肠杆菌仅对氨曲南耐药,黄瓜中大肠杆菌对氨苄西林、哌拉西林、氯霉素和四环素耐药,为多重耐药菌株;植株中金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素、克林霉素及磺胺甲噁唑耐药,为多重耐药菌株。     

新疆乌鲁木齐市宠物源葡萄球菌耐药性及其相关耐药基因的检测

为了解新疆乌鲁木齐市宠物源葡萄球菌对临床常用抗菌药物的耐药情况及携带耐药基因的情况,采用琼脂稀释法对乌鲁木齐市某宠物医院分离鉴定的154株宠物源葡萄球菌进行临床常用10种抗菌药物耐药性检测,并用PCR方法检测葡萄球菌9种耐药基因:喹诺酮类(norA)、大环内酯-林可胺类(ermB)、四环素类(tetA、tetM)、β-内酰胺类(mecA、femA)和氟苯尼考类(cfr、fexA和fexB)。耐药性检查结果表明葡萄球菌对苯唑西林、四环素、左氧氟沙星和氟苯尼考的耐药率在50%以上,宠物源葡萄球菌多重耐药集中在4~5类,且耐药谱型多样化。基因检测结果显示fexA(31.2%)基因的检出率最高,其次是ermB(26.7%),未检出cfr、fexB和tetA基因。新疆乌鲁木齐市宠物源葡萄球菌普遍存在耐药和多重耐药情况,其中氟苯尼考耐药基因fexA检出率最高,揭示宠物源葡萄球菌耐药情况严重,应根据药敏试验及基因检测结果,合理选用抗菌药物,并加强对耐药菌的监测。     

体外诱导耐药及相关基因检测

[目的]了解常见致病菌产生耐药性后耐药基因和毒力基因的变化。[方法]采用微量肉汤二倍稀释法测定21种临床常见抗生素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等5种标准菌株的最小抑菌浓度，选取敏感药物进行体外诱导耐药试验，采用PCR法检测耐药基因和毒力基因。[结果]5个标准菌株均对氨基糖苷类药物敏感；大肠杆菌对四环素类药物敏感；鼠伤寒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎链球菌对喹诺酮类药物敏感；金黄色葡萄球菌对克林霉素敏感。与标准菌株相比，氨基糖苷类和四环素类耐药菌株中均检测出新出现的相关耐药基因；喹诺酮类耐药基因parE在多杀性巴氏杆菌的标准菌株和耐诺氟沙星菌株中检测出，gyrB基因仅在肺炎链球菌的标准菌株和耐氧氟沙星菌株中检测出。在大肠杆菌中均检测出CS31A毒力基因，此外标准菌株中检测出fimH基因，耐多西环素菌株中检测出afa基因；多杀性巴氏杆菌标准菌株未检测出毒力基因，耐药菌株中均检测出oma87和tbpA基因；而鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌仅在标准菌株中检测出毒力基因。[结论]说明氨基糖苷类抗生素更容易诱导菌株产生耐药基因，而毒力基因与耐药基因无明显的相关性。细菌获得耐药性后，其毒力...     

鸡源金黄色葡萄球菌耐药性分析

采用药敏纸片扩散法,测定48株鸡源金黄色葡萄球菌对常用的19种抗菌药物的耐药性,检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).结果表明:所有菌株除对万古霉素、头孢西丁和头孢唑啉100%敏感以外,对其他16种药物均产生不同程度的耐药性,其中耐药率较高的有四环素、强力霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星及克林霉素,耐药率最低的为头孢噻肟、阿米卡星、复方新诺明及利福平.100%的菌株呈多重耐药,分离菌株最少耐受4种药物,最多耐受12种药物,未检测出耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌.     

