离子注入诱变选育高产共轭亚油酸植物乳杆菌及RAPD分析

以青贮玉米中选育获得的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ANCLA01作为出发菌株,采用单粒子精确定位注入技术对其进行离子注入,以筛选高产共轭亚油酸(CLA)的菌株;用30条随机引物对乳杆菌出发株和突变株的基因组DNA进行随机多态性技术(RAPD)分析,从分子水平考察出发菌株与突变菌株之间的差异.出发菌株AN-CLA01经离子注入,筛选获得正向突变菌株ANCLA02,结果显示,氮离子的注入使植物乳酸杆菌的CLA产量从33.44 μg/mL提高到66.67 μg/mL,且变异菌株经传5代培养后产CLA稳定.RAPD结果显示,有4条引物可以扩增出条带,有2条引物具有多态性,从而为利用单粒子注入技术选育高产CLA的植物乳杆菌提供初步的参考依据.     

高产共轭亚油酸乳酸菌的筛选及培养条件的确定

共轭亚油酸简称CLA,它作为人类身体健康不可或缺的一部分而备受关注。现以7种乳酸菌为研究对象,采用紫外检测法测定发酵液中共轭亚油酸产量。对共轭亚油酸高产菌株进行筛选,实验发现德式乳杆菌的产量最高,产量达到了0.055 mg·m L-1。同时对最佳培养条件进行了全面研究,确定了菌株的最优工艺条件为培养温度36℃、p H 7、培养时间42 h。     

响应面法优化鼠李糖乳杆菌产共轭亚油酸的转化条件

以鼠李糖乳杆菌UV3-4为出发菌株,进行鼠李糖乳杆菌转化亚油酸生产共轭亚油酸转化条件的优化研究。通过单因素试验考察发酵温度、发酵时间、发酵pH和底物亚油酸(LA)添加量对CLA产量的影响,采用响应面法建立CLA产量与各影响因子之间的二次回归方程模型,获得最佳转化条件:发酵温度38℃,发酵时间23.4 h,pH 6.5,底物LA添加量为0.76 mg/m L,此条件下CLA的产量为37.28μg/m L。     

产细菌素乳酸菌的筛选及细菌素相关基因的分析

试验利用溶钙圈法及牛津杯双层平板法,从国内外优良发酵肉品中分离筛选产细菌素的乳酸菌,通过形态学、生理生化学鉴定,16S rDNA及种间特异性基因PCR扩增将菌株鉴定到种,并对其细菌素相关基因进行分析,初步确定细菌素种类.结果表明:在排除有机酸、过氧化氢等干扰因素后,从分离纯化到的92株乳酸菌中筛选到一株对指示菌仍有明显抑制作用的菌株L-ZS9,该菌株所产抑菌物质对蛋白酶(酸性蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶和中性蛋白酶)敏感,而α-淀粉酶对其活性基本无影响,因而确定L-ZS9为细菌素产生菌.经鉴定L-ZS9为类植物乳杆菌,进一步对菌株细菌素相关基因进行PCR扩增表明,L-ZS9含有Ⅱb类细菌素Plantaricin EF,Plantaricin JK,Ⅱc类细菌素Plantaricin A及Plantaricin N基因编码序列,此外plnE、plnF、plnJ和plnK的序列分析结果显示,plnF和plnK的成熟肽序列与Lactobacillus plantarum C11 (X94434)相应的细菌素成熟肽序列完全相同,plnE和plnJ的成熟肽序列仅出现一处氨基酸突变,因而确定类植物乳杆菌L-ZS9为天然的多种细菌素产生菌.     

共轭亚油酸生成条件试验研究

用嗜酸乳杆菌在MRS培养基中转化亚油酸(LA)生成共轭亚油酸(CLA)。结果表明:嗜酸乳杆菌在MRS培养基中(pH值4.0),38℃下,添加0.025%(V/V)LA诱导亚油酸异构酶产生,接种1.5%(V/V)、LA浓度1.8%(V/V)的条件下,CLA的总产量较大。     

产共轭亚油酸嗜酸乳杆菌菌株的诱变育种

本研究采用的嗜酸乳杆菌HS111和嗜酸乳杆菌HS112经紫外诱变、亚硝基胍紫外复合诱变处理后,嗜酸乳杆菌HS111共轭亚油酸产量提高了19μg/ml,而嗜酸乳杆菌HS112较原来出发菌株共轭亚油酸产量提高了27.7μg/ml,两菌株均具有良好的应用前景。     

