快速筛选苏云金杆菌高毒力菌株的有效方法

对7株苏云金芽孢杆菌菌株进行了cry 1基因检测、晶体形态观察、晶体蛋白SDSPAGE以及杀虫活性检测。结果表明，综合菌株的PCR结果、晶体形态和晶体蛋白图谱结果可以预测其杀虫特性。根据菌株预测的杀虫特性进行有目的的生物测定，可以快速、准确地筛选到对特异害虫具高毒力的菌株。     

苏云金杆菌新菌株对金龟子幼虫的毒力比较

金龟子类幼虫是一类重要的地下害虫,可危害农、林、果、菜、草等多种植物。由于这类害虫危害植物地下部分或地面附近根茎部分,具有一定的隐蔽性,而且分布广,也是难以防治的世界性害虫。随着人们对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,以下简称Bt)资源调查与研究的深入,新的具有特异杀虫谱的Bt菌株陆续被发现。1992年,Ohba等在世界上首次从土壤中分离筛选出对金龟子幼虫具有特异杀虫活性的Bt新菌株BuiBui。笔者于     

苏云金芽孢杆菌抗蝗虫生物测定模式建立

在人工饲养条件下,研究了蝗虫种群的消长规律与环境因子的关系。结果表明,蝗虫每雌可产卵3～10块,每块达55.0粒,孵化率为76.32%,蝗蝻雌雄比为1.5～2∶1。建立了以蝗虫为试虫,苏云金芽孢杆菌的毒力生物测定模式。选择的最佳生测条件与蝗蝻的最适生长条件一致,温度30±1℃,湿度65%～75%,500～600lx光照14～15h。同时分析了蝗虫的饲料选择及各种环境因子对生测结果的影响。     

棉铃虫作供试虫的苏云金杆菌制剂毒力生物测定的研究

本研究采用棉铃虫初孵幼虫为试虫,结果表明:初孵幼虫个体间差异小,测定结果准确性高;36℃下培养48小时,其药剂浓度与供试虫死亡相关系数皆在0.9以上。测定周期仅需2天;供试虫数40头以上,结果重复性好;利用本测定技术,检测100多批试验样品和产品,结果准确可靠,变异系数在20％以下。     

苏云金芽孢杆菌对甜菜夜蛾幼虫毒力的生物测定方法

甜菜夜蛾的室内人工饲养及不同感染因素对生物测定结果的影响研究表明,用人工半合成饲料在室内可以大量饲养甜菜夜蛾,其生长发育历期、化蛹率、羽化率、雌雄性比和产卵均表现正常。感染时间、幼虫日龄和感染温度对生物测定结果有一定影响,随着感染时间（３、５、７天）的延长,生物测定中致死中浓度ＬＣ５０显著降低,测定结果的重复性增强;而随着感染幼虫日龄（１、２、３天）的升高,ＬＣ５０有显著升高,且测定结果的重复性降低,依次为３２．１、６４．９、１７１．１μｇ／ｍｌ;随着感染温度（２２、２５、２８℃）的升高,ＬＣ５０有较显著降低;饲料的存放时间（４～８天）对生物测定的结果只有轻微影响。     

苏云金杆菌HBF-1菌株晶体蛋白活化及对金龟幼虫毒力的影响

通过SDS-PAGE研究了缓冲液pH值对HBF-1菌株晶体蛋白的降解活化作用及其对晶体蛋白杀虫毒力的影响.结果表明,晶体蛋白在牛胰蛋白酶和金龟子幼虫中肠液作用下的降解程度,随着缓冲液pH值的增加而加深.幼虫中肠蛋白酶在缓冲液pH值达到8.0时,就能完全降解晶体蛋白;而胰蛋白酶在pH值达到11.0时,才能把晶体蛋白完全降解.产生的活力片段分子量近似,均在63.0kD左右.在pH11.0条件下,胰蛋白酶的降解速度大干幼虫中肠液.生测结果显示,晶体蛋白经中肠液水解后,其毒力明显增强,在7d和14d增效率分别达到1.25和1.00.同时,经强碱性缓冲液处理后,也起到了较强的增效作用.     

