酶联免疫法检测饲料中莱克多巴胺

莱克多巴胺(Ractopamin)属于β-兴奋剂.β-兴奋剂是营养重分配剂的一种,是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物,它可加快畜禽的生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率.β2-兴奋剂常见的有克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇等,克伦特罗俗称"瘦肉精".随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其他β 2-兴奋剂的使用逐渐增加.莱克多巴胺是美国最新研制出的一种β 2-兴奋剂,由于莱克多巴胺有类似于盐酸克伦特罗的作用,在动物组织中残留,可能对人体产生不利影响,所以我国农业部、卫生部和国家药品监督管理局明文禁止莱克多巴胺用于动物养殖.目前,我国还未统一监测莱克多巴胺的方法,因此,建立莱克多巴胺的快速准确的测定方法以适合市场监测十分必要.目前,国内测定β 2-兴奋剂测定的方法主要有酶联免疫法、高压液相色谱(HPLC)法及气质联用(GC-MS)法等,而酶联免疫分析技术具有检测快速(检测过程只需2 h)的特点.经试验研究,应用酶联免疫法检测莱克多巴胺,回收率可达到75%～95%,相关系数(r值)可超过0.99,而最低检测限能达到0.5ng/mL.     

酶联免疫吸附法检测猪尿中的莱克多巴胺

莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）属于β2-兴奋剂的一种，它作为饲料添加剂使用，能显著促进动物生长，增加饲料转化率和瘦肉率，已经被美国及其他一些国家批准作为猪的饲料添加剂。但包括RAC在内的β2-兴奋剂在我国及欧盟都被禁止在食品动物的饲养过程中使用。     

酶联免疫吸附法测定猪尿中莱克多巴胺残留的研究

用酶联免疫吸附法对猪尿中莱克多巴胺进行了残留检测,结果:该方法的最低检测限为0.92μg/L;50%抑制浓度的平均值为2.7μg/L;回收率在(65.2±3.9)%(～86.6±6.1)%,批内变异系数≤17.8%,批间变异系数小于≤15.6%。试验表明该方法可用于莱克多巴胺残留量的筛选检测。     

酶联免疫法检测饲料中莱克多巴胺的探讨

莱克多巴胺(Ractopamine)属于β-兴奋剂。β-兴奋剂是营养重分配剂的一种,是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物,它可以加快畜禽生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率。β2-兴奋剂常见的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等,克伦特罗俗称"瘦肉精"。随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其他β2-兴奋剂的使用逐渐增加。莱克多巴胺(ractopamine)是美国最新研制出的一种β2-兴奋剂,由于莱克多巴胺有类似于盐酸克伦特罗的作用,在动物组织中残留,可能对人体产生不利影响,所以我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局明文禁止莱克多巴胺用于动物养殖,目前我国还未统一监测莱克多巴胺的方法,因此建立莱克多巴胺的快速、准确的测定方法以适合市场监测十分必要。目前国内对β2-兴奋剂测定的方法主要有:酶联免疫法、高压液相色谱(HPLC)法以及气相色谱-质谱朕用法(GC-MS)等,而酶联免疫分析技术具有检测快速(检测过程只需要2h)的特点。经过试验研究,应用酶联免疫法检测莱克多巴胺,回收率可达到95%以上,相关系数(r值)可达到0.99以上,而最低检测限能达到0.5ng/ml。     

酶联免疫技术用于检测动物体内莱克多巴胺残留的研究进展

本文介绍了莱克多巴胺的基本性质及相关检测研究进展,并就近年来莱克多巴胺酶联免疫检测研究进展进行了充分论述。分析了莱克多巴胺分子结构中抗原改造位点、抗原决定簇及莱克多巴胺抗体制备的最新成果;讨论了莱克多巴胺残留检测时各种样本处理方法的差异及适用范围;对莱克多巴胺酶联免疫检测方法的建立进行了简单介绍。     

肉品中莱克多巴胺残留的酶联免疫快速检测方法的建立

用自主制备的莱克多巴胺特异性抗体建立了猪肉样品中莱克多巴胺药物残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并将该检测系统与高效液相色谱法(HPLC)进行了对比分析。结果显示:莱克多巴胺药物残留的酶联免疫检测体系的检测范围为1～100 ng,灵敏度为0.12 ng/mL,检测限为1 ng/mL,回收率为80%～100%,与同类药物如盐酸克仑特罗、硫酸特布他林及硫酸克仑特罗的交叉反应率均小于0.01%;采用HPLC方法进行莱克多巴胺药物残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为83%～100%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊于HPLC方法。     