乳酸菌固态发酵生产CLA功能性豆粕的研究

采用植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）固态发酵法生产功能性发酵豆粕,利用其催化葵花籽油中的亚油酸转化为共轭亚油酸（CLA）,通过单因素实验,分析了发酵过程中温度,时间,pH,接种量和葵花籽油添加量对生产共轭亚油酸的影响。实验结果表明,在37℃下,发酵时间96h,发酵pH6.0,接种量6%,葵花籽油添加量2%的条件下,CLA的总产量较大。     

共轭亚油酸高产菌株的筛选及培养基的优化

[目的]从自然发酵的酸菜汁中筛选共轭亚油酸高产菌株以及优化该菌株的培养基。[方法]以3种自然发酵的泡菜为研究对象,通过溴甲酚紫平板筛选产酸细菌,革兰氏染色法初步鉴定,紫外吸收光谱法检测发酵液中共轭亚油酸含量等方法,从酸菜汁中筛选到一株共轭亚油酸高产菌株QL2,对其培养基成分碳源、氮源和无机盐离子及底物亚油酸的添加量进行优化。[结果]菌株QL2共轭亚油酸产量达23.263μg/ml,亚油酸转化率为3.88%。优化后的培养基组成为：乳糖20 g/L,酵母膏30 g/L,CH3COONa2 g/L,MgSO4.7H2O0.8 g/L,K2HPO4.3H2O3 g/L。优化培养基组成成分后,底物亚油酸添加量为0.40%（V/V）时,共轭亚油酸产量达288.740μg/ml,转化率高达7.21%。[结论]研究为产共轭亚油酸菌株的筛选及培养基的优化提供了参考。     

接种产CLA乳酸菌对青贮中CLA含量的影响

试验研究了产CLA乳酸菌接种量、葵花籽油添加量对甘薯、马铃薯、胡萝卜以及白萝卜等4种青贮中CLA含量的影响.结果表明,在不添加油脂条件下,接种乳酸菌后4种青贮中CLA含量均明显增加(P<0.05或P<0.01);随着乳酸菌接种量的增加和油脂添加量的加大,青贮中CLA含量呈现先增加后减少的趋势,对于不同青贮原料来说,接种乳酸菌后甘薯和白萝卜青贮中CLA含量明显高于胡萝卜和马铃薯(P<0.05);当葵花籽油添加量达到9～12 mg·g-1青贮时,青贮中CLA含量最高;当乳酸菌接种量为6×107 g-1青贮时,青贮中CLA含量最高,一旦乳酸菌接种量超过8×107 g-1青贮时,青贮中CLA含量开始明显下降(P<0.05).     

固定化乳酸菌3-9转化菜油脚生成共轭亚油酸研究

对从泡菜中分离到的乳酸菌3-9菌株采用固定化技术转化菜油脚料生成共轭亚油酸进行研究。首先对乳酸菌3-9细胞的固定吸附材料及固定化条件进行探讨,确定最适固定化材料为直径1~3 mm的瓷颗粒,细胞吸附固定化时间是1 h,细胞固定率达到75%。将该固定化细胞接入经爪哇毛霉脂肪酶水解后的菜油脚介质转化液中,转化生成的CLA量为(187.91±3.71)μg·m L-1,是未固定化细胞CLA产量的1.16倍。随后对固定化乳酸菌3-9转化菜油脚生成共轭亚油酸条件进行研究。当以p H8.0的磷酸缓冲液为转化介质基础液,转化时间为17 h、转化温度为40℃、固定化的细胞浓度为0.5 g·m L-1及摇床转速为120 r·min-1时,CLA的生成量可达(261.65±3.21)μg·m L-1,转化率为17.64%。该固定化细胞能连续转化利用16个批次,前10个批次CLA产量均保持在200μg·m L-1以上,其最高产量可达(283.81±6.02)μg·m L-1,转化率为19.14%。最后对经1、8和16批次转化后的固定化细胞瓷颗粒进行电镜扫描观察,图片显示经8批次的转化利用后,仍可见大量形态完整的乳酸菌细胞吸咐固定于瓷颗粒中。     

