三种炎症因子在致炎大鼠乳腺组织中的表达

为探明在酯多糖（LPS）致炎的大鼠乳腺中,黏附因子-1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）表达分布的变化。取产后5 d乳房注射LPS致炎大鼠的乳腺组织,及LPS致伤的体外培养大鼠乳腺MVECs（Microvascular Endothelial Cells）,采用免疫组化方法检测ICAM-1、TNF-α和IL-1β的表达。结果表明：LPS处理大鼠乳腺后4~24 h内,乳腺组织切片试验和体外培养大鼠乳腺微血管内皮细胞（Rat MammaryMicrovascular Enclothelial Cells,RMMVECs）试验中ICAM-1和IL-1β的表达逐渐增强,TNF-α在乳腺组织切片试验中6 h表达显著增强,之后则逐渐减弱。在体外培养RMMVECs中-α表达逐渐增强。表达部位主要在乳腺上皮细胞和血管内皮细胞,IL-1β在腺泡腔中的白细胞中也有表达。由此可见,LPS处理大鼠乳腺后ICAM-1、TNF-α和IL-1β这三种细胞因子均参与了乳腺炎症过程中的免疫反应。     

Identification of a juvenile hormone-like compound in a crustacean

Juvenile hormone (JH) has central roles in the regulation of insect development and reproduction but has not previously been identified in other arthropod classes. The hemolymph of a crustacean, Libinia emarginata (Leach), has now been analyzed for JH-like compounds. Samples contained 0.003 to 0.030 nanogram of JH III per milliliter and 10 to 50 nanograms of methyl farnesoate per milliliter; methyl farnesoate is a compound structurally related to JH III that has JH bioactivity. Several tissues were examined for synthesis and secretion of JH-like compounds. Of these tissues, only the mandibular organs produced and secreted JH III and methyl farnesoate. However, microchemical analysis revealed that this JH III was racemic, and thus likely an artifactual oxidation product of methyl farnesoate. Secretion of methyl farnesoate was related to reproduction in females, with the highest rates observed in Libinia near the end of the ovarian cycle when oocyte growth and vitellogenesis are greatest. These results indicate that JH-like compounds such as methyl farnesoate have regulatory roles in crustaceans.     

大鼠不同时期乳腺组织及血清中孕激素变化规律

探讨大鼠不同时期乳腺组织及血液中孕激素（P）变化规律。选择雌性SD大鼠42只,分为7个时期,每个时期6只：分别为处女期,妊娠第6天、12天、18天,泌乳第6天、12天、18天。分别处死大鼠取乳腺组织及血清,通过放射免疫检测不同时期孕激素含量。结果表明血清中：处女期P含量最低,妊娠后呈现上升趋势,其中妊娠18d与各个时期差异显著（P〈0．05）;泌乳后又呈现下降趋势。7个时期中处女期与其它6个时期差异显著（P〈0．05）;乳腺组织：7个时期整体呈下降趋势,并且处女期与妊娠、泌乳整个时期差异显著（P〈0．05）。结果显示：孕激素在乳腺细胞发育、启动和维持泌乳方面发挥重要作用。     

山羊乳腺组织块冷冻保存试验

采用快速冷冻方法冻存山羊乳腺组织块,比较不同大小组织块、不同冻前预处理和每管冻存不同块数对冻存效果的影响。结果表明,冻前预处理0,6和12h,直径<0.3mm组织块的贴壁存活率分别为63.0%,89.8%和81.5%,直径为0.3～0.5mm的贴壁存活率分别为47.2%,63.0%和56.5%,直径为0.5～1.0mm的贴壁存活率分别为27.8%,35.2%和29.6%;每管冻存6块、9块和12块对冻存效果影响不显著,以6块最佳。结果显示,以添加100mL/LDMSO的D-MEM/F12为冷冻液,将直径<0.3mm的组织块冻前预处理6h,山羊乳腺组织块的保存效果较好。     

大鼠不同时期乳腺组织及血液中雌激素变化规律

研究大鼠不同时期乳腺及血液中雌激素变化规律。选择雌性SD大鼠42只,分别为处女期、妊娠前、中、后期,每期间隔6d,泌乳期前、中、后期,每期间隔6d,每期6只。规定时间取各期大鼠乳腺组织及血清。通过放免测各个时期雌激素含量并进行分析。结果表明大鼠血清E2水平中处女期最高,妊娠开始呈现先降后升趋势,而泌乳各时期呈逐渐下降趋势。处女期与其它时期差异显著(P<0.05),整个妊娠期以妊娠后期最高,且差异不显著(P>0.05);泌乳前、中、后期明显高于妊娠期水平(P<0.05);乳腺E2:泌乳前期最高,然后呈现下降趋势,处女期与各期差异显著(P<0.05),泌乳前期明显高于其它时期(P<0.05),而显著高于妊娠中期和后期(P<0.05)。雌激素在维持乳腺发育及启动和维持泌乳方面发挥着重要作用。     

