羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立与应用

为快速检测临床羊传染性脓疱病毒(CPDV)感染,根据Gen Bank中公布的CPDV毒株序列,通过多毒株B2L序列保守区的比对,设计并合成1对特异性引物,利用PCR方法检测该病毒,并进行特异性、敏感性试验及临床检测。结果显示,该反应的最适退火温度为56℃,最适引物量为0.6μL(20μmol/L),可以检测到1 pg的DNA,并且能鉴别山羊痘病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒。结果表明,该方法特异性高、敏感性强,可用于CPDV临床感染的快速检测。     

羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立及应用

根据NC-005336 ORFV全基因中gORF011设计合成一对引物。建立用于检测羊传染性脓疱病毒的PCR方法。此方法检测羊传染性脓疱病毒结果与病毒分离培养,电镜检查结果一致。经过对扩增产物进行序列分析,与NC-005336 ORFV的核苷酸序列同源性高达97.48％。通过特异性,敏感性及临床应用实验证明,此方法可以检测10^4ICID50浓度病毒;临床应用检出率为94．7％,显著高于病毒分离培养36．8％的检出率;并能与羊痘病毒,口蹄疫病毒鉴别;此方法用于检测羊传染性脓疱病毒是特异的、敏感的、可行的。     

羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立与初步应用

根据羊传染性脓疱病毒(CPDV)B2L基因序列,设计合成一对引物,建立了检测羊传染性脓疱病毒DNA的PCR检测方法。特异性、敏感性试验表明,该方法可以检测2 pg DNA;并能与羊痘病毒、口蹄疫病毒进行鉴别区分;结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可对临床组织病料中的CPDV进行快速检测。     

羊接触传染性脓疱皮炎病毒PCR检测方法建立及初步应用

以Gen Bank上羊接触传染性脓疱皮炎病毒(ORFV)B2L基因序列,用Primer premier 5.0软件设计1对引物并合成,经PCR条件优化,确定了最佳的PCR反应条件,建立了羊接触传染性脓疱皮炎病毒PCR检测方法。结果显示,设计的引物能扩增出的PCR产物为540bp左右,与预期大小一致;同时检测山羊痘病毒,结果均为阴性;该方法能检出羊接触传染性脓疱皮炎病毒最低量为5pg。经证实,建立起羊接触传染性脓疱皮炎病毒PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于临床病料检测。     

应用PCR检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒

设计合成了1对引物，建立用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒的PCR方法。结果表明，PCR对羊接触传染性脓疱性皮炎病毒细胞培养毒的检测与细胞培养CPE、电镜检测的结果相一致。经对扩增产物进行序列分析，与已报道NZ—2株的核苷酸序列同源性高达97％。用此PCR方法扩增羊痘病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒，结果均为阴性。此方法用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒是可行的、特异的。     

羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立及CBP基因的序列分析

根据GenBank中的羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因序列,设计合成1对引物,通过对PCR条件的优化,敏感性、特异性试验,成功建立了ORFV的PCR检测方法。敏感性与特异性结果显示,最低核酸检测量为1.2 fg/μL,对口蹄疫病毒、山羊痘病毒、丝状支原体山羊亚种的扩增结果均为阴性。同时根据GenBank中的ORFV的CBP基因的序列,设计合成1对特异性引物,以ORFV贵州分离株作为模板,成功克隆出ORFV的CBP基因。同源性分析表明,核苷酸与GenBank中ORFV的CBP基因的核苷酸序列相似性99.4%～88.8%。本研究为ORFV感染的流行病学调查和CBP基因功能研究奠定基础。     

羊传染性脓疱病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

根据GenBank已经发表的CEV参考毒株(登录号:AF097215)F1L基因序列,利用Primer Express 3.0软件设计合成1对特异性引物,以pMD19-T-63bp重组阳性质粒作为标准品,建立了羊传染性脓疱病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。经过反应条件的优化,建立的羊传染性脓疱病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=0.99,扩增效率E=1.18。该方法敏感性高且特异性强,最低检出下限为65.47拷贝/μL,与羊痘和口蹄疫病毒均不发生交叉反应,重复性好,组内和组间变异系数分别为0.17%~0.59%和0.74%~1.25%。运用该方法对2例羊传染性脓疱病例进行检测,结果均为阳性。因此,可将该方法应用于临床诊断,具有准确、高效、快捷、灵敏的特点。     

