硫酸化20(S)-人参皂苷Rh_2对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ的影响

为了进一步评价硫酸化修饰后人参皂苷Rh2的免疫活性变化,试验分别采用MTT法和ELISA法对比研究了浓度为0.2 mg/L、1 mg/L、5 mg/L的人参皂苷Rh2及其硫酸化衍生物(S-Rh2-1和S-Rh2-2)对ConA刺激小鼠的脾淋巴细胞增殖和分泌IL-4、IFN-γ的影响。结果表明:S-Rh2-1为0.2 mg/L、5 mg/L,S-Rh2-2为1 mg/L,Rh2为5 mg/L时能显著或极显著抑制由ConA引起的脾淋巴细胞增殖(P<0.05或P<0.01);S-Rh2-2为1 mg/L、5 mg/L,Rh2为0.2 mg/L、5 mg/L时能显著或极显著抑制由ConA引起的脾淋巴细胞分泌IL-4的量(P<0.05或P<0.01);S-Rh2-1、Rh2的3个试验浓度以及S-Rh2-2为0.2 mg/L、1 mg/L时都能极显著抑制由ConA引起的脾淋巴细胞分泌IFN-γ的量(P<0.01)。说明Rh2进行硫酸化修饰后其免疫活性在一定程度上得到了增强。     

人参皂苷-Rh2的硫酸化衍生物鉴定及其对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

为了评价硫酸化修饰后人参皂苷-Rh2的活性变化,利用薄层色谱、红外光谱及质谱鉴定所用Ⅱ a、Ⅱb为人参皂苷-Rh2的硫酸化衍生物,并探讨了人参皂苷-Rh2及其硫酸化衍生物Ⅱa、Ⅱ b对小鼠的巨噬细胞吞噬中性红和在LPS刺激下分泌TNF-α量的影响.结果显示,衍生物Ⅱ a、Ⅱ b在1 mg/L时均能显著促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性(P＜0.05),Rh2在0.2mg/L和5mg/L亦可显著促进巨噬细胞吞噬中性红(P＜0.05).Ⅱa 0.2、5 mg/L时,Ⅱb在为5 mg/L时其在LPS的协同作用下能极显著促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α(P＜0.01),而Rh2在5mg/L表现出极显著的抑制 LPS促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α作用(P＜0.01).结果提示,Rh2硫酸化修饰后对巨噬细胞的功能有显著增加作用.     

人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理

以不同质量浓度的人参皂苷Rh2与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用,并通过流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理.结果显示:人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖存在押制作用,并呈剂量依赖性,人参皂苷Rh2与MSB-1细胞培养72 h后的半敷抑制质量浓度为0.65 mg/L;流式细胞术测定表明,人参皂苷Rh2可阻滞MSB-1细胞于S期;荧光检测和透射电镜观察表明,人参皂苷Rh2可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡.     

人参皂苷Rh2硫酸化衍生物抗炎作用的分子机制

通过构建的细菌脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞（RAW264．7）的体外炎症模型,研究了不同质量浓度人参皂苷Rhz硫酸化衍生物B2（Rh2-B2）对TNF-a、IL-6、IL-1β和IL-10合成的影响,以及对NF-kB信号通路的影响。结果显示,1mg／L和5mg／L的人参皂苷Rh2-B2能显著抑制RAW264．7合成TNF-a、IL-6和IL-18（P〈0．01）,同时显著促进IL-10的合成（P〈0．01）,并且通过显著抑制IkBa的降解而阻止NF-kB／p65易位入核（P〈0．01）。结果表明,人参皂苷Rh2—B2可能通过阻断NF-kB信号通路,抑制LPS诱导的炎性细胞因子的产生,进而发挥其抗炎作用。     

硫酸化20（S）-人参皂苷Rh2体外对鸡免疫活性细胞功能的影响

为了评价硫酸化人参皂苷Rh2化学修饰前后免疫活性变化，采用MTT法及流式细胞术研究体外对ConA促鸡外周血淋巴细胞增殖的影响，采用乳酸脱氢酶释放法研究体外对鸡外周血NK细胞杀伤活性的影响。结果表明：Rh2、Rh2溶剂及硫酸化Rh2低浓度时都能促进淋巴细胞增殖，高浓度时能抑制淋巴细胞增殖，Rh2溶剂及硫酸化Rh2都显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）高于同浓度的Rh2。Rh2及Rh2溶剂都能显著促进鸡外周血NK细胞杀伤活性，但Rh2极显著（P〈0．01）低于同浓度Rh2溶剂，而硫酸化Rh2表现一定促进作用。结果提示：Rb2体外能抑制免疫活性，化学修饰后的硫酸化Rh，体外能促进免疫活性。     

