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青杨双价抗虫基因转化系统研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用农杆菌介导法,对青杨进行含部分改造的Bt CryAc基因(Bt基因)和慈姑蛋白酶抑制剂(API)基因A的双价抗虫基因转化,确定了适于青杨的遗传转化系统。经含Km40mg/L的生根培养基的筛选,获得了青杨转基因植株。 相似文献
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【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。 相似文献
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不同毒株马立克氏病病毒囊膜糖蛋白gI基因的克隆与序列分析 总被引:2,自引:1,他引:2
根据马立克氏病病毒(MDV)国际标准株GA的基因序列,设计全盛一对引物,通过PCR技术,分别以弱毒株814和广西分离强毒株G2株基因组为模板,扩增获得预期大小的PCR产物,将PCR产物和pUC18分别经BamH I株和Sma I酶切后,连接、转化TG1,筛选获得了814-gI和G2-gI的基因克隆,将所得克隆进行测序,并将它们与已发表的MDV其他毒株gI的序列进行比较分析,获得了它们的同源性,绘制了系统发生树。 相似文献
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从传统发酵酸肉中分离出一株乳酸杆菌(XC10001),利用API鉴定系统、16S rDNA同源性分析以及recA基因多重PCR特异性扩增3个方法对该菌株进行鉴定,API鉴定结果和16S rDNA同源性分析结果都表明该菌株同植物乳杆菌的同源性最高;多重PCR扩增后发现一条约300 bp的recA基因特异扩增片段,对该片段测序后发现同植物乳杆菌ATCC14917序列完全相同,因此将该菌确定为植物乳杆菌.菌株XC10001的16S rDNA序列的国际基因序列注册号为HM446157. 相似文献
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酵母海藻糖合成酶基因植物表达载体的构建与转化 总被引:2,自引:0,他引:2
以从原核表达载体中酶切得到的tps1基因为模板,设计适当的引物,利用PCR技术,克隆出大约1.5kb的片段.PCR产物经回收后,与Pc^CAMBIA1303连接并转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子经PCR鉴定,表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体.用基因抢转化小麦幼胚,经组织培养得到了含有海藻糖合成酶基因的小麦植株. 相似文献
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对采用叶盘法以质粒PBLGC为介导转化烟草的3个品种。经Kan抗性筛选获得的119株转化的烟草再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1,3-葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测,分别获得91、72、47株阳性植株。其中,同时具有几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因的植株有36株。对部分转化植株进行PCR—Southern杂交实验的结果表明,外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关。又对4株转基因植株后代(T1)进行了PCR、PCR—Southern杂交,结果发现,几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因已经稳定地遗传给后代,但二者的遗传传递率不同,β—1,3-葡聚糖酶基因似乎比几丁质酶基因更易于传递。另外,对转化植株T0代几丁质酶活力检测结果表明,转基因植株中几丁质酶活力显著增强,含有几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因的植株内切几丁质酶活力最强。 相似文献
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根据烟草花叶病毒蚕豆株系(TMV-B)的已知序列合成引物,经PCR扩增获得TMV-B的移动蛋白(MP)基因。该基因测序验证后,分别以正、反向克隆到植物表达载体pBI121中,并置于CaMV35S启动子控制之下,通过三亲交配及叶盘转化,将MP基因导入烟草。经卡那霉素抗性筛选,PCR扩增,Southern点杂交,Northern点杂交及Westernblot检测,获得了正义表达MP基因及反义表达MP基因的转基因烟草,分别命名为pTMP(+)烟草和pTMP(-)烟草。 相似文献
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