脂肪组织冰冻切片油红O滴染法的建立

为了提高脂肪组织冰冻切片的染色效果和效率,将传统的脂肪组织石蜡切片油红O染色法改进为冰冻切片油红O滴染法,以用于冰冻脂肪组织脂肪细胞增殖、分化的研究和脂肪相关疾病快速病理诊断。新鲜脂肪组织液氮冷冻后转入-20℃冰箱缓冲30min,在-33℃或-34℃时进行冰冻切片,组织染色采用油红O微量滴染法。本改良的油红O滴染法能应用于冰冻脂肪组织切片染色,清楚地显示脂肪细胞的形态和脂滴的分布,有助于脂肪组织增值分化的研究和相关疾病病理切片分析。该方法快速高效、染色清晰、不易脱片,效果良好,可明显缩短实验周期和减少试剂成本,可使脂肪组织冰冻切片和油红O染色技术更广泛的应用于脂肪组织相关的科学研究和病理诊断。     

用H·E染色显示肠系膜铺片脂肪细胞简法

大多数脂肪组织的染色需作冰冻切片,实验室常用的是苏丹或油红以及硫酸耐尔蓝等染色方法。用石腊切片,苏木精-伊红染色(H.E 染色)法显示脂肪组织,所需时间和步骤较多。笔者在工作中发现,用 H.E 染色法制石腊切片和肠系膜铺片所显示的脂肪组织效果相同,但肠系膜铺片较石腊切片简单易行,便于操作,现介绍如下:     

胰酶分散抗原间接荧光抗体法检测鸡肾型传染性支气管炎病毒及抗体的研究

本文采用胰酶分散法制备抗原，建立了间接荧光抗体法。用此法对人工感染鸡、人工感染鸡胚及自然发病鸡的抗原进行了测定，结果，人工感染鸡肾脏于７２～１６８ｈ１００％检测到特异性荧光，其余时间部分鸡检出特异性荧光；人工感染后病死鸡肾脏均１００％检测到特异性荧光；人工感染鸡胚于４８～１２０ｈ１００％检测到特异性荧光，其余时间部分检出特异性荧光；１７８例自然发病病例中检出抗原阳性病例１５３例。对抗原检测的结果与冰冻切片制备抗原建立的间接荧光抗体法完全一致。用胰酶分散法制备抗原，对已知阳性血清和待检血清进行检测，检测结果与用冰冻切片法制备抗原检测结果一致。该法将检测程序简化，检测时间明显缩短，适合于临诊应用及对鸡群进行抗体监测     

城镇居民鸡群中肿瘤病的初步调查

我们对当地63户居民的鸡群进行了调查,报道如下。一、调查方法与材料处理重点调查成年产卵鸡(1—2年龄)。把第一年检出肿瘤的养鸡户作为初检户,隔年再次检出者为复检户,对两户鸡群坚持了六年监测。检出的病鸡隔离饲喂观察疾病过程;采取血液和骨髓,待其自然死亡或扑杀。记录病理变化,组织块常规石蜡切片,H.E.染色,少数切片作Foot 氏网状纤维染色法;Van Gieson 胶元纤维染色;血片、骨髓片、瘤组织印片作瑞氏染色;据组织学、细胞学作出诊断和肿瘤分类。     

应用荧光抗体检测马鼻肺炎病毒的实验研究

用自然感染马阳性血清及兔免疫血清制备的马鼻肺炎荧光抗体(EHV_1·FA),和马鼻肺炎病毒(HEV_1)不同毒株以及从匈牙利引进的Bartha株标准毒均产生特异性荧光。通过对不同滴度地鼠肾细胞培养液内抗原的测定,表明EHV_1·FA法比补结反应及细胞病变法敏感,高1～2个滴度,应用冰冻切片直接荧光染色检查乳地鼠31份,肝阳性率为83.8％,肺阳性率为77.4％,对照10份均为阴性。检查人工感染HEV_1流产胎儿5份,肝阳性率为100％,肺阳性为80％,检查2份健康驴胎儿,均为阴性。表明应用冰冻切片、直接荧光染色检查马鼻肺炎病毒具有较高特异性和检出率。     

应用荧光抗体法诊断猪瘟的研究 Ⅰ 对人工感染猪瘟猪扁桃体冰冻切片荧光抗体法诊断的研究

Solorzand(1962)首先提出用荧光抗体法诊断猪瘟,认为此法不仅敏感,而且特异性亦高。1963年Stair,1964年Aikenct等应用组织切片和压片做了猪瘟荧光抗体法的研究。1963年Mengeling等应用猪肾继代细胞(РК—15)进行了猪瘟荧光抗体的研究。1969年须原贤治等报导了应用扁桃体冰冻切片荧光抗体染包诊断猪瘟的方法。目前,美、日、法、荷等国均已广泛采用荧光抗体法做为常规的猪瘟诊断方法。荧光抗体     

