溴氰菊酯酶联免疫吸附分析方法研究

建立了定量测定溴氰菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。合成了半抗原1-羧基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Med)和N-2-(羧基丙基)氨基甲酰基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Di)。分别采用碳二亚胺法和混合酸酐法将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫原Di-BSA和包被原Di-OVA、Med-OVA。将制得的溴氰菊酯免疫原免疫动物获得多克隆抗体,经间接非竞争ELISA法测得其效价为2.5×105。通过对甲醇含量、离子强度、pH值等影响因素进行异源分析条件的优化,确立了溴氰菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件(30%甲醇、氯化钠0.4 mol/L、pH 7.5),并建立了标准竞争曲线。该方法的IC50值为0.55±0.05 mg/L,检测限(IC10)为3.76±0.35 μg/L,对大多数拟除虫菊酯无交叉反应。分别在自来水、河水和土壤样品中添加0.05 ~5.0 mg/L(或mg/kg)的溴氰菊酯,回收率分别为89.7% ~106.8%、82.4% ~101.7%、75.6% ~97.8%。     

甲萘威酶联免疫吸附分析技术研究

合成了两种不同结构的甲萘威半抗原并与载体蛋白质共价偶联制备人工抗原。以人工抗原免疫动物获得对甲萘威具特异性的高效价抗体 ,建立并优化了痕量甲萘威的竞争性酶联免疫吸附测定法。该法测定甲萘威的线性浓度范围为 10 1～ 10 -4 μg/ml,检测限低于 0 .0 1ng/ml。其他结构类似的氨基甲酸酯类杀虫剂对甲萘威的分析无干扰。     

农产品中基质对酶联免疫分析法检测三唑磷残留的干扰及消除研究

基质干扰是免疫法检测食品中农药残留时经常碰到的问题。以胡萝卜、菠菜、香蕉、梨、稻米和花生等为试材,研究了不同农产品基质对酶联免疫分析法(ELISA)检测三唑磷的影响。结果表明:不同农产品基质对ELISA检测的干扰机制不同,香蕉主要是抑制了辣根过氧化物酶的活性,菠菜、梨和稻米则主要是干扰了抗原和抗体的结合反应,胡萝卜和花生不仅抑制酶的活性,同时还干扰了抗原和抗体的结合反应。将这些农产品的磷酸盐缓冲液(PBS)(含2.5%甲醇)提取液用含有质量分数为0.3%的脱脂奶粉、0.1%的乙二胺四乙酸(EDTA)和含2.5%甲醇的PBS稀释10倍,在12000r/min下离心10min,即可消除其对ELISA检测的干扰。研究结果表明, ELISA法是可用于农产品中三唑磷残留检测的一种简单、快速、有效的方法。     

酶联免疫吸附测定法测定四种苏云金杆菌菌株的晶体蛋白含量

用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定苏云金杆菌81—6的晶体蛋白含量,结果表明:严格控制实验条件,ELISA法测定具有良好的重复性。用ELISA法测定苏云金杆菌四个菌株的纯晶体蛋白和相应的孢晶混合物,通过回归方程可求出各个孢晶混合物中的晶体蛋白含量。HD—1和7216的ELISA法测定结果与用小菜蛾进行生测的LD_(50)值比较,证明ELISA法测定样品晶体蛋白含量的高低基本反映该样品毒力大小。     

氯氟氰菊酯及其代谢物的人工抗原合成与多克隆抗体的制备

于氟氰菊酯分子的酸部分连接4-氨基丁酸间隔臂(HCA1)、醇部分连接丁二酸酐间隔臂(HCB2),分别合成了两种不同的半抗原,通过碳二亚胺法将HCA1和HCB2分别与牛血清蛋白(BSA)偶联制备了人工抗原HCA1-BSA和HCB2-BSA,通过混合酸酐法将HCA1、HCAS 和HCB2分别与卵清蛋白(OVA)偶联制备包被抗原,两种人工抗原通过免疫新西兰大白兔制备相应的多克隆抗体。结果表明,用HCA1-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯和氯氟氰菊酸有免疫反应性(IC50值分别为33.12 和0.95 mg/L),用HCB2-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯几乎没有免疫反应性。     

酶联免疫吸附试验方法的比较

应用白背飞虱单克隆抗体比较了３种酶联免疫吸附试验方法。结果表明：间接酶联免疫吸附试验的灵敏度高于直接酶联免疫吸附试验,分别为０．０３１２５μｇ蛋白／ｍｌ（相当于１／２５６头成虫）和０．０６２５μｇ蛋白／ｍｌ（相当于１／１２８头成虫）,而双抗夹心酶联免疫吸附试验无法使用。样品中非目标抗原（捕食者）浓度对检测结果有显著的影响,且对直接酶联免疫吸附试验的影响更大,检测时必须对样品做适当的稀释     

梨中AVERMECTIN B1残留的酶联免疫吸附测定

本文建立了检测梨中Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的间接竞争酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）。以结合物４″－Ｏ－（单）琥珀酰Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１－ＢＳＡ免疫家兔，制备特异性针对Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的多克隆抗体。梨样本经甲醇提取后用ＥＬＩＳＡ检测。在６．０￣６０ｍｇ／ｋｇ添加浓度范围内，Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的回收率为８６％￣１０５％，变异系数（ＣＶ）为４％￣８％。样本检测限为０．１ｍｇ／     