羊传染性脓疱诊断方法的建立

利用MDBK细胞从青海某养殖户发病羊唇部痂皮中分离获得一株病毒,通过临床症状、PCR检测以及组织病理学观察等方法对该株病毒进行了鉴定,证实分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf Virus,ORFV),命名为ORFV-QHMH01。参照GenBank中ORFV F1L基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,对ORFV-QHMH01株F1L基因进行了克隆、测序,并推导出其氨基酸序列。序列分析表明,分离株F1L基因片段长987bp,编码328个氨基酸,与AF097215、AY040081、AY040082、AY040083、AY040084、AY040085、FJ808075、HM133903、HQ221964、JQ271535株的核苷酸序列同源性分别为:96.7%,95.6%,96.1%,96.2%,97.5%,97.2%,96.5%,48.6%,95.3%,98.3%。系统发育进化树结果表明,ORFV-QHMH01分离株与参考毒株JQ271535和AY040084的亲缘关系较近,这表明不同地区分离株的F1L基因具有较好的保守性。     

羊传染性脓疱病毒研究进展

羊传染性脓疱病毒是羊传染性脓疱(羊口疮)的病原,能够感染山羊、绵羊和野生小反刍动物,也能够感染人,主要引起口腔黏膜、眼睛、外阴、蹄等部位形成丘疹、水疱、脓疱和疣状痂皮,病畜因衰竭和继发感染而死亡。论文对羊传染性脓疱病毒的特征、致病性、致病机理、免疫机理、免疫逃逸机制、检测方法和疫苗研究进行了综述。     

羊传染性脓疱和羊痘的双重荧光PCR方法的建立

<正>羊传染性脓疱又称羊传染性脓疱性皮炎、羊接触传染性口炎,俗称"羊口疮"是由羊传染性脓疱病毒(简称CEV)感染所致,是一种高度接触性、低死亡率的传染性疾病。该疾病的特征在于口腔和嘴唇的皮肤和黏膜形成丘疹、疱疹、溃疡和结成疣状厚痂。疱疹内容物和痂皮中的病毒可持续传播几个月[1]。所有养羊国家都可能会爆发,各种阶段的羊都会受到影响,呈群发性流行。羊痘病毒属分为绵羊痘和山羊痘,由羊痘病毒(简称cpv)引起所致,以绵羊痘病毒为代表种,绵羊痘病毒又称     

羊传染性脓疱皮炎病毒研究进展

羊传染性脓疱皮炎病毒（ORFV）是痘病毒科副痘病毒属的代表种,具有高度的嗜上皮性,主要引起人和动物的接触传染性皮炎。本病传染性强、发病率高,呈世界性流行,给养羊业带来巨大的经济损失,并对人类健康构成威胁,具有一定的公共卫生学意义。ORFV不同毒株抗原性的差异及被感染动物表现出临床症状的不同,给该病的诊断和防治造成了困难。作者对近年来国内外学者在病毒基因组的组成、病毒编码的主要功能蛋白、免疫特性、致病机理及诊断与防治等方面取得的进展作一综述,以期为ORFV的预防与控制提供科学依据。     

酶联免疫吸附试验检测羊传染性脓疱病毒

用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记经兔体高免提纯的兔抗羊传染性脓疱病（Ｏｒｆ）ＩｇＧ，用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测不同毒株的传染性脓疱病毒及病毒基因在载体中重组克隆后转化到受体菌中的表达情况。结果表明，ＨＲＰ标记的ＩｇＧ，经自动酶标光度计检测，对ＨＣＥ、ＨＬＲ、ＬＭＥ、ＤＰＥ、ＨＢＧＥ、ＹＬＧＥ毒、ＬＴＥ囊膜蛋白及ＨＣＥ１０代细胞毒都呈现特异性反应。在模式２的检测中，ＯＤ值均在０．０７以上，在模式３的检测中，都呈现阳性。受检的４株重组转化大肠杆菌中，一株表现阳性，说明重组菌对Ｏｒｆ病毒的抗原产生表达。试验证明，ＥＬＩＳＡ是对羊传染性脓疱病毒进行诊断检测的一种快速、灵敏、准确的方法。     

