不同ELISA检测方法在检测出壳雏鸡禽白血病病毒感染中的应用

通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K感染组,以无菌生理盐水作为对照组,在8胚龄时以卵黄囊接种的方式感染SPF鸡胚,建立鸡胚携带ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的垂直感染模型。采集各组雏鸡胎粪样品和血浆样品,死亡鸡胚肝脏样品,死亡雏鸡胎粪样品、血浆样品和肝脏样品,其中血浆和肝脏样品需接种鸡胚成纤维细胞系(DF-1细胞)进行病毒分离,各样品以4家公司提供的ALV-p27抗原ELISA试剂盒进行检测,并以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行平行检测,比较阳性检出率和灵敏度。结果显示,4家公司的ALV-p27抗原ELISA试剂盒对于同一样品的阴阳性判定结果基本一致,但灵敏度存在差异;胎粪样品直接ELISA检测不能将ALV阳性鸡只全部检出,相对于胎粪样品,血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测更具有灵敏度优势。本试验所建立的对比方法不仅有助于评估4家公...     

PCR检测血液样品方法在禽白血病净化中的应用研究

本研究选择山东某地方品种祖代种公鸡的177份血液样品和177份泄殖腔棉拭子样品为试验材料,应用ELISA、病毒分离、PCR等方法对禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原进行检测。结果显示,血清、泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原阳性率分别为20.34%(36/177)、26.55%(47/177);病毒分离率为1.70%(3/177),血液样品PCR方法检出J亚群ALV(ALV-J)阳性率为0.56%(1/177),序列分析结果显示为ALV-J,但该血液样品的病毒分离结果为阴性。研究表明,PCR检测血液样品方法的应用有助于减少禽白血病净化所需的病毒分离结果的可能缺漏。在此基础上,优化并进一步拓展对其他亚群ALV的PCR方法检测,可作为禽白血病经典净化方法的有力补充,并加快我国地方品种鸡禽白血病的净化进程。     

禽白血病病毒ELISA检测方法的建立与初步应用

本研究以在毕赤酵母系统中表达并纯化的p27重组蛋白为包被抗原,HRP标记的兔抗鸡IgY为酶标二抗,建立了一种快速有效的禽蛋白血病病毒ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。结果显示,该方法具有良好的特异性和重复性;与市售商品试剂盒相比,符合率为96.92%,且更为敏感。应用建立的ELISA方法检测来自吉林省内鸡场314份疑似样品,阳性检出率为75.15%。本研究为禽白血病病毒的检测与诊断提供了一种简便、有效的检测方法。     

禽白血病的检测和净化技术

禽白血病是由禽白血病病毒引起鸡生长受阻、免疫抑制和产能下降的一种禽类重要传染性疾病。目前无有效治疗禽白血病的方法,主要通过净化的手段进行防控。本文综述禽白血病病毒检测和净化技术的研究,以期为种禽和商品禽饲养中防控净化该禽病提供参考。     

盱眙县禽白血病的检测与净化

禽白血病对养禽业危害极大,近年来随着研究的深入和检测与净化技术的发展,禽白血病的感染率明显下降.介绍了盱眙县禽白血病的检测与净化工作,以供参考.     

禽白血病净化中胎粪检测方法的研究

禽白血病是呈世界性分布的可垂直传播的病毒性肿瘤性疾病,严重制约着养禽业的发展。该病主要通过对原种核心鸡群实施持续性逐一检测并淘汰禽白血病阳性鸡只,从而实现疾病净化。胎粪检测是建立阴性核心鸡群的第一步,因此胎粪检测方法的建立是禽白血病净化方案的重要一环,是禽白血病净化工作的基础保障。在规模化养殖场原种核心鸡群的禽白血病净化中,选择准确的、合适的检测方法至关重要。本文通过对1日龄雏鸡胎粪样品进行不同方式的处理,比较其对禽白血病病毒检测结果准确性的影响,结果显示：胎粪样品经过冷冻后可提高检出率;冷冻的次数及冷冻的方法对检测结果无影响;多份胎粪混样检测会影响样品的检出率,有假阳或假阴性的产生。研究结果为规模化养殖场快速、有效和准确地检测禽白血病病毒提供了技术支撑。     

禽白血病病毒抗体间接ELISA 检测方法的建立及初步应用

以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒（ALV）重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10％,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验（IFA）有更高的符合率.     

J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立

本研究分离纯化了具有反应活性的J亚群禽白血病JL-2株gp85表达蛋白,并以其为抗原,开展了相关反应条件、特异性、重复性、敏感性、现地应用以及国外试剂盒符合率等方面的研究,初步建立了J亚群禽白血病ELISA诊断方法.     

间接ELISA检测抗禽白血病病毒抗体方法的建立

禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)是禽白血病的病原,可引起鸡的免疫抑制和肿瘤。净化种鸡群是控制ALV的主要方法之一。本研究将ALV的p27基因克隆到表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化后的p27-GST融合蛋白为抗原包被,经过条件优化,建立了检测鸡血清中抗ALV抗体的间接ELISA方法。与IFA检测结果比较,该方法比IDEXX ELISA试剂盒有更高的符合率。可用于禽白血病病毒感染根除的大规模检测,并具有低成本、易操作的特点,能同时检测到针对ALV所有亚群的抗体。     

禽白血病净化检测中不同样品应用的比较

为研究泄殖腔棉拭子、胎粪、血浆、精液、蛋清等不同检测样品在种鸡场禽白血病净化实施中的适用性和差异,将不同类型样品的禽白血病病毒p27抗原ELISA检测结果进行分组比对:一是将泄殖腔棉拭子与其他样品比对;二是以血浆病毒分离检测结果为基准,将血浆与蛋清、精液样品比对;三是将蛋清与胎粪样品比对.结果显示,泄殖腔棉拭子样品阳性...     