硫酸化人参总皂苷体外对免疫活性细胞功能的调节

采用MTT法及形态学观察法研究4种硫酸化人参总皂苷衍生物对体外ConA促淋巴细胞增殖、转化的影响,并采用乳酸脱氢酶释放法探讨了其对NK细胞杀伤活性的影响.结果表明,人参总皂苷对淋巴细胞增殖影响不明显,较高质量浓度(>150 mg/L)能抑制淋巴细胞增殖(P<0.01);硫酸化人参总皂苷衍生物2、3在一定质量浓度下都能明显或极明显增加淋巴细胞(鸡的外周血淋巴细胞,小鼠脾淋巴细胞)增殖活性(P<0.05,P<0.01),且所试质量浓度硫酸化人参总皂苷衍生物的D值显著或极显著高于同质量浓度人参总皂苷(P<0.05.P<0.01);人参总皂苷、衍生物2、3都能提高小鼠NK细胞的活性(P<0.01),且衍生物2、3的作用比人参总皂苷更强(P<0.05,P<0.01).结果提示,人参总皂苷经硫酸化修饰后,在体外能明显增强免疫活性细胞功能.     

人参总皂苷及其衍生物对小鼠淋巴细胞和NK细胞免疫活性的影响

为了提高人参总皂苷的生物学活性,对其进行了硫酸化修饰,并探讨总皂苷及其衍生物对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖（MTT法）和NK细胞杀伤活性（乳酸脱氢酶释放法）的影响。结果表明,2种衍生物质量浓度在50～500 mg/L时可以促进小鼠脾T、B淋巴细胞的分化增殖和NK细胞对YAC-1的杀伤作用,质量浓度较高时促进作用明显优于总皂苷;衍生物质量浓度达到1 400 mg/L时,仍然可以显著促进T淋巴细胞的增殖。试验结果提示,人参皂苷的这种衍生物有可能成为一种毒副作用较小、免疫活性更强的药物。     

硫酸化人参总皂苷的制备及其对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响

用氯磺酸-吡啶试剂制备了硫酸化人参总皂苷衍生物，采用红外光谱仪检测到制备的硫酸化人参总皂苷衍生物中在1230cm^-1和810cm^-1有硫酸酯键的特征吸收峰。为了初步探讨硫酸化人参总皂苷的免疫学活性．以MTT法测定了人参总皂苷及其衍生物对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响。结果表明，150μg／m1人参总皂苷和衍生物均能显著抑制鸡外周血淋巴细胞的增殖（P〈0．05），10μg／ml的衍生物能极显著促进淋巴细胞增殖，与同浓度人参总皂苷相比活性极显著增强（P〈0．01）。实验结果提示，对人参总皂苷进行硫酸化修饰是可行的，经硫酸化后人参总皂苷衍生物的免疫活性明显增强。     

硫酸化人参总皂苷对人工感染MDV鸡淋巴细胞活性的调节

鸡马立克氏病病毒（MDV）经腹腔注射感染8日龄雏鸡,攻毒15 d后检测硫酸化人参总皂苷对鸡外周血白细胞数和淋巴细胞增殖活性的影响,并利用半定量RT-PCR方法分析外周血淋巴细胞IFN-γmRNA的表达水平。结果表明,MDV感染能引起鸡淋巴细胞百分比相对增多（P〈0.01）,人参总皂苷及其硫酸化人参总皂苷不能改变MDV所致变化（P〉0.05）,且硫酸化人参总皂苷与人参总皂苷之间没有差异（P〉0.05）;MDV感染极显著抑制淋巴细胞增殖（P〈0.01）,人参总皂苷能明显改善MDV对感染鸡淋巴细胞增殖的抑制（P〈0.01）,硫酸化人参总皂苷促进了MDV所致的抑制状态（P〈0.01）;人参总皂苷及其硫酸化人参总皂苷均能增强MDV所致鸡淋巴细胞IFN-γmRNA的表达,与健康组相比,硫酸化人参总皂苷极显著增加IFN-γmRNA表达（P〈0.01）。结果提示,硫酸化人参总皂苷对人工感染MDV鸡的淋巴细胞活性具有调节作用,其作用比人参总皂苷的作用更强。     

人参总皂苷硫酸化修饰及分析

文献表明糖链在人参皂苷(ginsenoside,GS)的构效关系中占有重要地位[1],一些学者发现GS酶解后生成的脂肪酸酯类化合物[2-3]具有更强抗癌活性,本课题前期工作证实对人参总皂苷(TSPG)进行硫酸(酯)化修饰是可行的,且TSPG经硫酸化修饰后体外对淋巴细胞的增殖活性有促进作用.     

