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以非洲菊叶柄基部的愈伤组织为起始材料,通过匀浆将其切割成小细胞团,再利用该小细胞团为外植体进行农杆菌介导的GUS基因转化。标记基因GUS的转化及转化愈伤组织的X-Gluc染色证明了该方法可以高频率地(〉80%)获得转化愈伤组织;通过对转化愈伤组织的再生培养,获得了8株X-Gluc染色阳性植株;转化植株的PCR检测和Southern分子杂交检测进一步表明,目的基因已整合入非洲菊基因组中. 相似文献
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根癌农杆菌介导的香蕉炭疽菌转化 总被引:1,自引:0,他引:1
利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化方法,以香蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)的分生孢子为受体,pTHPR1为双元载体,成功实现了植物病原真菌香蕉炭疽菌的遗传转化.在诱导培养基pH 5.6、乙酰丁香酮200 μg/mL、共培养时间24 h等适宜条件下,最高转化率可达260个转化子/106个孢子.对转化子的PCR检测表明,T-DNA已整合到香蕉炭疽菌的基因组中,转化子的遗传表现稳定. 相似文献
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根癌农杆菌介导的悬铃木叶片遗传转化体系研究 总被引:5,自引:1,他引:5
以葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因瞬时表达率为指标,研究了不同因子对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的悬铃木叶片遗传转化系统的影响.结果表明,预培养9 d的悬铃木叶片在OD600值为0.7的根癌农杆菌菌液中浸染10 min后,再在含有100μmol.L-1的乙酰丁香酮的共培养培养基上黑暗条件下共培养3 d叶片的遗传转化效率最高.该体系为进行农杆菌介导目的基因培养悬铃木新品种奠定了基础. 相似文献
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根癌农杆菌介导Bt杀虫基因对花椰菜的转化初报 总被引:4,自引:1,他引:4
采用 Ti质粒 p KSB带有 Bt杀虫蛋白基因、NPT 选择标记基因及 GUS基因 ,通过根癌农杆菌 L BA40 44菌株的介导 ,将 Bt杀虫基因导入花椰菜品种中。试验以花椰菜下胚轴为外植体 ,将下胚轴切段置于分化培养基 (MS+ 6 - BA1 .0~ 2 .0mg/L + NAA 0~ 0 .5 mg/L)上 ,对影响转化的种种因素进行了试验。得到了转化的愈伤组织及再生植株 ,用组织化学法检测 GUS活性 ,观察到愈伤组织内的转化细胞呈阳性蓝色反应 相似文献
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【目的】研究根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化条件。【方法】以"中烟99"叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组,并对其遗传体系进行了优化,对筛选获得的转基因烟草植株进行检测。【结果】根癌农杆菌介导的芪合酶基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的烟草外植体,用稀释10倍的GV3101菌株菌液(OD600=0.6)浸染8 min后,共培养3 d,然后转入含卡那霉素(Km)50 mg/L和羧苄青霉素(Cb)500 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Km 50 mg/L和Cb 500 mg/L的筛选生根培养基上进行筛选,在以上最佳遗传转化条件下,初步筛选到54株转化体,经PCR和RT-PCR检测获得25株转化烟草植株。【结论】经卡那霉素筛选、PCR、RT-PCR检测后,初步证明芪合酶基因已被整合到烟草基因组中,并可以正常转录。 相似文献
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利用建立的遗传转化体系,以携带Npt II筛选标记基因和胰蛋白酶抑制剂基因的LBA4404/pRok2(农杆菌/质粒)对山农995604小麦愈伤组织进行遗传转化,获得了三株含有胰蛋白酶抑制剂基因的转基因小麦。通过PCR扩增和Southern杂交检测,证明了外源基因已整合到了三株转基因小麦基因组中。 相似文献
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利用农杆菌转化花椰菜组织的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
杨业华 《华中农业大学学报》1988,(1)
供试的四个花椰菜品系对农杆菌T_(37)反应极为敏感,但各品系反应程度有所不同,肿瘤发生率变动于64%-82%之间。利用含有二元载体的农杆菌LBA_(4404)与无菌幼苗的下胚轴切段共培,获得卡拉霉素抗性植株。DNA分子杂交证明,二元载体上的T—DNA确实整合到植物染色体上,其npt嵌合体基因使转化体具有卡拉霉素抗性。由胭脂碱Ti质粒pTiT_(37)诱导的丛生芽,通过组织培养较易分化出不定根,但这些芽状结构很难发育成正常植株。 相似文献
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用根癌农杆菌转化获得胡萝卜转化细胞 总被引:1,自引:0,他引:1
将悬浮培养的胡萝卜(Daucus carota Var.Sativa DC.)单细胞与野生的胭脂碱型和章鱼碱型根癌农杆菌共同培养,在含羧(艹卡)青霉素的无激素MS培养基上筛选,获得生长旺盛的转化细胞,转化频率为10~(-2)。经基因产物——冠瘿碱检测,这些细胞均有冠瘿碱合成酶活性。 相似文献
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玉米几丁质酶基因导入甘蓝型油菜的研究 总被引:12,自引:0,他引:12
以甘蓝型油菜(Brassica napus L.)下胚轴为转化材料,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导将玉米几丁质酶基因(Maize Chitinase gene)导入双低油菜品种D2中,获得了抗卡那霉素(Kanamycin Kan)的再生植株,并对影响遗传转化的一些因素进行了研究。结果表明:适当的预培养对油菜下胚轴的遗传转化是必要的;油菜下胚轴遗传转化过程中的过敏反应可通过一些措施缓解;延迟筛选可提高油菜下胚轴的转化率。对抗性植株进行PCR检测表明:部分抗性植株在多次重复检测中的均显示较强的阳性反应,初步证明外源基因已整合到油菜基因组中。 相似文献
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向日葵遗传转化影响因素研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以向日葵茎尖为外植体,通过农杆菌介导转化,将草酸氧化酶基因(OXO)导入向日葵,对影响转化频率的因素:卡那霉素浓度,头孢霉素浓度,农杆菌感染时间和浓度等进行了探讨。当卡那霉素浓度为50 mg/L,头孢霉素浓度为500 mg/L,农杆菌菌液浓度OD600=0.3~0.4,感染时间为9min~10 min时,抗性芽比率可达7.4%。对抗性苗进行PCR检测,初步证明草酸氧化酶基因(OXO)已整合到向日葵的基因组中。 相似文献
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把pMTSA,pHBV3.0,pSMGHI和pMDV38kdpp4种重组质粒,以单个或二者混合后经微注射导入家畜的受精卵,随后移入同种寄母,获得转基因家畜,兔导入上述外源基因的卵,移植后妊娠率59.70%(40/67),发育成个体率17.74%(129/727),整合率59.38%(57/96),在整合兔中有32.14%(9/28)表达;山羊,导入pSMGHI基因卵,移植后妊娠率50%(7/14)发育成个体率12.76%(12/94),整合率33.33%(4/12);牛,获一整合的流产胎儿。当代转基因兔的后代也检出整合的外源基因,并有部分表达,证明导入的外源基因是可以遗传的。研究表明,这一转基因系统具有相当的稳定性,并可应用家畜代替常规的生物反应器,生产具较高经济价值的蛋白质,为畜牧生产开辟了一条新途径。 相似文献
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