酶联免疫法鉴别乳制品掺假的研究进展

本文主要介绍了利用多克隆抗体和单克隆抗体,通过不同的酶联免疫方法(ELISA)对乳制品掺假进行鉴别的研究进展,并从多个方面进行了总结,探讨了今后的研究方向和发展趋势。     

酶联免疫法测定猪肉组织中莱克多巴胺的残留量

莱克多巴胺（Ractopamine）是一种结构和功能类似于肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物．属于β-兴奋剂，它可以促进畜禽生长．降低酮体脂肪含量．起到改变酮体瘦肉和脂肪比例的作用．从而提高了瘦肉率。但是．人类食用了残留有菜克多巴胺的食品动物后．会出现不同程度的中毒现象．表现为骨骼肌收缩增加．破坏快缩肌纤维与慢缩肌纤维间的融合．引发肌肉震颤．四肢和面部肌肉尤为明显，其他中毒症状包括心动过速，心率失常，腹痛，肌肉疼痛，恶心和眩晕等。     

用竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病病毒抗体的研究

对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感，本研究     

高灵敏夹心酶联免疫法检测乳清中酪蛋白糖巨肽

乳品生产企业和销售商们经常会遇到在液奶及乳制品中加入干酪乳清的问题。近年来,通过分析酪蛋白糖巨肽(GMP)的含量来确定乳中是否掺杂干酪乳清。非免疫法检测乳制品中GMP既昂贵又耗时,而且灵敏度低。目前,开发了一种新的夹心酶联免疫法(ELISA)实现了原料乳中乳清掺假问题的定性和定量检测;该方法以兔多克隆抗酪蛋白糖巨肽作为抗体,以已知浓度的液态干酪乳清(0.02%～20%)为标准品建立校正曲线。方法的检测限为0.047%(V/V),定量限为0.14%(V/V)。抗体具有专一性,与乳中其他成分(κ-酪蛋白除外)没有交叉反应,能够成功的用于乳制品中酪蛋白糖巨肽的检测。试验样品的检测回收率在95.62%～113.88%。批间和批内变异系数分别小于6%和7%。该抗体在3个月内,其准确度和重复性保持不变,并且可以随时取用。     

倍他米松ELISA检测方法的建立

为建立倍他米松(BET)ELISA检测方法,先使BET与琥珀酸酐反应,再采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原;其次,利用免疫动物获得多克隆抗体,经Sephrose 4B-proteinA方法对抗体进行纯化;最后,建立倍他米松ELISA检测方法。结果表明,免疫抗原偶联成功,获得了亲和力较高的多克隆抗血清,间接竞争ELISA测定其滴度为102 400、IC15为6.60×10-5 ng/mL和IC50为0.97ng/mL。该方法适用于残留在动物性食品中的BET现场大批量检测。     

莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争ELISA检测方法的建立

用混合酸酐法将莱克多巴胺(Rac)与匙孔蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测得偶联物Rac-KLH浓度为3.6 mg/mL,Rac-BSA浓度为6.2 mg/mL。以偶联物Rac-KLH作为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/O-Ag-14进行融合。以Rac-BSA作为包被抗原,经间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D9、1F3、2C11、5C3、3A10、4A8、6B7、6D5、7C11、7D3。其中单克隆抗体5C3和3A10间接ELISA效价1∶500 000,对莱克多巴胺的半数阻断浓度(IC50)均为3.98 ng/mL,对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的IC50均大于2 000 ng/mL;对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的交叉反应率均小于0.2%。间接竞争ELISA检测莱克多巴胺在0.5～100 ng/mL范围内为线性分布,确定的最低检测限为0.5 ng/mL。     

直接竞争ELISA法快速检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留

采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶（SD）与人血清白蛋白（HSA）相连制备了免疫抗原SD—HSA,与卵清白蛋白（OVA）相连制备了包被抗原SD—OVA,用过碘酸钠法将SD—OVA与辣根过氧化物酶（HRP）连接制备了酶标抗原（SD—OVA—HRP）。用SD—HSA免疫BALB／c小鼠,经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体,利用单抗建立了直接竞争ELISA方法。该方法具有好的特异性,在1—729ng／mL浓度范围标准曲线方程Y=12．05x＋2．2538,R^2=0．995,IC50为41．7ng／mL,在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为20、20、20、5、5μg/kg。在20μg／kg和100μg／kg水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋样品中添加,回收率为82．78％-104．6％。与高效液相色谱方法比较,二者的阳性符合率为81．3％,阴性符合率为83．3％,总符合率为88．9％;与同类英国RANDOX试剂盒比较,二者符合率为100％。     

氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法.标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10％和30％;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93％～108％、96％～110％、92.5％～104％和93％～102％.     