金黄色葡萄球菌多药耐药基因norA的克隆及其原核表达

按金黄色葡萄球菌多重耐药转运蛋白NorA的编码序列设计引物，以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，扩增出norA基因中1155bp cDNA片段，将所得片段与pMD18-T载体连接，转化到感受态大肠杆菌JM109中，成功地筛选到阳性克隆，其质粒测序结果与文献报道一致。从阳性克隆中提取质粒，经Nde Ⅰ和XhoⅠ酶切，回收1155bp目的片段，定向克隆到pET28a（＋）表达载体中，转化感受态大肠杆菌DH5a，提取质粒，再次转化到BL21（DE3）中，成功地筛选到阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌，通过SDS-PAGE检测出norA基因的表达。     

新疆牛源金黄色葡萄球菌抗菌素敏感性调查

[目的]了解新疆奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,为该病治疗的临床用药提供参考。[方法]2009年以来对乌鲁木齐市、昌吉、呼图壁、奎屯、伊犁和库尔勒6地区16个奶牛养殖场乳房炎奶样分离金黄色葡萄球菌,用纸片扩散法进行抗菌素敏感性检测。[结果]共分离143株金黄色葡萄球菌,临床药敏试验显示,新疆70%以上分离株对红霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,40%的菌株对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素耐药;并且67.1%菌株同时对5种以上抗菌素耐药,10.5%的菌株对所测试的10种抗菌素耐药。此外,发现了19.6%的牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。[结论]新疆奶牛乳房炎病例中的金黄色葡萄球菌对当前临床上允许使用的多种类型的抗菌素呈现严重的多重耐药,使用抗菌素进行奶牛乳房炎的防治难以取得理想的疗效。这类菌株的存在和蔓延将对新疆奶牛养殖业的健康发展和奶制品的安全构成威胁,建议在选择奶牛乳房炎治疗的抗生素时,应以流行菌株的耐药性为依据。     

生牛乳中金黄色葡萄球菌的耐药性研究

为调查山东省生牛乳中金黄色葡萄球菌的耐药性情况,本研究采集山东省6个不同地区的130份生牛乳样品,进行金黄色葡萄球菌的分离、鉴定及耐药表型分析。结果表明,共有57份样品判定检出金黄色葡萄球菌,平均检出率为43.85%。对57份样品进行8大类12种抗生素的药敏试验,结果表明对青霉素的耐药率最高,为87.72%,同时对氨苄西林、红霉素和克林霉素的耐药率也达到较高水平,分别为84.21%、78.95%和56.14%。另外,57株金黄色葡萄球菌中有50株为多重耐药菌株,其中以耐3种药物与耐5种药物的菌株数最多,且耐药谱种类较多,受地区差异影响较大。该结果可为山东地区奶牛业规范使用抗生素提供一定参考。     

牛源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）;再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和头孢唑林的敏感性高于90%,2株细菌的万古霉素MIC≥16 μg•mL-1;其中8株细菌的苯唑西林MIC≥8 μg•mL-1,而其它菌株的苯唑西林MIC≤2 μg•mL-1;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种及3种以上药物的菌株占84.21%,其中4株细菌能同时耐受9种不同抗菌药物;16（42.11%）株细菌被检测携带mecA耐药基因,而仅有其中7株的苯唑西林MIC≥4 μg•mL-1;头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐琼脂筛选法分别检出7株、10株和7株表型为MRSA的菌株。【结论】分离菌株的耐药性和多重耐药现象较为严重,被调查地区奶牛场中已经存在MRSA和OS-MRSA感染情况,且感染率高。     

拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌的鉴定及其耐药性分析

[目的]明确西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌常见肠毒素(SEs)基因分布特征及其多重耐药性,为牦牛肉源产SEs金黄色葡萄球菌的快速鉴定及其防控提供科学依据.[方法]通过Baird-Parker显色培养筛选及Nuc基因扩增鉴定从拉萨市牦牛肉样品中分离获得金黄色葡萄球菌,利用PCR鉴定分析金黄色葡萄球菌中9种常见SEs基因的分布特征,并采用K-B纸片扩散法对产SEs金黄色葡萄球菌进行多重耐药性分析.[结果]从100份牦牛肉样品中分离获得29株金黄色葡萄球菌,其SEs基因鉴定结果表明,9种SEs基因检测出6种(SEB、SEC、SEE、SEG、SHE和SEI),有3种(SEA、SED和SEJ)未检出.其中,SEG基因检出率79.31%,SEC和SEI基因检出率均为68.97%,SEB基因检出率55.17%,SHE基因检出率51.72%,SEE基因检出率3.45%.29株金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、氨苄西林(AMP)、克拉霉素(CLR)、红霉素(E)和磺胺甲恶唑(SMZ)的耐药率较高,分别为79.31%、65.52%、58.62%、51.73%和31.04%;对阿米卡星(AK)、替卡西林(TIM)、苯唑西林(OX)、环丙沙星(CIP)和四环素(TE)的耐药率较低,分别为10.35%、6.90%、3.45%、3.45%和3.45%;对头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(CN)和氯霉素(C)尚未产生耐药性.29株金黄色葡萄球菌共表现出13种耐药谱,多重耐药率高达93.1%(27/29),其优势耐药谱为AMP/P、SMZ/CLR/E和AMP/P/CLR/E.[结论]西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌含有SEG、SEC、SEI、SEB、SEH和SEE等多种SEs基因,且对青霉素类、大环内酯类和磺胺类等多种抗菌药物已产生较强的耐药性.     

泰安郊区肉鸡金黄色葡萄球菌耐药性分析

对肉鸡金黄色葡萄球菌耐药性进行分析,结果表明,该菌株对中药黄连和抗生素头孢唑啉、替米考星药敏纸片表现为极度敏感;对中药黄芩、大青叶和抗生素恩诺沙星、氯雾素、卡那霉素、痢特灵药敏纸片高度敏感;对链霉素和环丙沙星药敏纸片中度敏感;对板蓝根、四环素、庆大霉素以及白头翁、红霉素、青霉素等表现为低度敏感或耐药。     

中草药提取物与酶复合物对牛乳房炎病原菌的抑菌效果

对广西壮族自治区某奶牛场的临床型乳房炎病牛奶样中分离鉴定的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和无乳链球菌进行12种常用抗生素的药敏试验和中草药提取物与酶复合物体外抑菌研究.结果表明,引起奶牛乳房炎的3种病原菌对青霉素类药物有耐药性,而对庆大霉素、头孢类、环丙沙星等药物敏感.通过正交试验筛选出的中草药提取物与酶的最佳复配物(复配物I)对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和无乳链球菌有明显的抑菌效果,抑制作用较强,其最低杀菌质量浓度(MBC)分别为7.82、31.25和62.50 g/L,抑菌环直径分别为(23.4±0.2)、(14.2±0.1)和(14.5±0.1)mm.     

26种中草药醇提液对金黄色葡萄球菌的抑制效果

[目的]研究26种中草药醇提液对金黄色葡萄球菌的抑制作用。[方法]用无水乙醇制备26种中草药的醇提液,然后对金黄色葡萄球菌进行抑菌试验,筛选出抑菌效果好的中草药。[结果]大黄、甘草、长青叶、独活和山萸肉的醇提液对金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,其中大黄的抑菌效果最好,对金黄色葡萄球菌的MIC值为1.9 mg/ml;其次为长青叶提取液,其MIC值为250 mg/ml。[结论]大黄对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好,具有一定的实用价值。     

中国部分地区猪源和牛源金黄色葡萄球菌耐药性及凝固酶分型研究

【目的】了解中国动物源金黄色葡萄球菌的耐药现状,以及凝固酶血清型和基因型分布情况,为控制动物源金黄色葡萄球菌的传播和流行提供理论依据。【方法】用微量肉汤稀释法测定细菌耐药性;用凝固酶分型血清确定血清型别;扩增凝固酶基因（coa）并进行序列测定,用mega软件进行序列分析。【结果】共鉴定出124株金黄色葡萄球菌。耐药性检测结果表明,在13种测试抗菌药中,金黄色葡萄球菌对氨苄西林和青霉素的耐药率最高,接近100%,其次是红霉素75%,其它10种药物的耐药率在50%以下,头孢西丁耐药率27%,未发现万古霉素耐药菌株;凝固酶血清分型率达91%,共分出6个型,VII型,VI型和复合型占优势,未分离到Ⅲ型和Ⅴ型;扩增凝固酶基因,共分为6个基因型;构建了凝固酶基因的系统进化树。【结论】中国动物源金黄色葡萄球菌的耐药状况比较严重,猪源菌株的耐药率要高于牛源菌株。凝固酶血清型别多样,分布相对较集中,具有独特的流行特征;凝固酶表型与其基因的进化特征并没有出现直接对应关系,但为进一步开展兽医临床金黄色葡萄球菌分子流行病学调查研究奠定了理论基础。     

