山豆根多糖对PRRSV感染RAW264.7细胞存活率及分泌炎性因子的影响

[目的]探讨山豆根多糖(SSP)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外感染RAW264.7细胞存活率及分泌炎性因子水平的影响,为研发出治疗猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的新型兽药提供参考依据.[方法]以50、100、200和400 μg/mL SSP作用于PRRSV体外感染8h的RAW264.7细胞,通过MTT法评价SSP对PRRSV感染RAW264.7细胞存活率,ELISA检测SSP对PRRSV体外感染RAW264.7细胞培养上清液中的炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和MCP-1.[结果]PRRSV感染RAW264.7细胞8h极显著降低了细胞存活率(P<0.01,下同),而200~400 μg/mL SSP能极显著升高PRRSV感染RAW264.7细胞存活率.PRRSV感染RAW264.7细胞8h可极显著升高细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和MCP-1水平,而SSP能有效降低PRRSV感染RAW264.7细胞分泌上述炎性因子水平,其中以200~400μg/mL SSP的抑制效果最佳.[结论]SSP通过提高炎症细胞存活率及抑制其分泌炎性因子水平,从而有效干预PRRSV感染免疫细胞的炎性反应.     

RAW264.7细胞分化为破骨细胞的凋亡观察

采用M-CSF+RANKL联合诱导RAW264.7细胞分化为破骨样细胞(OCL),观察培养过程中的凋亡现象,了解其生长规律。在诱导培养的第5~9天,通过TRAP染色、检测TRAP基因表达水平、细胞骨架与胞核染色方法分析OCL凋亡状况。结果表明:体外培养成熟OCL短时间内即发生凋亡,表现为TRAP阳性细胞数减少,TRAP基因表达水平降低,细胞骨架结构破坏、胞核形态改变。     

β-胡萝卜素对小鼠骨髓源树突状细胞成熟的影响

为探讨β-胡萝卜素对小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)活化和成熟的影响,从小鼠骨髓中分离获得前体细胞, GM-CSF和IL-4诱导使其分化成未成熟的BMDCs,并用不同浓度的β-胡萝卜素进行作用,检测BMDCs的表型标志、吞噬能力以及细胞因子的分泌水平。β-胡萝卜素作用后BMDCs进一步与异种CD4~+T细胞混合培养,检测T细胞的增殖情况。结果表明:与未处理组相比,经β-胡萝卜素作用24 h后, BMDCs表面分子CD40、MHCII、CD80和CD86的表达量显著上调, BMDCs吞噬FITC-Dextran的能力显著下降,细胞因子IL-12p70和IL-10的分泌水平显著上升, BMDCs刺激CD4~+T细胞的增殖能力显著增强。这说明β-胡萝卜素可促进DCs的活化和成熟,可作为潜在的疫苗佐剂。     

红茂草异紫堇碱对LPS诱导小鼠RAW 264.7细胞炎症因子的影响

[目的]研究红茂草异紫堇碱对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞释放炎性因子的影响。[方法]用CCK-8试剂盒方法检测不同剂量红茂草异紫堇碱(1、5、15、25、50、100、200、300和400μg/mL)对RAW 264.7细胞的毒性作用;用硝酸酶还原法测定不同浓度红茂草异紫堇碱(50、100、200和400μg/mL)条件下细胞培养液中NO的浓度;用ELISA法测定添加不同浓度红茂草异紫堇碱(100、200和400μg/mL)干预4 h,再加入LPS(0.1μg/mL)孵育20 h后细胞培养液中IL-1β、IL-6、IL-10、PEG-2和TNF-α的含量,通过上述方法测定的结果来评价红茂草异紫堇碱的抗炎作用。[结果]红茂草异紫堇碱浓度在15、25μg/mL时,可显著促进RAW 264.7细胞增殖(P≤0.05);并且在红茂草异紫堇碱存在条件下,促炎因子IL-1β、IL-6、PEG-2和TNF-α释放量都有不程度的降低,而抗炎因子IL-10和NO的释放量有不同程度的升高。[结论]红茂草异紫堇碱能够抑制促炎因子IL-1β、IL-6、PEG-2和TNF-α的释放;另一方面能够促进抗炎因子IL-10和NO的释放来抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应。     

β-胡萝卜素添加水平对奶牛繁殖性能的影响

在奶牛产前21 d至产后60 d添加饲喂不同比例β-胡萝卜素,研究其对奶牛繁殖性能的影响,研究结果验证并确定了在奶牛日粮中添加适量β-胡萝卜素制剂能有效提高奶牛繁殖性能,减少发情延迟、胎盘滞留发生,缩短子宫复原时间,从而提高奶牛产后的配种率和配种受胎率,缩短其生殖周期,减少或避免养殖户和养殖场因为奶牛繁殖性能低下而造成的经济损失,提高奶牛养殖业的经济效益。     