高效液相色谱法测定人参皂苷复乳中人参皂苷含量

将人参皂苷与复乳佐剂结合,制成W/O/W型人参皂苷乳免疫增强剂。利用HPLC对人参皂苷复乳中3种单体成分检测条件进行筛选,确定最佳条件。液相色谱法检测结果表明,人参皂苷浓度为0.5 mg/m L复乳中每毫升含人参皂苷Rg1 17.82~23.68μg、人参皂苷Re 27.82~33.68μg、人参皂苷Rd 16.82~23.08μg,均符合药典对人参皂苷Rg1、Re和Rd的含量要求。说明建立的检测方法稳定可行,可有效控制人参皂苷复乳佐剂注射液的质量。     

硫酸酯化酵母β-葡聚糖抗H1N1猪流感病毒作用及对神经氨酸酶活性的影响

研究硫酸酯化酵母β-葡聚糖对H1N1猪流感病毒的体外抑制作用及对神经氨酸酶活性的影响。采用细胞感染模型,应用MTT法检测药物对MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),并结合神经氨酸酶抑制试验检测药物对其活性的影响。结果表明,硫酸酯化酵母β-葡聚糖对MDCK细胞最大无毒浓度为5.34 mg/m L,其半数抑制浓度(IC50)为0.58 mg/m L,治疗指数(TI)为18.0;当药物浓度≥1.25 mg/m L时,能明显降低H1N1猪流感病毒神经氨酸酶的活性。提示硫酸酯化酵母β-葡聚糖有确定的体外抑制H1N1猪流感病毒的作用,并能影响病毒神经氨酸酶的活性。     

绞股蓝开发应用概况

绞股蓝又名七叶胆、五叶参、小苦药、苷茶蔓，味苦、微甘，性寒，有清热解毒、止咳祛痰功效。现已从绞股蓝中分离出83种与人参皂苷有类似骨架的绞股蓝皂苷，均为四环三萜达玛烷型，主要是20（S）-原人参二醇和2d-羟基-20（S）-原人参二醇，有6种皂苷与人参皂苷结构相同。绞股蓝为五加科以外罕见的含人参皂苷的植物。绞股蓝皂苷只含二醇组皂苷而无三醇组皂苷，故无人参皂苷作用的双重性。绞股蓝还含多种对人体有益的黄酮、维生素、氨基酸。     

复方人参皂苷纳米乳的制备及其急性毒性研究

利用纳米化技术,将人参皂苷和盐酸左旋咪唑组成复方人参皂苷纳米乳,对其组成和急性毒性进行研究。利用伪三元相图筛选出用于制备复方人参皂苷纳米乳的空白纳米乳;研究不同含药量纳米乳对免疫抑制小鼠脾T淋巴细胞增殖的影响,根据免疫增强作用较强的含药纳米乳,确定复方人参皂苷纳米乳的组成;分别用透射电镜、激光粒度仪和小鼠灌胃试验对其形态、粒径和急性毒性进行研究。结果显示,确定的复方人参皂苷纳米乳组成:Solutol?HS-15、甘油、PEG400、IPM、蒸馏水,其质量比为25.33∶10.14∶2.53∶6∶56,GS和LH含量均为30mg·mL-1;它是黄色透明O/W纳米乳,液滴呈球形,平均粒径为23.08nm,粒度分散指数为0.237,小鼠灌胃LD50为402.85mg·kg-1。本试验成功制备了复方人参皂苷纳米乳,为进一步开发纳米化免疫增强剂提供了依据。     

不同炮制方法对人参皂苷含量及肝癌细胞凋亡的影响

为了探讨不同炮制方法对人参皂苷含量及肝癌细胞凋亡的影响,采用HPLC法测定人参液中单体皂苷Rg1、Re、Rb1(三者合为总皂苷)和稀有皂苷Rg3的含量;MTT法检测不同人参提取液对人肝癌细胞HepG2的抑制率,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果表明,在人参炮制过程中,人参总皂苷含量由0.56%下降到0.13%,稀有皂苷Rg3含量由0.17%增加到0.30%;抑制率检测结果表明,浓度为28.8 g/L时3种提取液对细胞的抑制作用最强,黑参组对肝癌细胞的抑制作用高于人参组和红参组;凋亡实验发现,黑参提取液对细胞的促进凋亡作用明显,人参提取液的促凋亡作用不明显。表明红参和黑参提取液可以抑制人肝癌细胞HepG2增殖并促进其凋亡,可能与参液中的稀有皂苷Rg3含量有关。     

