Ghrelin对雌性大鼠促性腺激素分泌及其mRNA表达的影响

【目的】探明Ghrelin在中枢水平上对雌性大鼠促性腺激素分泌及其mRNA表达的影响。【方法】用1 nmol Ghrelin对不同发情周期(发情前期、发情期、发情后期、间情期)雌性大鼠及用不同剂量(0.3,1和3 nmol)Gh-relin对发情后期雌性大鼠分别进行侧脑室注射,15 min后断头采血,离心血清,同时采集脑垂体,采用酶免法测定血清促黄体素(LH)、促卵泡素(FSH)的质量浓度,用实时荧光定量PCR法检测LH mRNA、FSH mRNA在垂体中的表达。【结果】①在发情前期和间情期,Ghrelin可显著抑制雌性大鼠LH的分泌和LH mRNA的表达(P0.05);Ghre-lin对整个发情周期中FSH的分泌不产生影响,仅在发情期抑制FSH mRNA的表达(P0.05)。②在发情后期,0.3和1 nmol的Ghrelin对大鼠促性腺激素分泌和mRNA表达均无影响,但3 nmol的Ghrelin可显著抑制LH、FSH的分泌和LH mRNA的表达(P0.05)。【结论】Ghrelin在中枢水平上对FSH、LH的释放及FSH mRNA和LH mR-NA的表达均有抑制作用,但存在一定的剂量差异,并受发情周期的调节。     

突触素在动情周期大鼠子宫中的分布

【目的】研究突触素(SYP)在大鼠动情周期子宫内的分布情况及变化规律。【方法】选择健康、未产、体质量220~250 g成年雌性SD大鼠,采用阴道涂片法鉴定其动情周期,并采用免疫组化超敏SP(Streptavidin-Perox-idase,SP)法研究突触素在大鼠动情周期子宫内分布的变化规律。【结果】大鼠子宫各层组织中均有不同程度SYP免疫阳性产物的分布,并随动情周期的变化表现出一定规律:子宫内膜着色强弱各期差别不大,黏膜上皮细胞、腺上皮细胞及血管内皮细胞基本不着色或少许胞浆淡染,但其基底面均有较深SYP免疫阳性产物分布,动情前期着色最深,动情期、动情后期、动情间期依次减弱,后2期差别不明显;肌层和子宫外膜中,动情前期着色最深,动情期着色减弱,动情后期着色最浅,动情间期表达量明显回升,后3期与动情前期相比差异均极显著(P<0.01)。【结论】突触素在动情周期子宫中的分布表达具有一定的规律,可能受性类固醇激素的调节。     

S100蛋白在动情周期大鼠子宫中的分布

【目的】研究S100蛋白在动情周期SD大鼠子宫中的分布情况及其变化规律。【方法】采用阴道涂片方法将16只雌性SD大鼠分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期4组,处死各组大鼠取子宫制作石蜡切片,采用免疫组织化学超敏感法(Streptavidin-Peroxidase,SP),研究S100蛋白在大鼠动情周期子宫中的分布规律。【结果】S100蛋白免疫阳性产物在各期子宫各层中均有不同程度的分布,主要定位于子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、肥大细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞中。S100蛋白免疫阳性产物在动情周期子宫内膜、肌层和外膜中的表达变化规律一致:动情前期着色最弱,动情期着色最深,动情后期着色变浅,动情间期着色又加深,表达呈双峰变化趋势。【结论】S100蛋白在动情周期SD大鼠子宫中的表达具有一定规律,可能受性类固醇激素的调节。     

猪Ghrelin的基因克隆及其组织中mRNA分布的研究

从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA,根据已发表的猪Gkklin mRNA序列设计合成引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得了282bp的片段,克隆于pMD-18T载体后进行序列分析,确认PCR产物为Ghrelin cDNA。检测结果表明：初生仔猪的下丘脑和90d生长猪下丘脑、胃底部、十二指肠、空肠、回肠、胰腺、肝脏、肾脏、心脏等部位组织中均有Ghrelin mRNA分布。     