陈旧褪色病理H.E.染色组织切片重新利用技术的探讨

在家畜病理学教学中和一些病理诊断中,常规H.E.染色切片质量的好坏直接影响病理评判结果。一些切片由于保存时间长久会逐渐褪色,使得显微镜下结构模糊、失真,影响病理疾病诊断的准确性。为了有效利用陈旧褪色病理H.E.染色组织切片,探讨陈旧褪色病理H.E.染色组织切片重新利用技术,采用4种方法(酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法、盐酸乙醇脱色法、氨水脱色法和常规H.E.染色法)对塔里木大学动物科学学院基础兽医实验室陈旧褪色的病理组织切片进行复染。结果表明:酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法复染的组织切片显微镜下细胞核呈蓝紫色,细胞质呈粉红色,复染效果最好;复染过程中酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法的掉片数最少,显著低于其他3种方法(P0.05);4种复染方法间组织完整率差异不显著(P0.05)。说明4种复染方法中酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法的复染效果最好。     

动物组织H.E.染色中常见的问题及解决方法

高质量的H.E.染色切片可为临床病理诊断及动物(含人体)组织结构形态教学、科研提供可靠的依据。制作一张好的H.E.染色切片既要有熟练的技术、合格的标本,还要有良好的试剂等,在制作过程中组织标本的采集、固定、切片、展片、烤片、染色等工序都要严格操作。笔者从动物组织的采集、脱水、透明、切片、防脱片和染色等方面分析了制作高质量H.E.染色切片的常见问题及处理方法,以期为病理诊断、动物(含人体)组织学实验教学及医学药理研究提供可靠的依据。     

用冰冻切片荧光抗体法诊断猪瘟自然病例

采用冰冻切片荧光抗体法对猪瘟自然病例进行诊断,收到了满意的效果,现报告如下。材料和方法一、被检材料:来自全省几个地、市、县的养猪场和个体饲养户的发病猪,主要采集扁桃体和肾脏。大部分病料在本站剖检采集,部分病料由低温保存送检。二、荧光抗体:由中国兽药临察所提     

应用免疫酶组织化学法检测人工感染弓形虫兔主要脏器内病原的分布

给23只体重2～2.5公斤、弓形虫病间接血凝反应阴性的日本大耳白兔,腹腔接种弓形虫滋养体100万个,然后,在濒死期(3～46天)捕杀,取其心、肝、脾、肺和肾五种脏器组织作冷冻切片,进行免疫酶组织化学染色,以检测感染兔主要脏器组织中病原的分布。感染兔组织切片中弓形山经酶标记染色后,在光学显微镜下观察,其形态呈圆形、卵圆形、球杆状、棒状,纺锤状和桔瓣状;虫体的核不显色,体壁被一层呈细小颗粒状深褐色物质包裹,虫体轮廓十分清晰;其他组组细胞均染成淡黄色或淡黄褐色。在11份等检材料中,阳性结果为99.98％。感染后不同时期病原在兔脏器中的分化,以第6～22天检出数量较多,被检五种脏器中病原数量的分布以肝脏最多,心脏、脾脏、肺脏次之,肾脏最少。另外、在本实验中.试用振荡冲洗代替滴片浸泡法,冲洗后.染色背景很好。     

鸡马立克氏病荧光抗体的制备及其在诊断中的应用

用马立克氏病耐过鸡血清制成荧光抗体,检查马立克氏病病鸡,贵州马立克氏病病毒传代鸡(GMDF_2)各脏器冰冻切片及白细胞层抹片,结果见羽根角化上皮和羽囊上皮细胞装及白细胞浆内出现明显的特异性黄绿色荧光。与中监所马立克氏病种毒传代鸡(BMDF_(39))所见荧光一致。其它脏器(肝、脾、肾、肺、心,胸腺、法氏囊)及阴性对照鸡各脏器切片和人工接种鸡新城疫病毒(NDVF_(45))鸡传染性喉气管炎强毒(ILTA_(96)E_(27))对巴氏杆菌C_(4S-1)发病鸡的白细胞层抹片均未见特异性荧光。     

免疫酶染色法与免疫荧光技术对诊断猪瘟的比较

为比较免疫酶染色法(直接法)与免疫荧光技术(直接法)对猪瘟的检出率,我们以41例猪的腭扁桃体和33例肾脏作为被检材料,制成冰冻切片,同时用两种方法进行比较检查。结果表明,免疫酶染色法的检出率略高于免疫荧光技术,现报道如下。     

鸡马立克病和淋巴性白细胞增多症的病理形态学和免疫诊断学

现在淋巴肿瘤的病理形态学和发病机制问题还不能脱离开免疫学观点去观察。因为已查明淋细胞在免疫学上起着患病标志的作用(等1976)。按照上面的观点,我们研究了鸡马立克病和淋巴性白血病免疫系统的组织和器官病理形态学变化特征。在莫斯科地区三个养鸡厂收集的资料。剖检了188只扑杀和死亡的不同年龄的鸡。把由正常、病变组织和器官采取的组织块固定在12％的福尔马林和卡尔那缓冲液中。在冰冻切片机上切片或用石腊块制片,用苏木精伊红按法染     

