梅花鹿微卫星DNA富集文库的构建与鉴定

梅花鹿基因组DNA经限制性内切酶MboI酶切,用1.5%的琼脂糖凝胶电泳回收400～1000 bp的DNA片段,与MboI连接接头相连接,连接产物与生物素标记的(AC)15微卫星探针变性及退火,再通过链亲和素偶联磁珠亲和捕捉,经吸附,洗涤及洗脱,然后以洗脱产物为模版,以其中一个接头为引物进行PCR扩增,将扩增产物回收纯化并与pMD18-T载体相连接,转化大肠杆菌DH5a,构建梅花鹿(AC)n微卫星DNA富集文库,经测序分析表明该文库含重组克隆约为1 380个,其中计算得到阳性克隆率为82.9%。梅花鹿微卫星文库的建立将为一步进行梅花鹿基因组结构的分析、梅花鹿遗传连锁图谱的构建、分子进化和系统发育研究、标记辅助选择以及经济性状的QTL定位提供大量的微卫星标记。     

曼氏无针乌贼微卫星DNA富集文库构建与鉴定

曼氏无针乌贼是我国四大海产之一,开发其微卫星标记具有重要的科研与应用价值。本研究采用FIASCO法（Fast Isolation by AFLP Sequences Containing repeats）构建了曼氏无针乌贼的（CA）n微卫星富集文库,通过PCR检测出640个阳性克隆,占所有克隆的87%,从阳性克隆中随机选取118个进行测序,序列分析发现,103个克隆含有7次以上的重复序列,其中完全的为67（65%）个,不完全的23个（22.3%）,复合的为13（12.7%）个,重复次数范围为7~59次,平均为38次。在103个序列中共42条可以设计引物,所筛选出的引物可以用于评估曼氏无针乌贼种质资源遗传多样性、遗传结构、亲子鉴定以及放流效果评估等。     

微卫星DNA标记技术及其应用

微卫星DNA是高等真核生物基因组中种类多、分布广、具有高度的多态性和杂合度的分子标记,由于其具有多态性检出率高、信息含量大、共显性标记、实验操作简单、结果稳定可靠等优点,已经成为种群遗传学研究中被广泛应用的分子遗传标记．微卫星DNA标记技术在动物亲缘关系的鉴定、特定基因定位、群体遗传结构的分析、物种的进化和系统发生以及遗传基因连锁图谱的构建等方面已得到了广泛的应用．因此,就微卫星DNA遗传标记的原理、特点及应用等方面进行综述。     

杜鹃基因组微卫星富集文库的构建

利用FIASCO方法(Fast Isolation by AFLP Sequences COntaining repeats)构建杜鹃(Rhododendron simsii Planch.)的(AG)n微卫星富集文库。通过菌液PCR检测,从(AG)n微卫星富集文库的356个阳性菌落中筛选了233个进行测序分析。结果表明,202个序列富含SSR位点,阳性比率达86.7%。去除杂峰、叠峰、信号弱的序列,最终筛选39个供后续引物开发使用,其中完美型SSR有22个,不完美型5个,混合型12个。磁珠富集法构建杜鹃基因组微卫星文库是一条高效可行的途径,为微卫星位点的分离、杜鹃种群遗传多样性和遗传结构的研究奠定了基础。     

微卫星DNA作为遗传标记的优点及前景

微卫星ＤＮＡ是一类以１－６ｂｐ的核苷酸为基本单位，呈串联重复六散在分布于整个基因组的重复序列。它与限制性片段长度多态性，随机扩增多态ＤＮＡ，小卫星ＤＮＡ等分子标记相比，具有数量多，分布广且均匀，多态性丰富，分析快速方便等一系列优点，并具有重要的理论意义和深远的应用前景。     

武夷山自然保护区中华蜜蜂微卫星DNA遗传分析

采用5个微卫星DNA分子标记,测定武夷山自然保护区6个样点的中华蜜蜂的遗传多样性及遗传分化.结果共检测到23个等位基因,平均多态信息含量(PIC)在0.402 9～0.497 8,处于中等多态水平;平均杂合度(He)在0.452 5～0.561 3,处于中等水平.经Fisher精确检验,武夷山自然保护区6个样点,5个微...     

大黄鱼群体遗传多样性的微卫星DNA分析

通过建立大黄鱼部分基因组文库,应用PCR法筛选到55个含微卫星DNA位点的阳性克隆,选择其中8个序列设计微卫星引物,在这8个微卫星位点中得到91个等位基因片段,各位点等位基因数6～22个,平均观测杂合度Ho为0.404 7,平均期望杂合度He为0.775 6,多态信息含量(PIC)平均值为0.754 5,结果显示,所选择的8个微卫星位点均表现出较高的多态性.利用这些微卫星引物对大黄鱼不同群体进行遗传多样性分析,结果表明,大黄鱼种群中仍存在较高的遗传变异,但微卫星等位基因频率大多偏离了Hardy-Weinberg平衡,且不同群体间存在较高的基因流(Nm=2.699 8),表明大黄鱼种群存在较严重的近亲繁殖且各群体间有着较频繁的基因交流.对不同地理群体的聚类分析结果支持了中国沿海大黄鱼种群大致划分为3个不同地理种群的论证.     