Nesfatin-1及其mRNA在大鼠生长轴中的表达

【目的】探讨Nesfatin-1在大鼠生长轴(下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、肌肉)中的定位及其mRNA的表达情况。【方法】对雌性大鼠进行深度麻醉灌注后,采集下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、腓肠肌肌肉组织,放入4%多聚甲醛溶液中固定,采用免疫组化PV-9000二步法、DAB显色技术检测Nesfatin-1在生长轴上的分布,另取雌性大鼠断头处死,取相同组织用荧光定量PCR方法检测其中Nesfatin-1mRNA的表达情况。【结果】Nesfatin-1主要分布于下丘脑的室旁核、背内侧核、室周核、外侧区、弓状核、视上核、腺垂体、胰腺的胰岛和腺泡及肝脏与肌肉中。平均光密度分析显示,Nesfatin-1在室周核和胰岛的表达量显著地高于其他组织(P0.05),在胰腺腺泡、肝脏及肌肉中的表达量则显著地低于其他组织(P0.05),在下丘脑背内侧核、外侧区和室旁核中的表达量显著高于视上核、弓状核和腺垂体(P0.05)。Nesfatin-1mRNA在胰腺中表达量最高,腺垂体次之,下丘脑和肝脏较低,在胰腺和腺垂体的表达量显著高于下丘脑和肝脏,但下丘脑与肝脏差异不显著(P0.05);在腓肠肌中未检测出Nesfatin-1mRNA的表达。【结论】Nesfatin-1及其mRNA在生长轴中的广泛表达,表明Nesfatin-1可能对大鼠生长发育具有调控作用。     

仔猪海马结构及其周围皮质内生长抑素mRNA的分布

用原位杂交组织化学法研究了５头仔猪海马结构及其周围皮质内生长抑素ｍＲＮＡ的分布。结果表明生长抑素ｍＲＮＡ主要分布于海马的始层和齿状回的多形层，偶见于海马的辐射层和锥体细胞层，此外，在内溴区和海马旁回内也见到标记细胞，主要位于深层。     

长型Leptin(瘦素)受体mRNA在大鼠卵巢中的表达和分布

以5只SD雌性大鼠为研究对象,采用原位杂交技术研究了大鼠长型Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中的表达及其分布。结果表明,Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中,主要分布于黄体细胞以及黄体、初级卵泡、生长卵泡和成熟卵泡周围基质颗粒细胞内。而且在黄体细胞上有黄褐色阳性颗粒密集分布;在基质等其他部位中未能检测到Leptin受体mRNA杂交信号。     

Ghrelin重组质粒的表达及其对大鼠生长性能和胃重的影响

旨在研究Ghrelin重组表达质粒对大鼠生长性能和胃重的影响。从断奶仔猪胃底黏膜中扩增得到了Ghrelin,将其克隆到pcDNA3表达载体中,获得了重组质粒pcDNA3-Ghrelin。选取12只断乳大鼠随机分成2组,每组6只。试验组每只大鼠腿肌注射100μg重组质粒pcDNA3-Ghrelin,对照组注射空质粒。分别在注射后7 d、14 d和29 d称重、记录采食量。试验结束后处死,分离并称量胃重,测定胃液pH值。结果显示:与对照组相比,注射重组质粒大鼠在注射后7 d和29 d时日增重显著增高;采食量无显著差异;料肉比显著降低;胃重和相对质量无显著差异;胃液pH值显著降低。以上结果表明,Ghrelin通过肌肉组织转染表达后对大鼠的生长发育具有重要的调节作用。     

