不同保存方法对武汉单极虫DNA提取和PCR扩增的影响

为探讨不同保存方法对武汉单极虫Thelohanellus wuhanensis DNA提取和PCR扩增的影响,将从患武汉单极虫病的异育银鲫Carassius auratus gibelio鱼苗上分离出含有孢子的孢囊,分别置于100%乙醇、70%乙醇、2.5%戊二醛、10%福尔马林、Bouin's液、Carnoy's液和Müller's液中保存50 d,经计数调整孢子等量后分别进行DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增。结果表明:100%乙醇和70%乙醇保存方法对武汉单极虫孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均无任何影响,等同于新鲜孢子,可作为孢子的保存方法;2.5%戊二醛和Bouin's液保存方法只对孢子DNA提取有影响,但均能在常规PCR和巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,可作为用于常规PCR和巢式PCR扩增的孢子保存方法;10%福尔马林和Müller's液保存方法对孢子DNA提取和常规PCR扩增均有影响,但均能在巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,故只能作为用于巢式PCR扩增的孢子保存方法;Carnoy's液保存方法无论在孢子DNA提取还是进行常规PCR和巢式PCR扩增均无阳性结果,故不能用作孢子核酸分子生物学研究的保存方法。研究表明,除100%乙醇和70%乙醇保存方法外,其他保存方法对孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均有不同程度的影响。     

马鹿粪便样品保存方法对DNA提取质量的影响

采用冷冻法采集、保存马鹿粪便DNA样品,并将冷冻保存、乙醇浸泡保存和干燥后保存的样品进行DNA提取测试、比较分析。结果表明,采用冷冻保存法保存的马鹿粪便样品DNA提取的质量明显优于酒精浸泡和干燥保存方法,此方法采集和保存简单,试验省时、经济,可应用于寒冷地区冬季各种动物的粪便取样。     

不同数量猪毛中提取基因组DNA的比较

在进行分子生物学试验尤其是动物分子标记的研究中需要大量纯化的基因组DNA,这些DNA通常情况下是从动物的血液、耳组织、肝脏等组织中提取,所提取的基因组DNA质量较好.但是,在进行本地猪遗传多样性研究过程中,通常需要大量的血样,其获得和收集较为困难,尤其是野猪的血样更不易获得.因而,从猪的毛发中提取合格的DNA将解决上述难题.通常认为,从动物的毛发中提取DNA无论从数量还是质量上均明显低于从血样或其他组织中提取的DNA .但也有从脱落的狗毛中成功地提取基因组DNA的报道.为了探索从毛发中提取合格DNA的途径,本试验通过从不同数量的猪毛中提取的DNA进行质量比较分析,找出适合于做分子标记试验所需猪毛样本数量,为提高样本收集效率,降低劳动强度和减低试验成本提供依据.     

天牛基因组DNA提取方法和标本保存方式的比较研究

[目的]为天牛的分子系统学研究奠定基础。[方法]采用不同提取方法(饱和NaCl法、CTAB法、SDS-蛋白酶K消化法)从不同保存条件下天牛标本中提取基因组DNA,进行RAPD扩增,比较不同保存条件和不同DNA提取方法对DNA提取质量的影响,探索天牛标本的最佳保存方式和最佳DNA提取方法。[结果]不同方法提取的DNA质量有明显差异。CTAB法和SDS-蛋白酶K消化法提取的DNA质量较好,条带清晰完整,无降解和RNA污染。但饱和NaCl法的提取效果较差。天牛标本的最佳保存条件为在-80℃条件下无水乙醇浸泡。CTAB法提取的天牛基因组DNA能扩增出稳定清晰的多态性片段。[结论]CTAB法提取的天牛DNA质量最好,可直接用于PCR扩增。     