Thyrocalcitonin inhibition of bone resorption induced by parathyroid hormone in tissue culture

Added thyrocalcitonin greatly diminished parathyroid-hormone-induced resorption of bone in tissue culture. The results indicate that bone is primary site of action of thyrocalcitonin.     

不同发育期大鼠乳腺组织中雌激素受体α的表达

为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P<0.05);整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;随着泌乳期的进行,ERα的表达水平增高,但差异不显著(P>0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。     

Raf蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达及临床意义

目的:检测B-Raf和Raf1蛋白在犬乳腺肿瘤组织中的差异表达,明确其在犬乳腺肿瘤发生发展中的作用。方法:采用病理组织学技术对临床疑似肿瘤进行良恶性质鉴定,免疫组织化学技术检测犬乳腺肿瘤中Raf1和B-Raf蛋白的差异表达。结果:Raf1蛋白的阳性表达率为94.74%(18/19),B-Raf蛋白的阳性表达率为47.37%(9/19),两种蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达呈显著性差异(P0.01)。不同性质的犬乳腺肿瘤中Raf1表达未见显著性差异,恶性肿瘤中导管内癌和浸润性乳腺癌Raf1蛋白的表达呈边缘显著性差异(P=0.072)。结论:Raf1蛋白和B-Raf蛋白对犬乳腺肿瘤的发生发展起促进作用,Raf1蛋白发挥着更为广泛和重要的促进肿瘤恶性变的作用。Raf1可作为兽医临床潜在的肿瘤检测指标。     

Similarity of synthetic peptide from human tumor to parathyroid hormone in vivo and in vitro

One mechanism considered responsible for the hypercalcemia that frequently accompanies malignancy is secretion by the tumor of a circulating factor that alters calcium metabolism. The structure of a tumor-secreted peptide was recently determined and found to be partially homologous to parathyroid hormone (PTH). The amino-terminal 1-34 region of the factor was synthesized and evaluated biologically. In vivo it produced hypercalcemia, acted on bone and kidney, and stimulated 1,25-dihydroxy-vitamin D3 formation. In vitro it interacted with PTH receptors and, in some systems, was more potent than PTH. These studies support a long-standing hypothesis regarding pathogenesis of malignancy-associated hypercalcemia.     

抗菌肽CMIV在大肠杆菌中的表达与纯化

用PCR定点突变技术将改造的家蚕抗菌肽CMIV引入6×His·Tag序列,构建大肠杆菌硫氧还蛋白融合型表达载体pTrxFus-CMIV,转化GI724得到阳行Ni2 预装柱进行"一步纯化法"分离及纯化,得到了重组的抗菌肽.纯化产物与经过非变性凝胶电泳目的带的电洗脱、脱盐、肠激酶切割后、初步抑菌实验的结果一致.试验结果为以后的研究和生产奠定了基础.     

凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达

[目的]明确凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA(LvcrustinA)在毕赤酵母菌中的表达情况,为研发出一种基于重组蛋白crustinA的新型水产药物打下基础.[方法]采用全基因合成法(PAS)合成LvcrustinA基因,然后将LvcrustinA基因克隆至真核表达载体pYE-GAPα,所得重组质粒转化感受态细菌TOP10,以质粒提取试验盒提取的重组质粒pYE-GAPα-LvcrustinA电转至毕赤酵母菌GS115;以SDS-PAGE电泳检测和Western blotting鉴定分析融合蛋白LvcrustinA的表达情况,并通过保护试验验证融合蛋白LvcrustinA对副溶血弧菌的抵抗作用.[结果]以构建的重组质粒pYE-GAPα-LvcrustinA电转毕赤酵母菌GS115,获得的重组菌株在30℃下摇床(220 r/min)培养24 h即可获得融合蛋白LvcrustinA,且随培养时间的延长,其表达量逐渐增多.Western blotting鉴定结果显示,纯化的融合蛋白LvcrustinA能被抗His抗体识别.保护试验结果表明,融合蛋白LvcrustinA对副溶血弧菌具有良好的抵抗力.[结论]利用表达质粒pYE-GAPα和酵母菌GS115可成功重组表达获得LvcrustinA,且获得的LvcrustinA具有促进凡纳滨对虾抵抗副溶血弧菌感染的作用.     

