罗非鱼与斑马鱼幼鱼肠内植物乳杆菌代谢比较研究

为比较外源添加植物乳杆菌在罗非鱼、斑马鱼幼鱼肠内的代谢情况,用104cfu/m L、105cfu/m L、106cfu/m L及107cfu/m L 4个浓度植物乳杆菌JCM1149分别浸浴罗非鱼、斑马鱼幼鱼3 d后取全肠,另外用107cfu/m L植物乳杆菌JCM1149分别浸浴罗非鱼、斑马鱼幼鱼7 d,在浸浴结束后0 h、4 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4d、5 d取全肠。将各肠道样本匀浆处理涂板计数,比较罗非鱼与斑马鱼幼鱼肠内植物乳杆菌的代谢情况。结果显示,浸浴3 d后,对比不同浓度下肠内植物乳杆菌绝对丰度变化,当浓度大于105cfu/m L,罗非鱼肠内植物乳杆菌绝对丰度无显著性差异,然而,斑马鱼肠内植物乳杆菌绝对丰度随浸浴浓度增加而显著升高(P0.05);以107cfu/m L浸浴7 d后,罗非鱼与斑马鱼肠内植物乳杆菌均显著降低(P0.01),其中斑马鱼表现更为迅猛,24 h时降低2个数量级,罗非鱼则只降低1个数量级。上述结果表明,植物乳杆菌鱼类肠内代谢存在明显的宿主差异性。     

嗜气芽孢杆菌ZDXC-01产芽孢培养条件的优化

为了提高嗜气芽孢杆菌的有效活菌数和芽孢数,采用单因素筛选和正交试验法对菌株的发酵条件进行了优化。结果表明,优化后的最佳发酵条件为发酵时间30～36 h、接种量5%、温度37℃、转速200 r/min、起始p H值7.5、装液量25 mL/250 mL。优化后发酵菌液含菌量为5.8×10~9cfu/mL,与初始发酵工艺的发酵菌液含菌量(2.2×10~9cfu/mL)相比,提高了163.6%;优化后发酵菌液芽孢数为5.5×10~9cfu/mL,与初始发酵工艺的发酵菌液芽孢数(1.8×10~9cfu/mL)相比,提高了205.6%。     

生物源杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内活性评价

为筛选出可用于苹果轮纹病防治的生物源杀菌剂,采用菌丝生长速率法测定了9种生物源杀菌剂对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制效果。结果表明:测试药剂对苹果轮纹病菌丝生长均有较好的抑制效果。其中,室内毒力最强的3种药剂是50亿cfu/g多粘类芽孢杆菌(WP)、100亿cfu/g枯草芽孢杆菌(WP)和300亿cfu/g解淀粉芽孢杆菌(WP),EC50分别为3. 155×10~(-2)μg/m L、3. 429×10~(-2)μg/m L和8. 856×10~(-2)μg/m L;室内毒力相对较弱的为1000亿cfu/g荧光假单胞杆菌(WP)、5%香芹酚(AS)、大蒜油(EC)、0. 3%丁子香酚(SL)、1%蛇床子素(EW)、3亿cfu/g哈茨木霉菌(WP),EC_(50)分别为7. 556μg/m L、1. 480×10μg/m L、1. 719×10μg/m L、5. 901×10μg/m L、6. 601×10μg/m L、1. 181×10~2μg/m L。综上,50亿cfu/g多粘类芽孢杆菌(WP)、100亿cfu/g枯草芽孢杆菌(WP)和300亿/g解淀粉芽孢杆菌(WP)有望成为防治苹果轮纹病的候选生物源杀菌剂。     

复合有益菌配比优化及池塘应用效果的研究

将沼泽红假单胞菌和枯草芽孢杆菌量的配比优化成复合有益菌,并将该复合有益菌应用于泥鳅养殖池塘。结果表明,当沼泽红假单胞菌(3×109cfu/mL)和枯草芽孢杆菌(3×108cfu/mL)配比为4:1时,对水质的改善效果最好;在池塘应用试验中,当该复合菌液用量为0.5mL/m3时,能够增加养殖池塘的溶氧值、降低CODMn、总氮和总磷,试验池塘与对照池塘相比,泥鳅体重增长量提高很多,因此,有益菌之间的协同作用,能够更好地改善养殖生态环境,促进泥鳅的生长。     