3种禽血抗凝剂效果及其对DNA提取质量的影响

通过3种不同血液抗凝剂对禽血抗凝,提取新鲜的和经冷冻保存一段时间后的抗凝血DNA,运用紫外分光法、凝胶电泳和PCR扩增技术检测提取的DNA样品质量,探讨不同抗凝剂的抗凝效果及其对提取DNA质量的影响。结果表明:3种抗凝血提取的DNA纯度和浓度相近。新鲜抗凝血比冷冻保存一段时间后的抗凝血提取的DNA质量好。ACD抗凝血在冷冻一段时间后出现凝血块,EDTA抗凝血液放置时间过长也影响抗凝效果,但两者在加入裂解液后则可长时间保存。75%乙醇抗凝剂抗凝效果较好,可长时间保存,适合远距离采血。由3种抗凝禽血提取的DNA分子片段完整,能满足常规分子生物学试验研究。     

玉米基因组DNA快速提取方法

探讨了用NaOH裂解法从玉米单子粒胚乳中和用十二烷基肌氨酸钠法从玉米叶片中快速提取基因组DNA的方法,分析了2种方法提取的基因组DNA的效果及应用价值.结果表明,虽然得到的DNA质量基本一致,都可用于玉米品种纯度检验和分子标记辅助选择,但优化的、从叶片中快速提取的基因组DNA可长期保存,并用于多种后续序列分析工作.     

钉螺总DNA提取方法的比较

以日本血吸虫的惟一中间宿主钉螺为对象,研究不同方法对其总DNA提取效果的影响.结果表明,SDS法和CTAB法可以快速、简便地从新鲜钉螺和钉螺的乙醇固定标本中提取总DNA.以该DNA为模板.通过相应引物成功扩增出线粒体CO1基因片段.提取DNA前钉螺标本用TE和PBS做预处理,提高了产品DNA的质量.     

甜瓜基因组DNA的提取及质量检测

利用改进的CTAB方法从甜瓜的叶片中提取DNA用于RAPD分析.结果表明,该提取方法简捷、扩增多态性好、谱带清晰,可对其他蔬菜如黄瓜、番茄、白菜等直接利用叶片提取DNA提供借鉴.     

山羊抑制素α前体基因5’侧翼区及外显子的克隆和序列分析

1材料与方法 1．1材料10只海门山羊母羊血样采白海门山羊保种基地（江苏省南通市）;10只安徽白山羊母羊血样采自安徽省芜湖市。颈静脉采血,所采血样均为10ml／只,用ACD抗凝,-20℃冻存。用酚氯仿抽提法提取基因组DNA,溶于TE,4℃保存。     

籽鹅血液基因组DNA提取方法的比较研究

针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的基因组DNA提取方法,并为其他家禽提供参考.新方法利用简便经济的操作将蛋白质和核酸分离,去除杂质、沉淀核酸,与传统酚-氯仿法相比,具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,尤其适用于大量样品的DNA提取.     

不同保存方法对中麻黄基因组DNA提取效果的影响

通过对不同方法采集和保存的中麻黄样品基因组DNA提取效果进行比较,确定中麻黄的最佳采集和保存方法。应用改良CTAB法提取中麻黄基因组DNA,并采用琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,利用紫外分光光度计法测定其浓度和纯度。结果表明,新鲜样品采集后立即冷冻保存或置于液氮和硅胶后冷冻保存,均能提取出高质量的基因组DNA;鲜样阴干几天后冷冻保存会导致基因组DNA降解;阴干后在室温下保存则降解更严重。采集的中麻黄鲜样采取不同方法带回实验室均不影响基因组DNA的提取效果,但应在低温环境中保存才能有效防止基因组DNA的降解。     

贵州畜禽种质资源库及信息库建设研究

通过采集、分装、冻存18种贵州地方畜禽血样,初步建立了畜禽血液库;提取贵州省地方畜禽品种的基因组DNA构建了DNA库;通过信息化处理,搭建并整合了包括遗传特性、品种信息等在内的交互式访问数据信息库,旨在为贵州畜禽种质资源的保存、利用与创新提供保障,为科研教学单位提供基础资料,同时为推进贵州畜禽种质资源信息化发展奠定基础.     