苯酚-硫酸法测定硫酸酯化酵母葡聚糖含量

参照相关多糖含量的测定方法,以葡萄糖为标准品,应用苯酚-硫酸法对硫酸酯化酵母葡聚糖含量测定的方法进行了研究.该方法在0.010 mg/mL～0.500 mg/mL范围内呈良好的线性关系,线性方程为y=2.025x+0.198 6,R2=0.991 6.另外,还对本方法的重复性、回收率和稳定性等方面进行了试验.结果表明,...     

液质联用法检测田七花总皂苷中人参皂苷Rb_1含量的研究

为了测定田七花总皂苷中人参皂苷Rb1的含量,试验采用HPLC-MS/MS分析方法,以BDS HYPERSUL C18(150 mm×2.1 mm,5μm)柱为色谱柱;乙腈-水(梯度洗脱)为流动相;柱温为30℃;检测模式为多反应离子监测模式(MRM),用于定量分析的对照品离子对为人参皂苷Rb1(m/z1 107.9→783.7),内标物紫杉醇(m/z 852.5→525.3)。结果表明:人参皂苷Rb1标准曲线的线性范围为0.159~16.0μg/m L,精密度和准确度等均符合样品分析要求。说明该方法准确、灵敏、特异性强,适用于田七花总皂苷及其制剂中人参皂苷Rb1浓度的检测。     

田七须根总皂苷的提取工艺研究

为了建立田七须根中皂苷含量的检测方法,并优化其提取工艺,试验以皂苷含量为检测指标,采用香草醛-高氯酸方法测定三七须根中皂苷的含量,并用回流提取法进行提取。结果表明:人参皂苷Rg1在0.008 3~0.049 8 mg/m L范围内呈良好线性关系(R=0.999 4),平均回收率为101.2%(n=4),变异系数RSD为2.6%;最佳提取工艺条件:以80%的乙醇为提取溶剂,采用回流提取方法提取3次,第1次提取2 h,第2,3次各1.5 h。该测定方法简便,精密度、准确度高,重复性好,提取工艺经济、合理,可加以推广和应用。     

普鲁卡因青霉素-硫酸双氢链霉素混悬液在猪体内的药物动力学

健康长白猪7头,按拉丁方试验设计,进行单剂量静脉注射青霉素(20 000单位/kg体重)钠、硫酸双氢链霉素(20 000单位/kg体重)及肌肉注射普鲁卡因青霉素-硫酸双氢链霉素混悬剂(20 000单位/kg体重)的药物动力学研究。HPLC法和HPLC-MS/MS法分别测定血浆中的青霉素和双氢链霉素浓度,WinNonlin软件处理血药浓度-时间数据。静脉注射青霉素钠、硫酸双氢链霉素的药时数据最佳模型为三室开放模型。肌肉注射混悬剂后青霉素G的药时数据符合一级吸收一室模型。主要药物动力学参数:t1/2ka为0.66 h,t1/2β为5.80 h,t(max)为2.3 h,C(max)为1.66 mg/L,AUC为17.65,CL为0.69 L/h.kg,F为70.57%;肌肉注射混悬剂后双氢链霉素数据符合一级吸收二室开放模型,主要药动参数:t1/2ka为0.21 h;t1/2α为2.06 h;t1/2β为8.22 h,t(max)为0.8 h,C(max)为51.42 mg/L,AUC为280.74,F为101.96%。肌肉注射混悬液药物动力学特征为青霉素G吸收迅速,消除缓慢;双氢链霉素吸收迅速完全,消除缓慢,生物利用度高。     

人参皂苷Rh2对肿瘤细胞的诱导分化作用研究进展

诱导分化（Induction of differentiation，IOD）是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下，向成熟或接近成熟的细胞分化。目前，恶性肿瘤的诱导分化治疗已成为肿瘤生物学和肿瘤治疗学的研究热点和前沿领域，其中，寻找低毒高效的分化诱导剂是肿瘤诱导分化治疗的关键。人参皂苷Rh2是人参所含活性成分之一，具有较强的抗肿瘤活性。各国学者先后通过多种体内外试验证实，Rh2通过诱导肿瘤细胞分化或凋亡，抑制多种肿瘤细胞的生长，而对正常细胞的毒性甚低。笔者仅对人参皂苷Rh2诱导肿瘤细胞分化的研究做一综述。