苏云金杆菌制剂标准化及毒力效价测定——Ⅰ.用菜粉蝶幼虫测定苏云金杆菌毒效

以室内人工饲养的菜粉蝶幼虫为供试虫,用微量点滴定量感染方法,测定苏云金杆菌制剂的毒力效价,结果较为精确,重复性好,操作简便,完成一次测定只需时2天,标准差14.88％。本文为第一部,介绍生测程序、感染方法和5批测定结果。     

夜蛾科昆虫高毒力苏云金杆菌菌株的分离和筛选

从山东省采集的750份土样中分离出苏云金芽孢杆菌菌株57株,这些菌株的晶体形态主要有菱形、圆形等。以夜蛾科害虫粘虫和甜菜夜蛾初孵幼虫为试虫,通过生测筛选出一株高毒力菌株QCL-1。菌株QCL-1对甜菜夜蛾的毒力显著高于标准菌株HD-1,对粘虫的毒力与HD-1相当。     

苏云金杆菌蜡螟变种制剂毒力的离体生物测定

用碱和酶相继降解苏云金杆菌蜡螟变种制剂,然后作用细胞,能使细胞发生病变直至死亡。结果显示制剂浓度和细胞死亡率成良好的线性关系,经过5次平行实验证明,离体生测与活体无显著差异,可以用离体生测代替活体生测。     

小菜蛾作供试虫生物测定苏云金杆菌制剂毒效的研究

作者多年来试用过数种昆虫,最后证实小菜蛾对国内当前大量生产的苏云金杆菌几个血清型菌株均具有一定的敏感性,制定了用芥蓝菜子叶人工大量饲养的条件和方法,三年来室内饲养45代,各项生物学特征稳定,无退化现象,饲养和感染方法简便、经济、易行,因此,小菜蛾是测定我国苏云金杆菌制剂质量的理想昆虫,建议试用后推广。     

不同生长期蔬菜叶片对Bt制剂生物测定结果的影响

在室内用蔬菜叶片浸渍苏云金杆菌药液测定对小菜蛾的ＬＣ５０试验结果指出，供试蔬菜的生长期对测试结果有明显的影响。用营养生长旺盛期的菜叶，所得的ＬＣ５０值比营养生长末期的菜叶高出４倍左右，差异显著。因此，用叶片浸渍法测定药液毒力，提供生长期标准一致的植物是保证试验准确性的必要条件     

苏云金杆菌无芽孢突变菌株的选育

采用亚硝基胍、紫外线等处理苏云金杆菌HD-1和7216菌株,获得8663,8714、87085 3株无芽孢突变菌株。分别进行摇瓶试验,并将8663进行7吨发酵罐试验,证明该菌株的发酵性能与原出发菌株基本相当。采用B(?)制剂标准化的程序进行生物测定,效价基本稳定。     

苏云金杆菌制剂标准化的程序和方法

本文对以小菜蛾为供试虫,测定苏云金杆菌制剂标准化的程序和方法进行了详细描述。按此程序,以美国标准品HD-1-S-1980作对照,对中国标准品CS5ab—87进行效价标定。17次生物测定的平均效价为8633±915IU/mg,变异系数10.6％。表明使用该生物测定程序和方法测定的结果重复性好,易于推广应用。     

几株高效苏云金杆菌菌株对玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎的毒力测定

本文以玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎为供试昆虫，对筛选出的７株高效苏云金杆菌菌株的孢晶制剂进行了毒力测定。以ＬＣ５０为衡量各菌株的毒效指标，属血清型Ｈ６的“Ｇ０２”菌株对上述４种供试昆虫的毒力最高，属血清型Ｈ３ａ３ｂ的“８０－１”菌株对棉铃虫和粘虫的毒力也高于“ＨＤ－１”菌株。这一研究结果为今后生产高效的苏云金杆菌制剂及生产菌株的轮换提供了后备菌株     

用小菜蛾测定苏云金杆菌毒力的感染方法

用两种感染方法,以3龄小菜蛾作供试虫,美国标准品HD—1—1980作对照的生物测定法,对H_3和H_5两菌株粉剂的毒力效价进行了比较测定,提出了检定该类制剂毒力适用和可靠的方法及其测定程序。     

应用高压液相色谱测定苏云金杆菌发酵液中的苏云金素

通过正交试验将测定苏云金素所用的HPLC流动相确定为:0.075M磷酸二氢钾水溶液,加1％甲醇并用磷酸调pH至2.5。所选定的色谱条件可保证苏云金素的分离度为100％。苏云金素浓度从0.6μg/ml至900μg/ml,其峰面积与素的含量之间呈很好的直线关系。苏云金素的最低检出量为2.25×10~(-3)ng。用发酵样品进行测定,不同浓度素的峰面积对数与生测的试虫死亡机率值之间的相关系数为0.998。以HPLC法和昆虫生测法同时测定结果各重复间的变异系数(C.V.)为0.2～1.5％,测出浓度与实际浓度的平均不符合率为2.4％;昆虫生测法的测定结果各重复间的变异系数为14.6～16.2％,测出浓度与实际浓度的平均不符合率为17.0％。用这两种方法同时测定了3个苏云金素发酵样品中素的浓度,两种方法所得结果的平均符合率为86.84％。