大菱鲆出血性败血症病原茵的分离与鉴定

从全身呈弥漫性出血的养殖大菱鲆.Scophthalmus maximus肝脏、腹水和肾脏中分离到3株菌落形态相同的优势菌,取菌株L-59231通过注射(菌液浓度分别为4×lO.、5×107 cfu/mL,剂量0.1 mL/尾)、灌喂(4×106 cfu/mL,0.5 mL/尾)和创伤浸泡(4.7×105 cfu/mL)三种途径对大菱鲆进行人工感染试验.结果表明:以上三种途径均可造成大菱鲆的发病,灌喂感染和创伤浸泡对试验鱼的感染率为100%和57.1%,未发现死亡;注射感染的死亡率分别为100%和71.4%.药敏试验表明,庆大霉素、四环素、氯霉素、红霉素、链霉素等对L-59231菌株有较强的抑制作用.该菌呈短杆状,革兰氏染色阴性,氧化酶阳性,接触酶阴性,V-P试验阴性,硝酸盐还原反应阳性.根据<常见细菌系统鉴定手册>所描述的弧菌属的生理生化特性,综合形态观察、生理生化特征、16S rRNA基因序列等试验结果,可将L-5923l菌株鉴定为创伤弧菌.     

牦牛坏死梭杆菌感染病的流行与防控

牦牛坏死梭杆菌病具备十分严重的危害,直接影响养牛产业的经济效益。本文在此基础上分析牦牛坏死梭杆菌病的感染症状,针对发病特征指出防治与预防措施,以期为此后牦牛坏死梭杆菌病的综合防治提供更多的借鉴依据。     

嗜水气单胞菌对克氏原螯虾免疫相关因子活性的影响

将嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila )用灭菌生理盐水调节至1.5×104cfu/mL(I组)和1.5×103cfu/mL(Ⅱ组)的浓度后,注射法接种克氏原螯虾(Procambarus clarkii)(人工感染),定时检测供试克氏原螯虾的总血细胞数量(THCs)、淋巴液中酚氧化酶(PO)、超氧化物...     

片球菌素对酸奶中单核细胞增多症李氏杆菌的抑菌作用

将从泡菜中分离出的一株产片球菌素的乳酸片球菌接种至MRS培养基,培养后采用基于pH的吸附和解吸附法提取片球菌素,以单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595(4.55×108cfu/mL)为指示菌,采用琼脂扩散法,测定片球菌素的抑菌活性.结果表明,其对单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595的最小抑菌浓度为1.6 g/mL,随机活性单位为21.875 AU/mg.将片球菌素(0.01 mg/mL)添加到人工污染单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595的酸奶(6.305 log cfu/mL)中,1 d以后其菌落数下降为4.301 log cfu/mL,并可以在30 d的实验周期内保持抑菌作用.     

20份广藿香种质对青枯病的抗病性评价

为获得广藿香抗青枯病种质,对广泛收集到的农艺性状较好的20份广藿香种质进行青枯病抗性鉴定。利用稀释分离法对广藿香青枯病病原菌进行分离。通过病害症状,致病性测定,ITS序列比对及系统发育树构建等将广藿香青枯病病原菌鉴定为Ralstonia solanacearum。采用伤根接种法、蘸根接种法、拌土接种法和3×106 cfu/mL、3×107 cfu/mL、3×108 cfu/mL 3种不同菌量人工接种室内培养的广藿香苗。结果表明,以菌量为3×107 cfu/mL和蘸根接种法作为抗性鉴定方法为宜。利用该方法鉴定20份广藿香种质的抗病性,发现不同种质感染青枯病的程度有差异,其中无高抗种质,但有1份中抗种质(17号),其余有6份中感种质(占30%),13份高感种质(占65%)。另外,17号种质的农艺性状和挥发油含量较高,有望在育种上得到进一步利用。     

猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)1型感染小鼠模型的建立及其病理学观察

为了针对我国目前流行菌株猪胸膜肺炎放线杆菌1型(App-S1)菌进行致病性研究,同时成功建立实验动物感染模型并完成病理学观察。本实验选取25只昆明小鼠随机均分为5组,4个试验组分别腹腔注射4×104、4×105、4×106、4×107 cfu/mL的App-S1菌液1mL/只,对照组注射生理盐水1mL/只。不同浓度菌液攻毒的小鼠3d内出现不同的临床表现,部分小鼠出现典型的肺炎、心外膜炎等症状并伴随有死亡现象。其证明了App-S1对实验动物昆明小鼠具有致病性,同时经计算得出了App-S1对昆明小鼠的LD50为4.48×105.85cfu/mL。将死亡小鼠进行剖检,选取病灶组织器官、分离细菌并经PCR鉴定为与攻毒App-S1相同的阳性菌株,同时制作切片,进行病理学观察分析。这些结果表明App-S1腹腔接种SPF级昆明小鼠可以复制出典型的胸膜肺炎病例,同时能够成功地人为构建实验动物感染模型,对今后App-S1致病性及其临床诊断方面的研究具有借鉴意义。     

用斑马鱼检测猪链球菌2型的致病力

 【目的】猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2）菌株致病力各异，以斑马鱼为实验动物，建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1 005尾AB系斑马鱼（Danio rerio）以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。【结果】结果斑马鱼接种菌株12 h后呈败血症病变，96 h内对斑马鱼的半数致死量（LD50）在5.36×103至5.01×104 cfu之间。上述接种菌株的斑马鱼均从体内重新分离到接种菌。同时检测1株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株，斑马鱼接种后96 h内不表现任何病变，亦不出现死亡，对斑马鱼的LD50>106 cfu。SS2有毒力株和无毒力株对斑马鱼的LD50差异极显著（P＜0.01）。【结论】斑马鱼可作为研究猪链球菌2型菌株感染的动物模型。     

阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物治疗猪链球菌病的研究

为研究阿莫西林钠-酒石酸泰复方药物乐菌素治疗猪链球菌病的药效学,选用60只15g左右的昆明鼠,以多重耐药的临床分离猪链球菌为病原,以腹腔注射为感染途径,对猪链球菌的病理模型进行了复制,按照Reed-Munch法计算LD50为9.61×108cfu·mL-1。在此基础上,选用80只昆明鼠,接种LD50菌液,分别口服阿莫西林钠,酒石酸泰乐菌素及阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物。结果表明,阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物组的作用效果明显优于单药组,小鼠存活率为80%,阿莫西林钠组的小鼠存活率为70%,酒石酸泰乐菌素组为60%。     

检测猪血清口蹄疫病毒非结构蛋白3AB抗体ELISA方法的建立

用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3AB经纯化后作为抗原,建立了3AB间接ELISA方法,该方法可用于判定被检动物是否感染了口蹄疫病毒.重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以兔抗猪IgG/HRP酶结合物作为第2抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法.用该方法检测了大量不同背景的猪血清,并与3ABC-I-ELISA检测结果进行比较.结果表明:3AB-I-ELISA和3ABC-I-ELISA的总符合率为98.9%,而且3AB-I-ELISA的特异性高于3ABC-I-ELISA.     

口蹄疫病毒3AB试剂盒的检测及比较

以重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原,研制了口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒,该试剂盒可用于判定被检动物是否感染口蹄疫病毒。重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以辣根过氧化物酶标记的重组蛋白A/G作为第二抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法。结果表明,在1 746份免疫猪血清中,3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%;在1 077份健康非免疫猪血清中,3AB-ELISA对健康非免疫猪血清的特异性为98.68%;在36份人工感染猪血清中,3AB-ELISA对阳性检出率为100%。而牛的特异性的各项指标和阳性检出率分别为94.04%,97.96%和100%。猪/牛口蹄疫病毒非结构蛋白酶联免疫吸附试验检测试剂盒与国外同类试剂盒比较,阳性检出率高出12.5个百分点。     