种鸡场禽白血病净化技术

禽白血病是呈世界性分布的可垂直传播的病毒性肿瘤性疾病,严重制约着养禽业的发展。该病尚无切实可行的治疗方法,也无有效的疫苗,唯一有效的控制方法是净化。本文笔者总结出了适合大规模养殖场原种鸡群的禽白血病净化方案,为国内种鸡场禽白血病净化的示范推广提供技术支持。     

浅谈禽白血病的检测方法

禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)引起的一种传染性肿瘤病.ALV在鸡群中的存在分为A、B、C、D、J、E等多种亚型.近10年所报道的分离的ALV毒株大部分为J亚群,少部分为A、B亚群.目前国内外已经建立了很多ALV的检测方法,如酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、聚合酶链式反应(PCR)、原位杂交(ISH)、荧光定量RT-PCR(QRT-PCR)等.本文就目前国内外禽白血病的检测中较常用的一些方法做一简述.     

禽白血病检测方法的研究进展

禽白血病已经成为危害养禽业的主要疾病之一。近几年,国内外专家学者发表了很多种检测禽白血病的方法,本文就当前几种较为常用的检测方法进行综述,主要包括聚合酶链式反应(PCR)、环介导等温扩增(LAMP)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光检测方法 (IFA)等,期望能够为禽白血病的临床诊断提供参考。     

4种ELISA试剂盒检测禽白血病病毒效率比较

对采集鸡蛋清、泄殖腔肛拭子以及蛋清或泄殖腔肛拭子检测阳性的鸡只之血清接种DF-1细胞的上清液,分别采用A、B、C、D 4种ELISA试剂盒进行ALV-P27抗原的3次试验检测。结果显示,A试剂盒的蛋清和病毒分离的敏感度最高,B试剂盒对肛拭敏感性最高。A试剂盒的3次试验检测的符合率都在87%以上,并且较稳定,结果可信度高;C试剂盒的符合率在79%以上,相对稳定;B和D试剂盒的符合率都不稳定。     

不同样本对禽白血病ELISA检测结果的影响

为了分析不同样本对应用ELISA法检测禽白血病阳性检出率的影响,试验将20只10日龄SPF鸡随机均分为试验组和对照组,试验组接种禽白血病病毒,对照组接种生理盐水,7 d后采集各组SPF鸡的肝脏组织、血清、泄殖腔拭子和骨髓进行ELISA检测,统计禽白血病的阳性检出率。结果表明:试验组SPF鸡的肝脏组织、血清和骨髓的禽白血病检测结果相对一致,阳性检出率为100%;而泄殖腔拭子的阳性检出率为70%,相对其他样本结果偏低。说明以泄殖腔拭子为样本时,其ELISA检测结果可能具有假阴性现象,综合考虑,以血清为样本进行禽白血病ELISA检测的阳性检出率更为可靠。     

猪伪狂犬gE抗体ELISA检测在净化中的应用

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒所引起的多种动物急性、热性传染病。临床上多以发热和神经症状为特征，主要引起种猪不育，妊娠母猪发生流产、产死胎和木乃伊胎，新生仔猪和断奶仔猪死亡，育肥猪生长缓慢等，在临床上难以区分于慢性猪瘟和猪蓝耳病等等，给养猪业造成巨大经济损失。该病病毒为疱疹病毒科病毒，具有高度的潜伏性感染，这种潜伏感染随时都有可能被体内外和环境变化的应激因素刺激而引起疫病爆发，     

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化

利用原核表达的禽白血病病毒(ALV)P27蛋白作为抗原制备的单抗作为包被抗体,以制的酶标兔抗P27作为酶标抗体,在国内首次建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELISA方法.该方法对禽白血病P27抗原的最小检出量为5 ng/mL,通过统计学试验证明自制的诊断试剂具有良好的特异性和稳定性.与IDEXX试剂盒的平行实验确定自制诊断试剂S/P＞O.17为阳性判定标准.应用此方法对北京附近鸡场对抽样检测687份蛋清样品,检测结果与IDEXX的禽白血病抗原检测试剂盒符合率达到100%.     

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立

利用抗J亚群禽白血病病毒（ALV—J）囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9，建立了检测ALV—J env抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清．结果均为阴性，无交叉反应；抗ALV—J阳性血清与ALV—J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断；ALV—J阳性血清经酸处理后，ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV—J阳性血清样本进行电镜观察，可见ALV—J样病毒粒子及ALV—J样免疫复合物。经与间接免疫荧光（IFA）检测ALV—J env抗体结果比较表明，建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率，群体符合率为8／9。这些结果表明，本研究建立的ELISA方法在ALV—J的诊断中具有很好的应用前景。