不同β-胡萝卜素添加水平对荷斯坦种公牛血清指标的影响

选取20头荷斯坦种公牛,单因子试验设计,随机分为4组,分别饲喂β-胡萝卜素添加水平0、25、50、100 mg/kg的日粮(按日粮风干物质计),试验期为6个月.结果表明:不同β-胡萝卜素添加水平对荷斯坦种公牛血清中β-胡萝卜素、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和总抗氧化能力(T-AOC)影响极显著(P<0.01),对血清过氧化氢酶(CAT)无显著影响(P>0.05).综合分析表明,种公牛日粮精料中β-胡萝卜素的适宜添加量为50 mg/kg.     

不同提取方法对盐藻β-胡萝卜素产量的影响

[目的]研究不同提取方法对盐藻β-胡萝卜素产量的影响,以改进盐藻β-胡萝卜素的提取工艺。[方法]首先比较了丙酮∶甲醇(7∶2)和石油醚2种常用提取试剂对盐藻β-胡萝卜素提取效率的影响;然后以丙酮-甲醇(7∶2)为提取试剂,分别从提取时间、提取温度、固液比3个方面对其提取工艺进行了优化。[结果]相对于石油醚,丙酮∶甲醇(7∶2)对盐藻β-胡萝卜素的提取效率较高。4℃和25℃浸提温度下β-胡萝卜素的得率没有明显差异。分3次提取时,5 m in的浸提时间即可获得较高的提取效率。在1~7 m l的提取剂使用范围内,随着提取剂用量的增加β-胡萝卜素的提取效率有所增加,但增加幅度不是很大。[结论]以丙酮∶甲醇(7∶2)为提取试剂,在25℃下浸提5 m in 3次可以得到较高的提取效率。     

猪伪狂犬病毒体外诱导RAW264.7细胞炎症反应模型的建立

【目的】探讨猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）炎症反应的影响,确定PRV的最佳感染剂量和感染时间,为建立RAW264.7细胞体外病毒感染炎症反应模型打下基础。【方法】PRV按10倍递增稀释成10-5~10-1 PRV稀释液,感染RAW264.7细胞并孵育1.5 h,弃病毒液后加入含5%胎牛血清的DMEM维持培养液继续培养,分别于继续培养2、4、8、12、24和48 h时收集细胞上清液,采用ELISA测定IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α、MCP-1和IFN-γ分泌水平及环氧合酶（COX-1和COX-2）活性,并以CCK-8法测定细胞活性。【结果】以PRV感染RAW264.7细胞4~48 h后均能通过PCR扩增获得PRV核酸的特异性条带,故选择4~48 h作为后续研究的PRV感染时间范围;10-2 PRV~10-1 PRV感染可显著降低RAW264.7细胞活性（P<0.05,下同）,10-3 PRV组仅在培养48 h时出现下降趋势,而10-5 PRV~10-4 PRV感染对RAW264.7细胞活性无显著影响。PRV感染RAW264.7细胞后,其胞内炎症因子IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-1β和MCP-1的分泌水平整体上呈升高趋势,其中10-3 PRV感染RAW264.7细胞12 h能显著或极显著（P<0.01）提高IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-1β和MCP-1的分泌水平;10-4 PRV~10-1 PRV感染组的IL-10分泌水平均呈升高趋势,而10-5 PRV感染组在感染8和24 h时IL-10分泌水平明显低于空白对照组,至感染48 h所有病毒感染组的IL-10分泌水平均降低;10-3 PRV~10-1 PRV感染8~24 h能有效提高RAW264.7细胞的COX-2活性,但对COX-1活性的影响不明显。【结论】PRV感染能诱导RAW264.7细胞发生炎症反应,其中10-3 PRV体外感染RAW264.7细胞8~12 h是建立RAW264.7细胞炎症反应模型的最佳条件。该模型可应用于PRV感染与RAW264.7细胞炎症反应相关干预药物的研究,为进一步揭示PRV感染机理及开发抗病毒感染药物提供理论依据。     