济宁青山羊发情周期不同阶段LHR在输卵管的分布及其mRNA表达

 【目的】探究济宁青山羊发情周期不同阶段黄体生成素受体（LHR）在输卵管不同部位的分布及其mRNA的表达差异。【方法】运用实时荧光定量RT-PCR技术,对LHR mRNA目的片段回收、克隆及序列分析,检测其表达量的差异,同时做LHR免疫组化染色。【结果】LHR阳性物质存在于发情周期各个阶段的输卵管各段,且主要分布在输卵管的黏膜上皮细胞、固有层细胞以及血管内皮细胞中。LHR mRNA在整个发情周期的输卵管中均有表达,但以输卵管漏斗部在发情期的相对表达量最高,且与其它3个阶段差异极显著（P＜0.01）。输卵管壶腹部在发情后期的相对表达量最低,与其它3个时期的差异显著（P＜0.05）。输卵管峡部在发情前期相对表达量最高,与其它3个时期的差异极显著（P＜0.01）。【结论】LHR及其mRNA在山羊输卵管分布及表达反映LH对输卵管功能具有一定调节作用。     

IFN-γ在流产大鼠下丘脑的表达

为了探讨下丘脑对妊娠的调节作用,采用免疫组织化学SP法研究了妊娠中期,正常妊娠大鼠及流产大鼠下丘脑内IFN-γ阳性神经元的形态与分布,同时利用图像分析软件测定了其灰度值。结果显示,正常妊娠大鼠和流产大鼠IFN-γ主要在下丘脑的视前大细胞核、室旁核、视上核、下丘脑前核等部位分布,而流产大鼠的IFN-γ阳性细胞数多于正常妊娠组且表达强于正常妊娠组。表明IFN-γ在下丘脑的表达对妊娠大鼠的神经内分泌调节有重要影响。     

不同生理时期小鼠卵巢的Ghrelin定位研究

研究生长素(Ghrelin)在青春期、妊娠期、哺乳期和泌乳后期小鼠卵巢上的定位,采用免疫组化PV-9000二步法观察Ghrelin在卵巢上的分布。Ghrelin阳性细胞主要分布于4个生理时期小鼠卵巢的卵母细胞、间质细胞、髓质和黄体细胞上。但表达强度和分布范围不同,妊娠期8d黄体与哺乳期18d的卵巢髓质呈强阳性表达。妊娠8d的小鼠卵巢的生殖上皮细胞出现阳性表达。Ghrelin在小鼠卵巢青春期、妊娠期、哺乳期和泌乳后期时期均有表达,妊娠期黄体呈强表达,揭示Ghrelin可能对小鼠不同生理时期尤其是妊娠有一定的调节作用。     

小鼠胸腺Ghrelin阳性细胞的定位分布

以小鼠胸腺组织和原代培养的胸腺上皮细胞为研究材料,采用免疫组织化学和免疫荧光组织化学技术对Ghrelin阳性细胞在小鼠胸腺中的定位分布进行了研究。结果显示,小鼠胸腺中存在大量的Ghrelin免疫反应阳性细胞,主要分布在髓质,而皮质中只有少量呈零星分布的阳性细胞;这些阳性细胞为胸腺上皮细胞和巨噬细胞,其中不同表型的胸腺上皮细胞着色程度存在差异,表明Ghrelin是胸腺微环境的组成部分。     