32种中草药抑菌活性的比较研究

[目的]研究连翘（FRUCTUS FORSYTHIAE）、黄连（RHIZOMA COPTIDIS）和刺五加（RADIX ET RHIZOMA SEU CAULIS ACAN-THOPANACTS SENTICOSI）等32味中草药提取物的抑菌作用。[方法]利用95%乙醇提取药物的有效成分,以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法测定中草药提取物的抑菌作用。[结果]32种中草药中,虎杖等26种中草药提取物对金黄色葡萄球菌具有抑制作用;连翘等23种中草药提取物对大肠杆菌具有抑制作用,且抑菌效果在一定浓度范围内随药液浓度的增大而增强。其中,连翘和黄连对大肠杆菌的最低抑菌浓度分别是4和10 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别是6和8 mg/ml。[结论]虎杖和连翘分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较好的抑制效果。     

夹竹桃叶提取物抑菌活性的初步研究

[目的]为了研究夹竹桃叶提取物的抑菌活性并为其合理开发提供参考。[方法]采用二倍稀释法,以大肠埃希氏菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、八叠球菌为供试菌种,研究了不同浓度的夹竹桃叶乙醇提取液的抑菌作用。[结果]3种浓度的夹竹桃叶乙醇提取液对6种供试菌有不同程度的抑制作用,70%乙醇提取液的抑菌作用最明显且对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。70%乙醇提取液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌和八叠球菌的最低抑菌浓度均为0.25g/ml,对普通变形杆菌为0.50g/ml。[结论]不同浓度的乙醇夹竹桃叶提取液对6种供试菌种有着不同程度的抑制作用,其中70%乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果最明显。这可能与提取液所含有的活性成分的含量及种类有关。     

牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

研究金黄色葡萄球菌的耐药性状况,指导兽医临床用药。采用高盐甘露醇进行纯化培养,梅里埃全自动微生物分析系统对葡萄球菌鉴定板进行鉴定,纸片扩散法进行药敏实验。从阳性乳房炎样品中分离纯化并鉴定了样品中的金黄色葡萄球菌2株,测定了其耐药性。在选取的5种药物中,青霉素对分离病原菌的抗菌活性较高,其次是恩诺沙星和庆大霉素,而链霉素和磺胺嘧啶钠对分离病菌的抗菌活性较低。     

金黄色葡萄球菌FnBP配体结合区基因的克隆及其原核表达(英文)

[Objective] The study aimed to clone the FnBP ligand binding gene of Staphylococcus aureus and run prokaryotic expression by constructing a prokaryotic expression vector. [Method] The gene encoding FnBP ligand binding gene was amplified from S.aureus chromosomal DNA by PCR technique. After T-A cloning, plasmid pMD18- FnBP was constructed. pMD18- FnBP and pET28a(+)were digested by BamH Ⅰ and EcoR Ⅰ double enzymes, then the purified FnBP ligand binding gene was subcloned into the expression vector pET28a(+), and the prokaryotic expression vector pET28a-FnBP was thus constructed. The constructed plasmid pET28a-FnBP was transformed into Escherichia coli BL21(DE3) competent cells. The bacterium was induced by IPTG and the expressed products were analyzed by SDS-PAGE and Western blot. [Result] The gene fragment with the length of 370 bp was amplified by PCR approach. One approximately 30 kD exogenous protein was observed in SDS-PAGE analysis. Western blot analysis indicates the protein has antigenicity of S.aureus. [Conclusion] The FnBP ligand binding gene of S.aureus was successfully cloned and expressed in prokaryotic cells.