克孢灵对家蚕微孢子虫灭活作用的研究

用不同浓度克孢灵处理家蚕微孢子虫悬液后人工饲料接种、饲育和载体处理后桑叶接种、饲育,进一步考察了其对家蚕微孢子虫的灭活效果。结果显示15mg/L的浓度作用30min,或者25mg/L作用5min,对载体试验的游离微孢子虫可以达到完全灭活的目的。该研究结果,为大田生产、尤其蚕种生产部门利用该药防治微粒子病,并把该药正式开发为专门针对N.b孢子的桑叶消毒剂提供了可靠的依据。     

家蚕质型多角体病毒双链核糖核酸分子杂交的研究

为了研究家蚕质型多角体病毒(CPV)的致病机理及其早期检测,我们建立了该病毒双链核糖核酸(dsRNA)分子杂交技术.dsRNA分子杂交的关键在于其解链及使解链后的单链RNA(ssRNA)与其互补DNA杂交.我们采用90%的二甲基亚砜或8M的尿素使CPV—dsRNA解链.并合成了它的cDNA探针.用此探针完成了硝酸纤维膜上的CPV核酸斑点及基因组片段转移分子杂交的研究.     

家蚕质型多角体病毒研究的若干新进展

家蚕质型多角体病毒(BmCPV)分为9个株系,可使20种昆虫感染发病。本文阐述了近年来BmCPV在交叉感染、结构、基因组、结合蛋白与功能等方面的一些研究新进展。据报道BmCPV-1的两个毒株(H株与I株)的基因组全序列已被测定公布,由10个节段的双链RNA构成;众多研究认为BmCPV具有5种结构蛋白(VP1-5),推测VP1为依赖于RNA的RNA聚合酶,VP2、VP5分别为核衣壳蛋白、外壳蛋白,VP3、VP4各为三磷酸核苷酸结合蛋白、非特异性的核酸结合的关键蛋白,5种结构蛋白在BmCPV病毒复制包装过程中发挥着不同的功能。     

家蚕质型多角体病毒苏州核包涵体小种的纯化

从BmCPV_t内发现和分离出一株新的核包涵体小种,初步命名为家蚕质型多角体病毒—苏州核包涵体小种(Cytoplasmic Polyhedrosis Virus——Suzhou nuclear polyhedra forming strain,简称CPV——Suzhou N strain),家蚕感梁CPV——Suzhou N Strain引起的多角体病,与国内外已知的CPV各变异株不同。本病蚕的多角体只在中肠组织圆筒形细胞核内检出,多角体内有许多病毒粒子,病毒粒子球状,具有核蛋白紫外吸收特征性光谱和较强的感染活性,病毒核酸初步鉴定为dsRNA。     

家蚕四角形质型多角体病毒的研究

运用生物实验、组织切片、电镜显微技术研究了家蚕六角形野生株(GCPVh)和四角形变异株(GCPVt)质型多角体病毒对家蚕的致病力、感染组织细胞病变、多角体超薄结构。初步表明:GCPVt比GCPVh对蚕致病力强、感染后的中肠细胞病变有差异,同时观察到多角体超微结构在病毒粒子的包埋状态、多角体蛋白的电子密度等方面也存在着一定的差异。     

家蚕质型多角体病毒RDRP基因的序列测定及同源性分析

应用分段RTPCR方法和分子克隆技术从家蚕质型多角体病毒(Bombyxmoricytoplasmicpolyhedrosisvirus,BmCPV)中国株的dsRNA中成功地分3段克隆了RDRP基因(RNAdependentRNApolymerase),大小分别为1442、827、1675bp,进行了基因全序列拼接,获得37kb的全长RDRP基因(GenBank序列号为AY496445)。通过在线blast分析,与BmCPV1、DpCPV1、LdCPV1、LdCPV14、TnCPV15核苷酸同源性分别为89%、81%、81%、541%和509%,氨基酸同源性分别为965%、931%、929%、411%和335%。根据核苷酸同源性与氨基酸同源性构建的进化树具有较好的一致性。通过ClustalX软件分析,定位了该病毒RDRP基因的3个保守区域(酸性区,核苷酸结合的核心区和催化功能核心区)。     

家蚕核型多角体病毒四角形多角体的研究

BmNPVt是从BmNPVh中筛选出的一株四角形多角体病毒突变株。研究表明:BmNPVt的潜伏期、致病力、寄生部位、细胞病变同BmNPVh无甚差异;BmNPVt和BmNPVh之间存在干扰现象;Bm-NPVt的增殖类似于BmNPVh,但囊膜的形成方式两者之间不同。四角形多角体表面粗糙,具有小孔;它的外层电子密度较高,有一厚度为1500A的中间层。多角体蛋白晶格间距离为48A,分子量为29000dolt。同六角形多角体蛋白相比,四角形多角体蛋白的Glu含量较低,Tyr含量相对较高,胰酶酶切图谱两多角体蛋白存在差异。此外,多角体蛋白中Cu、Fe的含量和对酸碱溶解性,两多角体间也存在差异。BmNPVt为杆状,大小为330—340×85nm,纯病毒具有典型的杆状病毒紫外吸收特性,BmNPVt—DNA的变性温度为83℃,分子量为6.94×10~7dolt。镇江株、苏州株、日本株之间病毒DNA的EcoRI酶切图谱存在差异。     