不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹 DNA提取效果的比较研究

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量.结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃＞肌肉＞刚毛＞血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求.综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用.     

几个杏李品种成熟叶片基因组DNA的提取

用改良的CTAB法提取几个杏李品种成熟叶片的基因组DNA,裂解细胞核前先用洗液排除细胞质中的部分多糖、多酚、丹宁和果胶等物质的干扰;裂解细胞核时,在提取液中加入乙醇进一步去除多糖,结果表明,提取的基因组总DNA的纯度和完整性都较好,OD260/OD280值在1.70-1.93之间,DNA无降解现象,没有多糖污染,可被限制性内切酶消化,所提取的基因组DNA的SRAP扩增条带清晰,多态性好。说明用此方法提取到了质量合格的杏李基因组DNA,可以用于PCR和限制性内切酶分析。     

不同保存条件下云杉八齿小蠹总DNA提取方法的比较分析

[目的]探讨云杉八齿小蠹总DNA的提取方法。[方法]将野外采集的云杉八齿小蠹分别保存在95％的酒精浸泡、自然风干和-40℃条件下,采用改良CTAB法、KAc法、盐析法和SDS法对不同保存条件下样品材料总DNA进行提取。[结果]结果表明,4种方法均可从95％酒精浸泡标本和-40℃冻存样品中提取出高质量的总DNA,相比之下改良CTAB法最为简单、高效、经济。以COI的通用引物对所提取的总DNA进行扩增检测,结果表明,采用改良的CTAB法可以从95％的酒精浸泡样品和-40℃冰存样品DNA中扩增出清晰的单一条带,片段大小700bp,经与已知昆虫的COI片段分子量对比,可以初步断定其为COI片段。[结论]该研究结果为今后小蠹类的分子系统学研究奠定基础。     

牛双芽巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立

[目的与方法]根据Genbank上登陆的双芽巴贝斯虫HSP20基因设计两对引物, SHSP-P1与SHSP-P2和SHSP-P3与 SHSP-P4,以其建立牛双芽巴贝斯虫巢式PCR快速检测方法.[结果]第一次、第二次扩增的退火温度均为57℃,分别扩增出约631和409 bp的条带,与预期的大小相符,而作为对照样本的牛巴贝斯虫、牛环形泰勒虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现.将感染双芽巴贝斯虫的全血基因组DNA做10倍递减稀释到106倍扩增时,巢式PCR还能见到目的条带,其灵敏度相当于4.6 pg/mL全血基因组DNA.在对50份疫区牛全血DNA样本检测中,阳性检出率分别为22; (11/50).[结论]所建立的牛双芽巴贝斯虫巢式PCR方法准确、敏感、特异,可以用于牛双芽巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义.     

不同保藏处理的蜘蛛标本基因组DNA提取

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构的完整性是进行基因工程各项研究所必须的条件。采用SDS法,对75%乙醇浸泡标本、无水乙醇浸泡标本、-70°C冷冻标本及活体蜘蛛进行了基因组DNA提取。经比较,活体蜘蛛、-70°C冷冻标本和无水乙醇浸泡标本提取效果较好,75%乙醇浸泡标本提取效果最差。     

Dopamine-related tetrahydroisoquinolines: significant urinary excretion by alcoholics after alcohol consumption

Concentrations of dopamine-related tetrahydroisoquinolines (salsolinol and O-methylated salsolinol) were significantly higher in the daily urine samples of alcoholic subjects admitted for alcohol detoxification than in the daily urine samples of nonalcoholic control subjects. Salsolinol concentrations in alcoholic subjects appeared to drop to trace (control) values 2 to 3 days after admission, following the disappearance of ethanol and its reactive metabolite acetaldehyde from the blood. These results indicate that physiologically active tetrahydroisoquinolines increase in humans during long-term alcohol consumption, presumably because of acetaldehyde's direct condensation with catecholamines. The presence of these or similar condensation products in the urine could be useful as clinical indicators of prior blood acetaldehyde concentrations in chronic alcoholics.