快速检测大豆疫莓菌的酶联免疫吸附技术研究

利用已经制备的大豆疫霉菌的抗血清，对大豆疫霉菌的纯培养和大豆病组织进行检测。结果表明，间接法（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＳＩＡ）能较好地检测纯培养的大豆疫霉菌，但在检测病组织时，夹心ＥＩＳＡ的特异性较强，能够可靠地检测到大豆病组织内的病原菌。     

氯噻啉酶联免疫分析方法研究

建立了基于多克隆抗体的氯噻啉间接竞争酶联免疫分析(ic-ELISA)方法。设计合成了氯噻啉半抗原,将其分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫原和包被原。用免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,抗体效价为2.56×106。通过对有机溶剂含量、离子强度和pH等影响因素的优化,确定了氯噻啉ic-ELISA的最佳检测条件(含体积分数10%甲醇的磷酸盐缓冲液、Na+浓度为0.14 mol/L、 pH 7.4),并建立了氯噻啉标准竞争曲线,该方法的抑制中浓度(IC50)为0.18 mg/L,最低检测限(IC10)为0.001 8 mg/L。所得多克隆抗体除与吡虫啉有较大的交叉反应外,与其他结构相似的化合物无明显交叉反应。在水、土壤和甘蓝中分别添加0.05~1 mg/kg的氯噻啉标准溶液,平均回收率为91.42% ~113.82%,相对标准偏差(RSD)为0.72% ~8.68%,符合农药残留检测要求。该ELISA方法可用于环境及农产品中氯噻啉残留检测。     

三唑磷在甘蓝中残留动态试验研究

为了了解三唑磷在甘蓝上使用的安全性,对三唑磷在甘蓝上施用后的残留消解动态,进行了试验研究。结果表明,以667mg／L施药后,三唑磷在土壤中的动态消解方程为C=0.0673e-0．1122t(r^2=0．9831),半衰期为6．2d;三唑磷在甘蓝植株中的动态消解方程为C=8．7411e-0．2182t(r^2=0．9453),半衰期为3．3d。     

甲胺磷等3种农药的水解研究

本文测定了甲胺磷、三唑磷和噻嗪酮等3种农药在水体中的水解速率及水解半衰期。试验结果表明:在25℃的中性水溶液中,3种农药的水解半衰期(t1/2)甲胺磷<三唑磷<噻嗪酮,水温升高和碱性增强均能加速3种农药的水解过程。甲胺磷在25℃的酸性条件下不易水解,应加强对地下水的污染监测。     

三唑磷在太原地区节瓜中残留动态试验研究

为了了解三唑磷在节瓜上使用的安全性,于2003—2004年在太原地区对三唑磷在节瓜上施用后的残留消解动态进行了试验研究。结果表明,以150mL/667m2施药后,三唑磷在节瓜中半衰期为2.9d,在土壤中的半衰期为5.5d。     

三唑磷农药对三种非靶生物的毒性和安全评价研究

本文叙述测定了三唑磷农药３种有代表性非靶生物鲤鱼,家蚕,蜜蜂的急性毒性,并进行了安全评价,试验结果表明,三唑磷对鲤鱼ＬＣ５００．３２ｍｇ／Ｌ（４８ｈ）对家蚕ＬＣ５０（至３龄起）１．０３ｍｇ／ｋｇ桑叶,对蜜蜂触杀ＬＤ５００．０５８μｇ／蜂（２４ｈ）胃毒ＬＣ５０１．９０ｍｇ／Ｌ（２４ｈ）该农药对三种非靶生物均为高毒,本项工作为三唑磷农药的登记和合理表提供了科学依据。     

三唑磷在水中残留分析方法的研究

本文以乙酸乙酯加15%NaCl溶液为萃取剂,浓缩后定容,使用气相色谱具FPD检测器,对水样中三唑磷进行残留分析。结果表明,添加浓度在0.001～0.1mg/L范围时,添加回收率102.84%～106.68%,变异系数为0.25%～2.56%,方法的最小检出量为3.5×10-2g,最低检测浓度为0.0001mg/kg。     

酶联免疫吸附反应(ELISA)在烟草病毒病检测中的应用

本文综述了酶联免疫吸附分析法(ELISA)在烟草病毒检测中的应用。对EIISA的基本类型,改进和提高灵敏度的方法进行了分析,并阐述了该技术的某些发展趋势。     

氟铃脲与三唑磷混用防治稻纵卷叶螟效果及应用技术研究

田间试验结果表明,氟铃脲与三唑磷混用防治稻纵卷叶螟效果显著,同一配方对不同龄期纵卷叶螟防效比较进行了田间试验研究,结果表明,每666.7m2用5%氟铃脲乳油20mL 20%三唑磷乳油60mL对稻纵卷叶螟4龄以下幼虫的保叶和治虫效果均在95%以上,优于5%氟铃脲乳油和20%三唑磷乳油单用的效果,两者混用具有较好的推广应用前景。     

25%毒·唑磷乳油的液相色谱分析

本文叙述了采用反相高效液相色谱法即以乙腈+水为流动相,C18柱和紫外检测器同柱分离测定25%毒·唑乳油中的毒死蜱和三唑磷。结果表明,毒死蜱和三唑磷的标准偏差分别为0.0307、0.0629;变异系数分别为0.3735%、0.3623%;平均回收率分别为99.58%、99.77%;线性相关系数分别为0.9996、0.9997。