β-胡萝卜素生产工艺研究进展

主要介绍了β-胡萝卜素的几种生产制备方法,包括化学合成法、微生物发酵法、藻类培养法、基因工程法、植物提取法等,以期为β-胡萝卜素的生产与研究提供依据。     

β-胡萝卜素对奶牛繁殖性能及产后疾病的影响研究

试验研究了宁夏地区奶牛日粮每天补充β－胡萝卜紊300mg,对奶牛产前和产后血清β－胡萝卜素浓度变化、产后发病率、产后配种率和受胎率的影响。结果表明：添加300mg β－胡萝卜紊能显著提高奶牛产后10天、产后60天的血清β－胡萝卜素浓度（p〈0．05）,加州乳房炎测定法（CMT）测定乳区阳性率减少10．15个百分点,产后胎衣不下、隐性乳腺炎和临床乳腺炎的发病率均减少12个百分点。产后70天内的发情率68％,显著高于对照组52％（p〈0．05）,产后70天内的受胎率32％,显著高于对照组28％（p〈0．05）;但对一次配种受胎率（47．1％,46．1％）和110天受胎率（96％,92％）差异不显著（p〉0．05）。     

β-胡萝卜素对急性低氧家兔心电图的影响

建立家兔急性低氧模型,分别注射高中低3个剂量(6、4、2mg/kg)β-胡萝卜素,测定各组心率,描记各组标准Ⅱ导联P波、PR间期、QRS渡、Q-T间期、S-T段、T渡持续时间及p渡、S渡、R渡、T波电压、s-T殷电压,分析其抗低氧作用.结果表明:急性低氧家兔组较正常对照组心率减慢差异显著;P波时间、QRS渡时间和Q-T间期时间明显延长,差异极显著;T波电压降低.P波电压、S-T段电压明显升高,差异极显著;注射高、低剂量B-胡萝卜素对心率均具有回升作用.且能抑制S-T段电压升高,升高T渡电压,缩短P渡时间与Q-T间期时间,但与正常对照组相比较仍为差异不显著;中济量组心率、S-T段电压、T渡电压、P波时间、Q-T间期时间与正常对照组相比较则差异不显著.     

不同β-胡萝卜素供给水平对奶牛血液和乳中胡萝卜素含量的影响

通过在奶牛日粮中添加β-胡萝卜素制剂,用高效液相色谱测定奶牛血液和乳中的β-胡萝卜素含量,研究不同β-胡萝卜素制剂添加水平对奶牛血液和乳中胡萝卜素含量的影响.试验结果表明,在添加β-胡萝卜素第60 d,奶牛血液中胡萝卜素的含量变化为:基础日粮+300 mg/dβ-胡萝卜素添加组(Ⅱ)比基础日粮对照组(Ⅰ)增加了38.55%,差异显著(P<0.05);基础日粮+600 mg/dβ-胡萝卜素添加组(Ⅲ)比对照组Ⅰ增加了99.24%,差异极显著(P<0.01);基础日粮+900 mg/dβ-胡萝卜素添加组(Ⅳ)比对照组增加了122.85%,差异极显著(P<0.01).Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组奶牛牛乳中β-胡萝卜素的含量在添加胡萝卜素第60 d,分别比对照组(Ⅰ)增加了63.27%、148.46%、262.29%,差异均极显著(P<0.01).     

不同β-胡萝卜素添加水平对荷斯坦种公牛精液品质和血清指标的影响

选取20头荷斯坦种公牛,单因子试验设计,随机分为4组,分别饲喂基础日粮（对照组）和β-胡萝卜素添加水平为25mg／kg、50mg／kg、100mg／kg的试验13粮（按日粮风干物质计）,试验期为6个月,观察不同β-胡萝卜素添加水平对种公牛精液品质和血清指标的影响。结果表明：①添加β-胡萝卜素可极显著地提高种公牛血清β-胡萝卜素含量（P〈0．01）,而血清和精清中睾酮的浓度随β-胡萝卜素添加水平的提高呈先上升后下降趋势。②日粮中添加50mg/kg β-胡萝卜素,种公牛的射精量和鲜精活力显著高于对照组（P〈0．05）,精液密度极显著高于对照组（P〈0．01）,但与100me／kg添加组间差异不显著（P〉0．05）;而冻后活力、畸形率和顶体完整率3项指标各组间均无显著差异（P〉0．05）。③不同β-胡萝卜素添加水平对荷斯坦种公牛血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）和总抗氧化能力（T-AOC）的影响极显著（P〈0．01）,而对血清过氧化氢酶（CAT）无显著影响（P〉0．05）。综合分析表明：种公牛日粮中β-胡萝卜素的适宜添加量为50mg／kg。     

牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4对RAW264.7细胞TLR2表达和分布的影响

为探讨牛分枝杆菌TB10.4蛋白与RAW264.7细胞的相互作用关系,表达纯化了rTB10.4,并采用IFN-γ释放试验和Western blot检测其细胞活性。使用不同剂量rTB10.4与RAW264.7细胞共孵育后,采用实时无标记动态细胞分析技术检测rTB10.4对RAW264.7细胞生长影响的最佳时间点和最佳剂量。在此基础上,采用量化流式细胞仪分析重组蛋白rTB10.4对RAW264.7细胞TLR2表达的影响。结果表明,获得的rTB10.4具有较强的T细胞和B细胞活性,rTB10.4对RAW264.7细胞的作用呈剂量依赖性,作用起效时间为12~24h,诱导作用在16~18h达到最大效应值。量化流式分析仪分析结果表明,rTB10.4刺激可显著增强RAW264.7细胞的细胞膜上TLR2的表达。     