微卫星DNA的研究进展

微卫星DNA技术是现有分子标记中最有价值的一种,同时也提供了家禽遗传育种研究一种新的手段.综述了微卫星DNA研究的现状,并对该技术在以后的运用与发展进行了探讨.     

“光合1号”中华绒螯蟹微卫星富集文库的构建与多态性标记的筛选

采用磁珠富集法(Fast isolation by AFLP sequences containing repeats,FIASCO)构建"光合1号"新品种中华绒螯蟹Eriocheir sinensis基因组微卫星文库。用PCR法对225个单菌落进行鉴定,共获得168个阳性克隆,测序发现有94个含有微卫星座位,其准确率为55.95%,其中单元重复次数为5～10的序列占34.04%,重复次数为10～20的序列占20.21%,重复次数大于20的序列占45.75%,重复次数最高达到92次;完美型微卫星座位69个(占73.40%),非完美型微卫星座位17个(占18.09%),混合型微卫星座位8个(占8.51%);根据微卫星侧翼序列设计并合成53对引物,检测结果显示,有31对(占58.50%)引物能够扩增出特异性条带;选择其中14对多态性良好的引物用于中华绒螯蟹辽河野生群体的遗传多样性分析,共检测到148个等位基因,单个位点等位基因数为7～13个,平均为10.6个,观测杂合度为0.214 3～0.666 7,期望杂合度为0.825 4～0.910 1,多态性信息含量为0.766 3～0.865 4。     

“光合1号”中华绒螯蟹微卫星富集文库的构建与多态性标记的筛选

采用磁珠富集法(Fast isolation by AFLP sequences containing repeats,FIASCO)构建光合1号新品种中华绒螯蟹Eriocheir sinensis基因组微卫星文库。用PCR法对225个单菌落进行鉴定,共获得168个阳性克隆,测序发现有94个含有微卫星座位,其准确率为55.95%,其中单元重复次数为5～10的序列占34.04%,重复次数为10～20的序列占20.21%,重复次数大于20的序列占45.75%,重复次数最高达到92次;完美型微卫星座位69个(占73.40%),非完美型微卫星座位17个(占18.09%),混合型微卫星座位8个(占8.51%);根据微卫星侧翼序列设计并合成53对引物,检测结果显示,有31对(占58.50%)引物能够扩增出特异性条带;选择其中14对多态性良好的引物用于中华绒螯蟹辽河野生群体的遗传多样性分析,共检测到148个等位基因,单个位点等位基因数为7～13个,平均为10.6个,观测杂合度为0.214 3～0.666 7,期望杂合度为0.825 4～0.910 1,多态性信息含量为0.766 3～0.865 4。     

貉犬瘟热病毒的分离与鉴定

从临床疑似犬瘟热的貉肺组织中分离到1株病毒,经形态特征、理化特性、血清学和分子生物学鉴定,分离病毒为犬瘟热病毒。     

利用微卫星标记对级进杂交绵羊群体遗传特性的鉴定(英文)

[Objective] The aim of the research was to identify and assess the genetic characteristics of grading breeding sheep populations in Ba Yan Nur City. [Method] Genetic polymorphism and aggregation of seven sheep populations, including three breeding sheep populations (breeding F1, F2 and Bamei mutton sheep), three introduced mutton sheep breeds (Texel, Dorset and German Merino sheep) and one local female parent population (Mongolia sheep), were assessed using 10 microsatellite markers. [Result] By cluster analysis, the seven sheep populations can be divided into two groups. The F1 and German Merino sheep were closely related, which were clustered with F2, Bamei mutton sheep and Mongolia sheep to form one group while Texel and Dorset to form another group. The genetic aggregation of the seven breeds was assessed by Bayesian discrimination. And the results show that the genetic aggregation of F1 and F2 were lower while that of Bamei mutton sheep, Texel, Dorset and German Merino sheep were higher. [Conclusion] Better genetic stability has been formed in Bamei mutton sheep.     