改装普通切片机进行半薄切片的效果观察

我们利用普通切片机改装成半薄切片机,进行了半薄切片的探讨。初步认为半薄切片具有比石蜡或冰冻切片薄数倍,组织、细胞微细结构能更好地保存,并能呈多色性染色反应的特点。因此,半薄切片能更大限度地满足光学显微镜性能的要     

猪伪狂犬病的诊断

本文通过荧光抗体组织切片、细胞接种、兔子致病性等方法对临床怀疑为猪伪狂犬病的病猪进行了实验室诊断。结果如下:病猪脾脏和淋巴结制备的冰冻切片经PRV荧光抗体染色后,在荧光显微镜下见到特异性荧光;病料经处理后接种Vero细胞可致细胞圆缩和形成合胞体,具有疱疹病毒的培养特征;将病料上清和细胞培养毒分别皮下接种家兔均可引起奇痒、麻痹死亡,呈现典型的伪狂犬病临床特征,同时病死兔脏器的PRV免疫荧光试验也为阳性。根据上述结果证实了该病为猪伪狂犬病。     

外源hDAF基因在转基因猪中的表达研究

衰变加速因子(DAF)是补体激活途径中的一个重要调节蛋白,转人DAF(hDAF)基因猪可以作为异种器官移植的供体.采用直接免疫荧光法对转hDAF基因猪耳组织冰冻切片进行了观察,并应多媒体图文分析系统测定荧光照片的平均灰度.结果表明,14头转基因猪中,有7头动脉肌肉展表达了外源hDAF基因,它可以作为外源基因在供体中表达的主要指标,用于转基因猪的检测.     

猪蓝耳病活疫苗中猪瘟外源病毒检测

试验采用IFA法对2批随机抽样的PRRS活疫苗(每批4瓶)、阳性对照(CSFV)、阴性对照(未被CSFV污染的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV))和特异性试验检测病毒(猪圆环病毒2型(porcine circo virus 2 type,PCV-2))接种于生长良好的PK-15细胞进行间接免疫荧光染色检测CSFV,以期建立快速、准确的间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)调查猪蓝耳病活疫苗中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的污染情况;在不同时间、相同试验条件下,相同批次的疫苗被重复检测了3次。试验结果表明:阳性对照接种的PK-15细胞出现特异性黄绿色荧光,阴性对照、PCV-2和待检样品接种的PK-15细胞均未出现特异性黄绿色荧光,即待检2批PRRS活疫苗未被CSFV污染;通过3次重复操作,最终的检测结果一致,说明IFA检测猪瘟病毒包涵体的特异性强、敏感性高。     

O46血清型鸭源致病性大肠杆菌

为了研究分离自12日龄雏鸭的O46血清型致病性大肠杆菌在鸭不同组织器官的分布,试验用该菌人工感染12日龄试验鸭后,于不同时间采取鸭各组织器官制作冰冻切片,进行直接荧光抗体染色,观察该菌在不同组织器官的分布.结果表明:特异性荧光首先出现在肝脏、心脏、脾脏、肺脏等内脏器官,而后出现于胸腺、法氏囊等免疫器官,最后在脑部也有可...     

牛支原体间接免疫酶标组织化学检测方法的建立

为建立检测牛支原体的间接免疫组织化学(简称免疫组化)方法,分别以鸡抗牛支原体(Mycoplasma bovis)IgY、羊抗鸡IgG-HRP为一抗和二抗,对牛支原体菌体涂片和牛支原体阳性肺脏组织切片进行免疫组化染色,并对染色条件进行优化,确定组织触片及组织切片的最佳免疫组化条件。在最佳条件下对病死犊牛病料切片进行免疫组化检测,并以细菌分离培养和PCR方法进行验证。结果显示,免疫组化法阳性标本与分离培养和PCR结果相符,而阴性对照和替代试验均为阴性。结果表明本试验建立的间接免疫组化方法可用于检测临床病例组织样本及培养物中的牛支原体,具有特异性和可靠性,为探究该病原在机体内的定位、动态分布规律及致病机理提供了手段。     

猪骨髓白血病一倒

作者在 Kanagawa 地区检查到一例猪骨髓白血病。该病例是一头3岁令的杂种长白母猪,营养状况良好,体重约200公斤,宰前检查显然是健康的。屠宰后取其肠系膜基部的静脉血制作血液涂片,用姬姆萨氏液染色。肿瘤组织用10％福尔马林溶液固定。石腊切片在 PH7条件下进行苏木精和伊红(HF)染色,希夫氏过碘酸(PAS)反应和甲基胺兰染色。经福尔马林溶液固定的冰冻切片材料按照 McJunkin氏改良法进行过氧化物酶反应。