去势对公猪生殖轴上Ghrelin和功能性Ghrelin受体mRNA的影响

【目的】探讨手术去势(阉割)、免疫去势对公猪下丘脑-垂体-睾丸轴上Ghrelin mRNA和功能性Ghrelin受体1a mRNA表达的影响。【方法】将21头公猪随机均分为免疫去势组、未去势组和手术去势组,免疫去势组于9周龄初次接种免疫去势疫苗,17周龄加强免疫;手术去势组在仔猪出生7d内进行阉割去势;未去势组不作任何处理。25周龄时屠宰所有公猪,取下丘脑、垂体和睾丸组织,以β-actin为内参基因,采用实时荧光定量PCR法检测公猪下丘脑-垂体-睾丸轴Ghrelin及其受体mRNA基因的相对表达量。【结果】手术去势、免疫去势和未去势公猪下丘脑Ghrelin及其功能性受体mRNA基因相对表达量的差异不显著(P0.05),未去势公猪垂体Ghrelin mRNA的相对表达量显著低于手术阉割去势公猪(P0.05),免疫去势公猪睾丸中Ghrelin受体mRNA的相对表达量显著高于未去势公猪(P0.05)。【结论】公猪生殖轴存在Ghrelin mRNA和功能性Ghrelin受体mRNA,且手术阉割去势导致垂体中Ghrelin mRNA的相对表达量增加,免疫去势增加了睾丸Ghrelin受体mRNA的相对表达量,提示Ghrelin可能对生殖轴有调节功能。     

生长激素受体(GHR)mRNA在绵羊皮肤组织切片定位

以地高辛标记的GHR cDNA为探针,利用原位杂交的方法对GHR mRNA在绵羊皮肤组织切片进行定位。结果显示绵羊毛囊中存在生长激素受体基因。因此,可以确定GH对羊毛生长的作用是通过直接作用其位于毛囊上的受体而实现的。     

用原位杂交法研究猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位

用体外转录方法合成了瘦素（leptin）长形受体（Ob-Rb)反应和正义RNA探针，用原位杂交法研究了5冰头2－3月龄母猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位，结果表明，猪瘦素长形受体mRNA分布于下丘脑的的弓状核、腹内侧核，背内侧核，室旁核，室周核和下丘脑外侧区。     

肉用雏鸡下丘脑内生长抑素mRNA的分布

应用地高辛标记反意生长抑素ｃＲＮＡ探针原位杂交技术，研究５日龄ＡＡ肉鸡生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元胞体在下丘脑内的分布。结果表明：生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元主要分布在下丘脑外侧核吻侧部，后内侧核和后核吻侧部以及乳头体外侧核。生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元胞体为圆形，梭形和椭圆形，直径７－２０μｍ。胞质内均有强度不等的黑色或蓝黑色杂交反应物。生长抑素ｍＲＮＡ神经元胞体在下丘脑各我的分布数目存在明显差异，其     

Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达

【目的】探讨Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达及二者表达与FSH之间的关系。【方法】 利用实时定量RT-PCR技术检测体外成熟进程中牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA水平表达变化,观察不同浓度FSH对Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达的作用以及FSH与FSH受体抑制剂的组合对Ghrelin和GHS-R1a基因表达的影响。【结果】 实时定量RT-PCR结果揭示牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA的相对表达量随着成熟过程的延长而呈现一定变化规律,即Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中从8 h开始显著下降并持续此低表达水平到24 h;不同浓度FSH 显著抑制卵母细胞Ghrelin及GHS-R1a mRNA的表达,而FSH 受体抑制剂明显减弱FSH的抑制作用而促进二者表达。【结论】Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中的表达可能随着培养液中FSH升高而降低。     

Ghrelin对奶山羊下丘脑神经肽Y(NPY)和刺鼠相关蛋白(AGRP)mRNA表达的影响

研究Ghrelin对奶山羊下丘脑神经肽Y(NPY)和刺鼠相关蛋白(AGRP)mRNA表达的影响。10只泌乳期莎能奶山羊随机分为试验组和对照组,每组5只。试验组静脉注射Ghrelin(3.0μg/kg),3h后宰杀,迅速取下丘脑,检测下丘脑脑神经肽Y和刺鼠相关蛋白mRNA的表达。结果表明,一定剂量的Ghrelin对NPY mRNA的表达具极显著上调作用(P0.01);对AGRP mRNA的表达也有显著促进作用(P0.01)。以上结果提示Ghrelin可能通过对这些神经肽的作用参与对奶山羊摄食和能量代谢等生理活动的调节。