氯羟吡啶抗原合成和多克隆抗体制备

本研究以氯羟吡啶原药为基础,合成了带羧基的氯羟吡啶衍生物,经质谱鉴定结构正确,并用活性酯法和氯甲酸异丁酯法合成抗原,紫外测定偶联比率和最终抗原蛋白浓度,免疫制备抗血清并测定血清特异性和灵敏度,为建立氯羟吡啶酶联免疫法(ELISA)奠定坚实基础。     

磺胺二甲嘧啶快速直接竞争ELISA试剂盒的研制及应用

在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶(SMZ)残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒,并与高效液相色谱(HPLC)分析方法比较和验证.将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中,用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的磺胺二甲嘧啶残留,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定.研究结果表明,磺胺二甲嘧啶浓度在0.5～50 ng·mL-1,方法的检测灵敏度IC10 =0.47 ng·mL-1,板内平均变异系数为7.4％,板间平均变异系数为9.27％.猪肝、猪肉与鸡肉组织样品中SMZ最低检测限分别为3.91、4.81与1.59 μg·kg1.在添加10.0～50.0 μg·kg-1时,平均回收率在85％～110％.试剂盒的检测时间为12.6 min,在4℃至少可以保存6个月.研制的试剂盒可以满足猪肝、猪肉和鸡肉中磺胺二甲嘧啶残留的现场快速检测.     

甘肃地区猪肉中莱克多巴胺残留量的检测分析

莱克多巴胺属于β-兴奋剂,在动物性产品中残留量过高会危害人类健康。本试验采用酶联免疫法来检测甘肃部分地区猪肉中莱克多巴胺的残留量,根据酶联免疫试剂盒检测出猪肉中莱克多巴胺的检出限为24 μg/kg,以莱克多巴胺的6种标准品测得莱克多巴胺的标准曲线,以此检测甘肃部分地区猪肉中莱克多巴胺的残留量是否超出检出限,并分析不同地方莱克多巴胺残留量存在差异性的原因。     

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原捕获ELISA检测方法的建立

用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立BVDV抗原捕获ELISA(AC-ELISA)检测方法,优化反应条件并对该方法的稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为5μg/mL,兔多抗血清最佳质量浓度为10μg/mL;单抗在4℃包被12~24 h,多抗在37℃作用1 h为双抗体的最佳反应条件;酶标抗体最适稀释度1∶10000,最适作用时间为1 h;采用1%BSA和1%明胶分别在抗体包被后和加入待检抗原反应后进行两次封闭效果好。用AC-ELISA方法检测临床采集的11份牛腹泻病料和12份健康牛组织样品,同时以病毒分离和RT-PCR检测方法做对比,3种方法符合率很高。研究表明AC-ELISA方法稳定性好,可用于BVDV的临床快速检测。     

沙丁胺醇人工抗原的制备及ic-ELISA方法的建立

以合成沙丁胺醇(SAL)完全抗原为基础获得针对SAL的多克隆抗体,建立检测SAL的间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定基础.为此,分别用混合酸酐法和活化酯法制备SAL-BSA免疫原和SAL-OVA检测原,免疫新西兰大白兔获得SAL多抗血清,建立检测SAL ic-ELISA...     

竞争间接ELISA检测谷物饲料中的玉米赤霉烯酮

应用抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体（ＺＥＮ－ＭｃＡｂ）建立了竞争间接ＥＬＩＳＡ，用以检测玉米、小麦、饲料中的玉米赤霉烯酮（ＺＥＮ），最低检出量为０．０５ｎｇ／ｍＬ检测范围为０．０５～５００ｎｇ／ｍＬ。检测掺合ＺＥＮ（２５～５００ｎｇ／ｇ）的小麦、饲料、玉米样品，平均回收率，玉米为１０５．８％、小麦为９０％、饲料为１０３．９％；平均批内和批间变异系数，玉米为３．８％、５．８％，小麦为１２．７％、２８％，饲料为１５．２％、６．８％。对玉米、小麦、饲料自然样品检测，竞争间接ＥＬＩＳＡ的检出率高于薄层色谱（ＴＬＣ），检测程序简易快速。