高亚麻籽油日粮中添加VE和β-胡萝卜素对育肥猪猪肉贮存品质的影响

试验旨在考察含高亚麻籽油的育肥猪日粮中添加维生素E(VE)和β-胡萝卜素(β-C)对育肥猪屠宰后肉品贮存过程中抗氧化酶与脂质氧化水平的影响。试验选用20头体重一致(65±2.3 kg)、健康状况良好的杜×长×大育肥猪,采用单因子试验设计,随机分成4个处理,每个处理5个重复,每个重复1头猪,每头猪单栏饲养,试验期42 d。共分为4组,对照组(CON)饲喂基础日粮、VE组在基础日粮中添加VE 300 mg·kg-1、β-C组在基础日粮中添加β-C100 mg·kg-1、VE+β-C组在基础日粮上添加VE 300 mg·kg-1与β-C 100 mg·kg-1。结果表明,与对照组相比,VE组极显著提高了猪肉贮存过程中α-生育酚在猪肌肉中的存留(P0.01),显著降低了丙二醛(MDA)含量(P0.05),提高超氧化物歧化酶(SOD)活性(P0.01)和总抗氧化能力(T-AOC)(P0.05)。与VE组相比,VE+β-C组显著降低了猪肉在贮存第1~4天的α-生育酚水平(P0.05),显著增加了猪肉贮存第6天和第8天MDA水平(P0.05)。因此,含高亚麻籽油育肥猪日粮中添加VE 300 mg·kg-1可显著提高α-生育酚在猪肉中的沉积,提高肉品贮存过程中的SOD活性和TAOC,降低脂质氧化,延长货架期。而在VE基础上再添加β-C并不能进一步降低肉品贮存过程中的脂质氧化。     

温度对甜玉米果泥β-胡萝卜素和色泽变化的影响

为了研究热处理条件下甜玉米果泥色泽的变化,考察了不同温度对甜玉米果泥β-胡萝卜素含量、色差的影响,并对甜玉米果泥β-胡萝卜素热损失的动力学进行了研究.结果表明,甜玉米果泥β-胡萝卜素热损失较大,其;色品指数α*( Hunterα*)值随加热时间和温度升高呈下降趋势,而色品指数b*(Hunter b*)值呈上升趋势,色品...     

ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达

[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×10~6～10×10~6 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。     

猪圆环病毒2型体外诱导RAW264.7细胞氧化应激模型的建立

[目的]探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染量、感染时间与被感染RAW264.7细胞活性氧水平动态变化的相关性,为建立RAW264.7细胞氧化胁迫体外模型提供参考依据.[方法]PCV2原液调至5×106/mL,经10、102、103和104倍稀释(10-1、10-2、10-3和10-4释度)后,感染作用RAW264.7细胞2h,弃病毒液,加入含5% FBS的DMEM培养液继续培养,分别于第4、8、12、24和48 h收集细胞上清液或细胞,测定一氧化氮(NO)、活性氧自由基(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)等指标.[结果]10-1PCV2感染RAW264.7细胞后能有效升高细胞NO、ROS水平,降低细胞GSH水平和GSH/GSSG,升高细胞XOD、MPO和iNOS活性,表明以10-1pcv2感染RAW264.7细胞一定程度上能改变细胞氧化还原状态,诱导细胞产生氧化应激.[结论]PCV2感染能诱导RAW264.7细胞发生氧化应激,并确立10-1 PCV2(5× 105/mL)体外感染RAW264.7细胞4~24 h是建立RAW264.7细胞氧化胁迫模型的最佳条件.     

叶龄与摘花对黄秋葵叶黄素和β-胡萝卜素含量的影响

研究了叶龄与摘花两因子对黄秋葵018、024和0213品系的叶片叶黄素和β-胡萝卜素含量的影响.结果表明:018品系20 d叶龄叶片的叶黄素和卢_胡萝卜素含量最高,024品系30 d叶龄叶片的叶黄素和β-胡萝卜素含量最高,021品系40 d叶龄叶片的叶黄素和β-胡萝卜素含量最高;摘花处理降低了018和024品系叶片的叶黄素和β-胡萝卜素含量,却提高了021品系叶片的叶黄素和β-胡萝卜素含量.