驴抗犬细小病毒IgG的研制

用关中驴制备抗犬细小病毒（CPV）免疫球蛋白，预防和治疗犬CPV感染。制备CPV抗原复合物，通过免疫驴，用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体（IgG），经过物理化学检定、血清学、免疫金电镜技术、动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG，免疫金电镜可观察到抗原抗体免疫复合物；血凝抑制试验（HI）≥1：512（IgG浓缩浓度为60mg/mL)；可保护犬免受CPV攻击；室温保存半年，4℃两年效价不变。已成功地应用CPV免疫驴制备出高效价特异性抗CPV－IgG。     

应用辛酸法-DEAE纤维素吸附过滤法提纯的IgG制备RIA用二抗

用辛酸沉淀法结合DEAE纤维素吸附过滤法,从兔、绵羊、驴和人血清中提取IgG,经PAGE和ID分析,其纯度和免疫活性较好.用提纯的兔IgG和人IgG制备的二抗,抗体效价高(驴抗兔IgG高达1024倍,羊抗人IgG达256倍),特异性好,抗体亲和力强,可供作RIA免疫分离沉淀试剂.     

驴抗猪繁殖与呼吸综合征病毒IgG注射液的制备工艺及质量监控

用繁殖与呼吸障碍综合征病毒灭活抗原加佐剂接种关中驴 ,采用基础免疫和强化免疫程序 ,于接种后 9～ 1 1d采集其血浆 ,从中分离 ,提纯免疫球蛋白IgG。制备出抗PRRSV特异性的IgG注射液。对制备出的五批IgG注射液产品进行了血清中和试验 ,结果显示IgG抗体效价均达 1∶32 0以上 ,表明该法可以成功制备抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒免疫球蛋白IgG注射液 ,并对其制备工艺及质量监控进行了多次试验 ,结果显示该生物制剂制造的工艺流程重复性好 ,IgG获得率较理想 ,质量稳定     

关中驴抗猪瘟病毒IgG制备工艺及质量监控研究

本实验用配有佐剂的猪瘟病毒抗原，按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴，用两次盐析法沉淀提取抗猪瘟病毒IgG，其中对提纯制备工艺所涉及的pH值，温度，硫酸铵浓度等工艺进行探索比较。继之对单位体积内的蛋白浓度，酶标抗体效价和稀释度进行了标化，同时对质量监控进行了平行性分析。本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物；研制用于预防和治疗猪瘟的抗病毒免疫球蛋白（IgG)生物制剂获得理想结果。经6省，市，区试用后，深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。     

驴源抗犬细小病毒IgG抗体的制备及其抗病毒活性的分析

为制备驴源抗犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体,首先利用F81猫肾细胞扩增CPV-2a病毒株,经甲醛灭活和氢氧化铝胶乳化,制成CPV灭活疫苗,病毒滴度为10-8.5 TICD50,然后通过肌肉分点注射免疫驴,连续免疫3次(第1次注射3mL,后2次各注射6mL),每次免疫前采血,分析驴血清的抗体滴度和中和抗体效价;利用盐析法和离子交换层析法分离和纯化驴血清IgG。用IgG处理幼犬(50mg/kg),用CPV-2a毒株对IgG处理的犬进行攻毒,分析IgG抗CPV的活性。结果显示,免疫3次后驴血清的CPV抗体滴度为1∶8 192,中和抗体效价为28.5。用制备的IgG处理幼犬未发现不良反应,经CPV-2a攻毒实验证实IgG处理犬的发病率和死亡率分别为33%,0%,均明显低于非处理组(分别为100%,83%),说明制备的驴源IgG具有明显的抗CPV活性。     

猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究

通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体，对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究，从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应，与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15细胞无染色反应。单克隆抗体与猪瘟病毒感染的PK15细胞或猪肝、肾小血管内皮细胞中的猪瘟病毒呈现较强的特异性棕色着染，表明该单抗是针对猪瘟病毒的单克隆抗体，对研究猪瘟病毒在宿主细胞中的生命活动和繁殖定位有非常重要的意义。该单抗命名为YNF，培养上清液和腹水的抗体效价分别为1：80和1：10000。抗体蛋白属IgG类，亚类为IgG2／κ。     

猪瘟荧光抗体的制备及其在自然感染病例中的应用

用硫酸铵盐析法从抗猪瘟高免血清中提取免疫球蛋白，应用搅拌标记异硫氰酸荧光素（FITC），葡聚糖凝胶G-25层析除去标记物中游离的荧光素，制备出猪瘟荧光抗体（CSF—FA）。经测定．标记荧光抗体的染色效价为1：4。用此浓度荧光抗体，结合常规诊断检测猪瘟，从33例采自陕西省不同地区自然发病猪的扁桃体中检出猪瘟阳性病例7份，阳性率21．3％（7／33）。结果表明，制备的荧光抗体诊断猪瘟敏感性高、特异性强；陕西省猪瘟自然感染发病率高。     

FcγRⅡB介导的PRRSV感染的抗体依赖性增强作用

将PRRSV Hn-1/06株阳性血清（中和效价为1∶2）做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞（PAM细胞）表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。     

关中驴对6株动物病毒抗原的免疫应答试验

以关中驴为试验动物 ,用猪瘟病毒(HCV )、犬细小病毒 (CPV )、兔瘟病毒(RHDV)、鸡新城疫病毒 (NDV)、伪狂犬病毒(PRV)等病毒进行免疫 ,检测所产生的抗体效价 ,并与猪、鸡、兔、犬、及猫等动物进行比较。试验结果表明 ,关中驴与对照动物产生的抗体效价一致 ,证明了关中驴可替代其它动物用于生物制品研究     

猪瘟病毒C株杂交瘤细胞的构建及单克隆抗体的制备与鉴定

采用猪瘟病毒C株毒（CSFV C strain）免疫BALB/C小鼠,按照常规单克隆抗体制作方法构建并筛选出能稳定分泌抗猪瘟单克隆抗体杂交瘤细胞株4株,分别命名为1C9,1B11,3C8和3G9,经鉴定,4株单克隆抗体腹水效价达到104~106。交叉试验及特异性试验表明,所制备的McAb与鸽新城疫病毒、猪蓝耳病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、鸡减蛋综合征病毒无交叉反应性,均完全针对猪瘟病毒（CSFV）抗原决定簇,具有高度特异性。抗CSFV McAb的成功制备,为进一步研究建立CSFV的快速诊断方法奠定了基础。