家蚕质型多角体病毒(苏州株)S10片段的cDNA克隆及序列分析

为了探讨质型多角体病毒基因的遗传与变异,通过RT-PCR从家蚕(Bombyx mori)质型多角体病毒(Cytoplasmic Polyhedrosis Virus,CPV)苏州株(BmCPV-suzhou)的dsRNA中成功克隆了S10片段。该片段cDNA含有一个744bp的完整开放阅读框(ORF),编码由248个氨基酸残基组成的多角体蛋白,其分子量为28.46kD,等电点为7.12。比较不同宿主来源的CPV多角体蛋白基因氨基酸序列发现,同型CPV多角体蛋白基因高度相似,而不同型的CPV多角体蛋白之间几乎没有同源性;基于质型多角体蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸序列的系统进化分析表明,BmCPV的不同株系与舞毒蛾(Lymantria dispar)CPV(LdCPV)和马尾松毛虫(Dendrolimus punctatus)CPV(DpCPV)聚为一类,表明三种CPV的亲缘关系较近。研究结果为深入探讨质型多角体病毒的变异与分子进化提供了新的参考。     

家蚕对质型多角体病毒感染抵抗性研究——Ⅱ.家蚕对质型多角体病毒感染抵抗性的配合力及遗传力

试验以二化性品种为A组,以含多化性血统的二化性品种和多化性品种为B组,采用不完全双列杂交法配制32个组合(正、反交),估算家蚕对中肠型脓病抵抗性的配合力,遗传力.结果表明:亲本间抵抗性的一般配合力相对效应值,32个组合特殊配合力相对效应值差异达显著、极显著水准;亲本一般配合力相对效应值在含多化性血统的二化性品种及多化性品种之间的差异大于二化性品种之间的差异;组合特殊配合力相对效应值在同一品种的正反交中和同一品种与不同品种杂交中表现均不同;群体配合力方差分析,正交中一般配合力方差(Vg%)达76.63,特殊配合力方差(Vs%)为23.37.反交中一般配合力方差(Vg%)是45.12,特殊配合力方差(Vs%)为54.88.前者加性作用明显,后者非加性作用突出一些,遗传力的分析,正交广义遗传力为87.84%,狭义遗传力67.32%,反交广义遗传力97.06%,狭义遗传力43.79%,加性作用减弱,推测在抵抗性遗传中尚存在若干主效基因,彼此间有显性、上位等作用.     

家蚕质型多角体病毒在蚕体内的形态发生及其细胞病理变化

在扫描电镜下观察.家蚕质型病毒多角体大多数为8角六面体和12角八面体两种形状.三龄家蚕被质型多角体病毒感染9天后.病毒在中肠上皮细胞的胞质内完成病毒的装配,并形成病毒多角体.但在一些细胞核内发现块状多角体蛋白,这种多角体似乎不包含病毒粒子.主要细胞器的病理变化亦十分显著.     

家蚕质型多角体病毒多角体形态变异的分析

利用扫描电子显微镜观察了在家蚕幼虫体内传代三次后的家蚕质型多角体病毒的多用体形态，发现有部分畸形多角体，这种畸形多角体主要出现在四角形系列中。畸形多角体有二种类型：嵌合式和缺陷型，前者数量多于后者。     

家蚕对质型多角体病毒病抵抗性的遗传和育种方法研究——Ⅱ.家蚕对质型多角体病毒病抵抗性的育种方法研究

本研究采用以杂交固定种72秋为材料的抗CPV病的三系选择(选种系、添毒系、对照系)和以大造×苏34F_1、苏8×武1F_1为材料的抗CPV病的杂种选择.提出了以现实遗传力作为选择效率的一个指标.试验结果认为,家蚕对CPV病抵抗性的选择效率,以选择系的选择方法为好.以杂种为材料的抗CPV病选择,发现以大造为亲本的杂种材料进行抗病性选择后,维持了一个以杂合基因型为主的群体.     

家蚕品种资源对质型多角体病毒抵抗性的初步比较试验

初步对 2 81个家蚕品种资源进行了抗质型多角体病毒比较试验。 2 81个蚕品种中 ,抗性品种占12 4 5 % ,较抗性品种占 32 74 % ,较感性品种占 33 81% ,感性品种占 2 1 0 0 %。不同品种间抵抗性差异较大 ,最高达到千倍以上。不同地理系统间抵抗性差异数百倍 ,其强弱依次为热带多化性品种 >中系二化种 >日系一化种 >中系一化种 >日系二化种 >欧系一化种     

夏秋季节蚕质型多角体病

蚕病型多角体病俗称蚕中肠型脓病,多发于夏秋蚕期,是蚕茧生产的主要病害之一.     

苜蓿尺蠖核多角体病毒对家蚕核多角体病毒在蚕体内复制的干扰

昆虫杆状病毒具有相对狭窄的宿主域.虽然苜蓿尺蠖核型多角体病毒(AcMNPV)和家蚕核型多角体病毒(BmNPV)两者DNA序列的同源性在95%左右,但AcMNPV不能在家蚕细胞中很好的复制,对家蚕幼虫不具有致病能力,但其基因组中个别基因可在被接种该病毒的家蚕幼虫体内表达.这些基因的表达可能对共感染的优势病毒BmNPV复制所需原料蛋白及转录因子形成竞争,进而抑制BmNPV在家蚕幼虫体内的复制表达.     

家蚕抗质型多角体病毒(BmCPV)的研究进展

由家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedosis virus,Bm CPV)感染引发的家蚕中肠型脓病对蚕业生产的危害严重,目前对该病害的防治仍局限于消毒预防。国内外学者希望从筛选的对Bm CPV有较强抵抗力的家蚕品种中寻找抗性基因和分析抗性机制,并通过转基因技术过量表达抗性基因或经RNA干扰病毒侵染增殖关键基因等策略来提高家蚕防御Bm CPV侵染的能力。本文综述家蚕抗Bm CPV研究在上述方面取得的重要进展,并对家蚕抗Bm CPV的分子机制进行分析与讨论,为该领域展开更深入的研究提供较为系统的参考信息。