广西林用白僵菌生物农药对家蚕的致病性试验

为探讨广西森林防虫使用的白僵菌农药对家蚕的致病性,以南宁市林用白僵菌农药及环江爱山林场试验站生产的白僵菌农药对家蚕进行致病性试验。结果表明,以南宁市林用白僵菌农药感染二龄起家蚕时,家蚕白僵菌病发病率随白僵菌孢子悬浮液浓度的增加而逐渐升高,当白僵菌孢子悬浮液浓度为3.00×108个孢子/mL时,发病率达100.00%,其LC50为6.00×106个孢子/mL;以2.40×107个孢子/mL的环江爱山林场试验站生产的白僵菌农药感染二龄起家蚕,发病率亦高达100.00%;而在五龄第5 d蚕体表撒白僵菌农药,家蚕虽能正常摄食、熟蚕、上蔟结茧,但上蔟7 d后全部僵死在茧中,未能化蛹。可见,广西林用白僵菌生物农药对家蚕具有很强的致病性。     

斑马鱼幼鱼嗜中性粒细胞对副溶血弧菌清除的动态变化

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是人-兽-鱼共患的致病菌,严重威胁食品安全和人类的健康。为了研究宿主嗜中性粒细胞清除细菌感染的动态变化过程,利用红色荧光蛋白标记的副溶血弧菌Vp57~(RFP)菌株感染受精后48 h(hours post fertilization,hpf)的斑马鱼(Danio rerio)幼鱼耳泡,建立局部感染模型,并以大肠杆菌(Escherichia coli)Ec01菌株为对照,系统比较了副溶血弧菌和大肠杆菌的半数致死剂量(median lethal dose,LD_(50))、存活曲线以及和嗜中性粒细胞相互作用的动态过程,RT-qPCR验证炎症相关基因il1b和il10在感染前后的表达量变化。结果显示副溶血弧菌和大肠杆菌感染斑马鱼幼鱼的LD_(50)分别为7.90×10~8 CFU/mL和1.14×10~(11) CFU/mL,与感染大肠杆菌相比,斑马鱼感染副溶血弧菌后招募嗜中性粒细胞的速度更快,且数量更多。RT-qPCR结果发现斑马鱼感染副溶血弧菌后在相同时间点能够激活更高的il1b和il10基因的表达,引起强烈的炎症反应。基于以上研究,我们建立的副溶血弧菌-斑马鱼幼鱼耳泡局部感染模型,为进一步研究嗜中性粒细胞清除副溶血弧菌感染的动态过程,以及深入揭示天然免疫应答机制提供了依据。     

致羔羊脑炎粪肠球菌人工感染小鼠模型的建立

选用断奶和成年的健康小鼠108只,分组经不同途径接种对羔羊具有致病性的粪肠球菌,分别进行半数致死量测定、临床症状观察、细菌学和病理学检查。结果显示两种日龄小鼠均对该菌株易感,最佳感染途径是腹腔注射,皮下注射次之,鼻腔不引起感染。感染小鼠表现出典型脑炎症状及病理变化。该菌株对小鼠的LD50为6.31×1010cfu,从感染死亡小鼠脑脊液、大脑、血液及部分实质器官中均分离出该菌。小鼠感染粪肠球菌与羔羊自然感染症状及病变相似。该动物模型的建立为进一步探究粪肠球菌感染的体内动态分布、感染机制、毒力因子研究及免疫应答奠定了基础。     

乳酸菌复合系SFC-2增菌培养基的优化

通过对乳酸菌复合系SFC-2培养基的组分进行响应面优化,从而得出SFC-2优化培养基配方为白砂糖10g／L、蛋白胨31．36g／L、牛肉膏15．57g／L、酵母膏10g／L、乙酸钠7．3g／L、柠檬酸三铵4g／L、KzHP044g／L、MgS04·7H200．58g／L、MnSO4·H200．25g／L。SFC-2在此培养基中经30℃,16h培养,其活菌数可达到4．0×10^8cfu／mL,较MRS-S中（8．2×10^7cfu／mL）提高近5倍。