鸡传染性贫血病毒PCR检测方法的建立及应用

为了能有效、快速地检测鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV),针对CI-AV VP1基因保守系列设计了1对特异性引物,建立了检测CIAV的PCR方法,进行了特异性和敏感性试验并对临床疑似鸡传染性贫血(CIA)病料进行了检测。结果表明:CIAV扩增产物约为450 bp;仅对CIAV扩增出特异性条带;检测的最小拷贝数为1.0×10~1;检测的110份临床病料阳性率为78.2%(86/110)。说明所建立的PCR检测方法敏感、特异、快速,可用于临床样品CIAV的检测。     

羊传染性脓疱病毒的分离与鉴定

对采自松原市的疑似羊接触传染性脓疱性皮炎的羔羊病料,用犊牛睾丸原代细胞进行病毒分离培养,观察细胞病变;将出现病变的病毒细胞培养液接种家免和羔羊后,出现典型羊接触传染性脓疱性皮炎的临床症状;对病毒细胞培养液的电镜观察,发现了副痘病毒,证明确为羊传染性脓疤性病毒。     

羊传染性脓疱病毒的分离与鉴定

<正>传染性脓疱病毒首次记载于英国(1787年),当时认为是绵羊的一种接触性传染病,1920年Zelller利用病羊的痂皮复制了该病,直到1921年法国Aynaud才证实该病的病原是病毒[1]。Glover(1927年)曾确定Aynaud的资料,并进行了组织学研究。Theiler(1928年)在南非、Seddon在澳大利亚、Melani-     

羊传染性脓疱皮炎病毒的细胞培养

在确定内蒙古白音锡勒牧场羊传染性脓疱皮炎的基础上,我们利用犊牛睾丸细胞培养白音锡勒牧场传染性脓疱皮炎病毒(Orf virus)获得成功,现将培养方法介绍如下。     

羊传染性脓疱病毒的分离鉴定

为了对羊传染性脓疱病毒的分离株ORF027基因、ORF059部分基因进行克隆、序列分析以及构建系统进化树,本研究应用犊牛睾丸细胞从病羊痂皮病料中分离获得了1株羊传染性脓疱病毒,命名为Orf-ys,在电镜下观察到了典型的病毒粒子。应用PCR方法扩增获得了2条基因片段,PCR产物克隆至pMD18-T载体,鉴定后测序。序列分析结果表明Orf-ys的2个基因分别与参考毒株的相关基因核苷酸同源性高达97.6%～98.6%和96.9%～98.4%。基因进化树比较显示,与美国OV-IA82株和意大利OV/C2、OV/mi-90株的进化关系最近。     

德令哈羊传染性脓疱病毒的诊断

德令哈市蓄集乡红星一社牧户羊感染传染性脓疱病毒的诊断,根据临床症状和病毒DNA的提取及PCR扩增、F1L基因的扩增和克隆,综合判定为由羊传染性脓疱病毒感染引起的疾病。     

牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测方法的建立

为建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)PCR检测方法,依据IBRV的t K基因序列,设计合成PCR的引物,以IBRV的标准AV20毒株为对象,确定PCR最终反应体系为25μL,并优化了PCR反应条件。结果显示,该PCR方法可以扩增出301bp的特异性片段;对牧场中常见的BVDV进行PCR特异性检测,未检测到BVDV特异性条带;10倍稀释法验证PCR优化反应后的灵敏性为可检测出0.002TCID50的病毒量。结果表明,该方法可为牧场进行IBR疫情监测提供有效技术手段。     

鸡传染性支气管炎病毒Real-Time PCR检测方法的建立

本试验针对肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV-QX)保守基因N基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-QX SYBR GreenⅠReal-Time PCR标准曲线。结果显示,本次所建立的检测方法重复性好,特异性高,最低可检测到39.7copies/μl的病毒核酸,对常见禽源病毒无交叉反应。本次建立的方法不仅可以用于各基因型IBV病原检测,也可用于病毒的定量研究。因此,本实验室所建立的IBV检测方法在鸡传染性支气管炎病毒的快速检测上具有重要意义。