p63和Calponin蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达及意义

为便于确定肿瘤的组织学来源,推测其在兽医临床诊断中的鉴别意义,研究p63和Calponin蛋白在20例犬乳腺肿瘤(canine mammary tumor,CMT)病例中的表达,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)SP染色方法和光学显微镜观察进行确诊。结果表明,鼠抗人单克隆抗体p63和Calponin可用于犬乳腺肿瘤病例中肌上皮的表达研究,在乳头状瘤、混合瘤及腺肌上皮瘤等犬良性乳腺肿瘤组织中p63与Calponin表达为阳性或强阳性;在乳头状癌、浸润性导管癌等恶性肿瘤组织中p63与Calponin蛋白表现为阴性或局灶阳性。选择p63与Calponin作为犬乳腺肿瘤组织基底和腺肌上皮细胞的标记物有一定的敏感性和特异性,对良、恶性乳腺肿瘤组织、乳腺肿瘤或癌旁组织的来源和临床诊断等具有鉴别和指导作用。     

人源抗菌肽LL-37真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达

【目的】使人源抗菌肽LL-37在真核表达载体中获得高效表达.【方法】采用RT-PCR技术,从人的血样中扩增出LL-37基因片段,并将其连接至pcDNA3.1-His-V5(+)载体.通过脂质体介导法将重组质粒转入奶牛乳腺上皮细胞,G418筛选获得稳定阳性细胞株,并且利用RT-PCR和Western-blot检测目的基因在转录及翻译水平的表达情况.【结果】RT-PCR结果显示,经转染的乳腺上皮细胞能够扩增出523bp的LL-37基因.qRT-PCR结果发现,LL-37mRNA在转染后的不同时期均有表达,经稳定转染的表达量最高.通过Western-blot检测,获得了约17kU的目的蛋白.【结论】结果表明,LL-37基因成功整合至奶牛乳腺上皮细胞并能够正确表达,这为构建分泌LL-37蛋白的奶牛乳腺生物反应器提供了依据.     

牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达与鉴定

为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9 K-b TAP.用Sal Ⅰ酶切线性化pPIC9 K-b TAP质粒后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导其表达.SDS-PAGE分析结果表明表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明表达的重组蛋白质bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果.     

内毒素对山羊乳腺组织中与乳腺炎相关的酶和细胞因子的影响

8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房.灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bou in氏液固定,部分用液氮保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明:与灌注生理盐水对照相比,灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D氨-基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高(P<0.01),TNFα-含量显著升高(P<0.05);相同条件下对2种处理组织样中3种细胞因子mRNA表达水平进行PCR扩增,灌注内毒素侧能检到明显的目的条带,对照侧未见明显的目的条带.     

内毒素对山羊乳腺组织中与乳腺炎相关的酶和细胞因子的影响

8只泌乳期的健康睢宁白山羊，产后72h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房．灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24h观察山羊整体及乳房局部变化．灌注24h后，处死动物，取乳腺组织，部分用Bouin氏液固定，部分用液氮保存．临床症状及病理切片观察均显示，山羊表现典型的急性乳腺炎症状．检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明：与灌注生理盐水对照相比，灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）、髓过氧化物酶（MPO）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高（P〈0．01），TNF-α含量显著升高（P〈0．05）；相同条件下对2种处理组织样中3种细胞因子mRNA表达水平进行PCR扩增，灌注内毒素侧能检到明显的目的条带，对照侧未见明显的目的条带．     

前列腺癌细胞系和组织中neprilysin的表达

目的检测neprilysin（NEP）在前列腺癌细胞系和组织中的表达。方法用实时荧光定量PCR、western blot检测前列腺癌细胞系（LNCaP、PC-3）、39例前列腺癌和16例正常前列腺组织中NEP mRNA和蛋白表达。结果与正常组织相比,LNCaP及PC-3细胞中NEP mRNA表达下调,尤以LNCaP细胞更为显著;在经甲基化抑制剂作用后,PC-3细胞NEP mRNA恢复表达的程度明显高于LNCaP细胞。前列腺癌组织中NEP mRNA和蛋白表达均明显低于正常前列腺。结论 NEP表达下调可能促进前列癌发生。