利用微卫星标记对级进杂交绵羊群体遗传特性的鉴定分析

[目的]对内蒙古巴彦淖尔市级进杂交肉羊群体的遗传特性进行评估和坚定：[方法]利用10个微卫星标记对3个选育绵羊群体（选育级进1代、级进2代、巴美肉羊）,3个引进肉羊品种（德克塞尔、无角道塞特、德国美利奴）和1个当地母本群体（蒙古羊）进行微卫星标记鉴定,分析这7个绵羊群体的多态性和遗传聚集性。[结果]通过聚类分析,7个群体明显可以分为2大类群,即选育级进1代首先和德国美利奴聚在一起,然后再依次和级进2代、巴美肉羊、蒙古羊聚在一起为一大类,德克塞尔和道塞特聚在一起为一大类;各群体贝叶斯判别结果显示,级进1代和级进2代的遗传聚集性比较低,巴关肉羊和国外肉用绵羊品种德克塞尔、道塞特、德国美利奴的遗传聚集性比较高。[结论]巴美肉羊已经形成了较好的遗传稳定性。     

“白鼻子”病貉血液常规生化指标的测定分析

为了分析貉"白鼻子"病的发病原因,对该病患貉与健康貉各9只的20项血液常规生化指标进行了测定,并用Mann-whinney法进行了组间差异性检验。与正常貉相比:病貉门冬氨酸氨基转移酶(p=0.024)、谷氨酰转移酶(p=0.036)、总胆红素(p=0.019)水平升高,白蛋白(p=0.040)及白球比(p=0.031)下降,这些生化指标的异常提示病貉肝脏的蛋白合成代谢功能下降,胆红素代谢异常,肝脏受到了损失;病貉肌酐(p=0.041)水平的降低,α-羟丁酸脱氢酶(p=0.017)水平的升高,可能与"白鼻子"病貉患有贫血有关;病貉肌酸激酶(p=0.019)水平的升高可能与病貉患有的肌肉萎缩有关。     

伏牛白山羊6个微卫星标记的遗传多样性分析

选取位于绵羊第6号染色体上与牛多胎基因FecB紧密连锁的2个微卫星基因座OarAE1 01、BM1329,牛第3号染色体上的微卫星基因座BMS1248,绵羊第4号染色体上的2个微卫星基因座MAF70、OarHH35及牛第8号染色体上的微卫星基因座BM1227,对伏牛白山羊遗传多样性进行检测。结果表明,6个微卫星基因座在伏牛白山羊中共检测到50个等位基因,其中平均多态信息含量(PIC)为0.789,且每个微卫星基因座的PIC>0.5,平均有效等位基因数(Ne)、平均杂合度(H)分别为5.165、0.903。由此表明,6个微卫星标记均具有高度多态性,可用于伏牛白山羊遗传多样性的分析。     

鸡与鹌鹑属间杂交种遗传多样性研究

选用鹌鹑上的12个微卫星位点,对随机选取属间杂交种24个个体进行多态性检测,共检测到54个等位基因,每个座位平均等位基因数为4.5个.该群体平均杂舍度和平均多态信息含量分别为0.685 6和0.665 9,群体遗传特性的体型、外貌、行为习性、生长速度均有明显差异.结果表明,鸡与鹌鹑属间杂交种属多态性较丰富的群体,选择微卫星标记分析属间杂交种,能较好反映出其遗传多样性,且具有较高可信性.     

洪山鸡20个微卫星座位的DNA多态性分析

[目的]对洪山鸡进行20个微卫星座位的多态性分析,为对其有效保护和开发利用提供科学依据。[方法]利用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳技术,对随机抽取的50只洪山鸡进行20个微卫星标记的多态性检测。[结果]在20个微卫星座位中共检出176个等位基因,平均每对引物可检出8.8个等位基因,基因频率在0.011 1～0.555 6间分布,平均有效等位基因数为5.755 5,平均杂合度为0.791 3,平均多态信息含量为0.781 9。[结论]该研究表明被检测的洪山鸡群遗传变异大,具有丰富的遗传多样性。     

SSR标记技术在植物遗传多样性研究上的应用

微卫星(microsatellites)或简单序列重复(simple sequence repeats,SSRs)是以1～6个碱基为基本单元的串联重复序列,具有含量丰富、多态性高、共显性和检测方法简单等优点,是研究植物遗传多样性的优异的分子标记之一,已被用于多种植物的遗传多样性研究。概述了微卫星DNA标记的原理及特点,介绍了其实验技术方法及发展,探讨了其在植物遗传多样性中的应用和发展前景。     

利用微卫星标记分析4个猪品种的遗传结构

利用5个微卫星标记对4个猪品种(山西马身猪、大白猪、长白猪和太原花猪)的遗传结构进行了分析,计算了遗传杂合度、有效等位基因数,得到了由Nei氏标准遗传距离为基础的NJ聚类图。结果表明:大白猪与马身猪以及大白猪与太原花猪的遗传关系较远,而山西马身猪与太原花猪的遗传关系较近;山西马身猪与太原花猪的进化历史相近,大白猪与山西马身猪组合及大白猪与太原花猪的组合,可能产生较大的杂种优势。