亚油酸异构酶作用玉米油脂生产共轭亚油酸条件研究

玉米油脂中含有丰富的不饱和脂肪酸,其中主要为亚油酸和油酸。亚油酸可以经过亚油酸异构酶作用转变为功能性物质-共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid,CLA)。共轭亚油酸具有抗癌、减肥、调节免疫等许多生理功能。文章主要研究亚油酸异构酶作用玉米油脂生产共轭亚油酸的条件,提高共轭亚油酸的生成量。通过试验确定其最适条件为:玉米油乳浊液浓度2%,40℃条件下反应,酶与其作用比例1:5,反应时间150min。CLA产量较高,达25.7μg·mL-1。     

青贮用乳酸菌的筛选及其生物学特性研究

【目的】筛选生长繁殖快、产酸能力强且耐酸的乳酸菌,以获得制备果渣青贮发酵剂的优良菌株。【方法】通过葡萄糖发酵产酸产气特征、产酸速率和生长曲线进行供试乳酸菌的筛选,对筛选出的优良菌株进行形态学、生理生化和分子生物学鉴定,并进一步研究其生长温度范围、酸碱耐受性、耐盐性,最后对菌株发酵液进行酸度滴定和有机酸组分分析。【结果】经筛选共获得R7、R3、Rg和Re 4株优良乳酸菌。经形态学、生理生化和16SrDNA序列分析,确定R7为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),R3为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus),Rg为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),Re为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。4株菌均可在15~50℃生长。菌株R7生长最快,降酸能力最强,发酵液乳酸含量最高,占总酸含量的95.40%,在pH值3.0条件下可以旺盛繁殖,同时可耐受质量浓度0.08g/mL NaCl。Re、R3生长及产酸仅次于R7,酸碱耐受性较强。Rg在50℃生长良好,可耐受高温。【结论】菌株R7、Re、R3、Rg具有生长快、产酸能力强、耐酸、产乳酸含量高等优良生物学特性,可应用于果渣青贮饲料添加剂的制备。     

共轭亚油酸的制备与分析方法

共轭亚油酸(CLA)是具有共轭双键的十八碳二烯酸的一组构象和位置异构体的总称。文章概述了CLA不同制备方法及分析检测方法。     

共轭亚油酸(CLA)的功能及含量影响因素的研究概况

共轭亚油酸(CLA)是具有共轭双键的十八碳二烯酸的一组构象和位置异构体的总称。文章概述了CLA在抑制肿瘤、抗动脉粥样硬化、降低脂肪沉积、增强机体免疫等方面的功能及各种因素对CLA含量的影响。     

一株青贮用高性能乳酸菌的筛选

为筛选优良青贮饲料添加剂,从德国南部山区苜蓿制备菌粉中分离得到5株乳酸菌。通过对菌株形态学、生理生化和16S r RNA相结合方法进行鉴定,对5株外源乳酸菌和常规优势菌株7的生长曲线测定和产酸性试验,得到3株高性能乳酸菌,并对这3株乳酸菌的生物学特性进一步研究。结果显示,R1、R5为植物乳杆菌,R2、R3和R4为屎肠球菌;菌株R 1、7和R 5生长迅速、产酸能力较好;T50℃时,菌株R1比R5、7耐温能力强,pH2.5时,菌株R1的适应能力比菌株7、R5强,菌株R1比菌株R5、7抑菌能力强,外源品种R1可作为制备乳酸菌青贮饲料添加剂新的优良菌株。     

产亚硝酸盐还原酶低温乳酸菌的筛选鉴定及发酵特性

为有效控制酸菜中的亚硝酸盐含量,降低食品安全风险,加快我国酸菜产业的现代化生产,本研究利用溴甲酚绿指示剂法对从黑龙江省哈尔滨地区采集的8份自然发酵的酸菜样品进行筛菌,共分离低温乳酸菌17株。经亚硝酸盐降解能力的评估,获得5株具有较强降解亚硝酸能力的低温乳酸菌,通过测定菌株亚硝酸盐酶活力获得了1株高产亚硝酸还原酶的低温乳酸菌R11,该菌在含125 mg/L NaNO2的MRS培养基中诱导48h,亚硝酸盐还原酶活力为68.4U/mL。菌株R11经形态学、生理生化特征、16SrDNA序列和构建系统发育树等方法分析,鉴定该菌株为冷明串珠菌(Leuconostoc gelidum),命名为Leuconostoc gelidum R11。发酵特性的初步研究结果表明,该菌具有良好的低温生长性能和产酸能力。因此,L.gelidum R11是1株产亚硝酸盐还原酶、发酵性能优良的具有巨大应用潜力的酸菜低温发酵菌株。