锰中毒对鸡肝脏细胞色素P450酶系及CYP2H1 mRNA转录水平的影响

本研究旨在探讨锰对公鸡肝脏细胞色素P450酶系的影响。50日龄海兰褐公鸡400只,随机分为4组,分别在饲料中添加0、600、900、1 800 mg.kg-1MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,于30、60、90 d采取肝脏检测肝微粒体细胞色素P450酶系活性以及CYP2H1基因转录水平的变化。结果显示,细胞色素P450、b5含量,氨基吡啉-N-脱甲基酶(AND)和苯胺-4-羟化酶(AH)活性在各个时间点随染锰剂量的增加,基本呈降低趋势,且高剂量组均极显著(P0.01)低于正常组,低、中剂量组有高于正常组的情况。NADPH-细胞色素C还原酶(CR)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)的活性的变化规律不明显,30和60 d NADPH-细胞色素C还原酶活性呈降低趋势,而90 d时呈升高趋势,且高剂量组极显著(P0.01)高于正常组。红霉素-N-脱甲基酶在30 d时呈升高趋势,60和90 d时呈波动性降低变化,且高剂量组均极显著(P0.01)低于正常组。在各个时间点,CYP2H1 mRNA的转录水平除30 d低、高剂量组,60 d中剂量组,90 d低剂量组高于正常组外,其他组均低于正常组。结果提示,锰中毒可影响鸡肝脏细胞色素P450酶系以及CYP2H1 mRNA的转录水平。     

镉对胎鼠大脑皮质神经细胞凋亡与一氧化氮合酶基因mRNA转录的影响

为研究镉对胎鼠大脑皮质神经细胞凋亡与一氧化氮合酶基因mRNA转录的影响,用不同浓度醋酸镉(0、5、10、20 μmol/L)染毒胎鼠大脑皮质神经细胞12 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察镉对神经细胞凋亡的形态学影响,实时荧光定量PCR检测神经型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的转录水平.结果显示,与对照组相比,各染毒组细胞凋亡率呈现升高趋势;染镉组细胞核皱缩,染色质致密浓染,甚至核碎裂;5、10 μmol/L组nNOS mRNA转录水平显著升高(P＜0.05或P＜0.01),20 μmol/L组nNOS转录水平降低至对照组水平;20 μmol/L组iNOSmRNA转录水平极显著升高(P＜0.01).结果表明,镉可诱导大脑皮质神经细胞凋亡,并可调节nNOS和iNOS mRNA的转录.     

圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL基因mRNA表达的影响

为探讨圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织的毒性作用,采用TUNEL法和RT-PCR对染毒后脾脏细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL等凋亡相关基因mRNA表达的影响进行研究。结果表明,随着青霉酸染毒剂量的增加,脾脏组织中细胞凋亡数量逐渐增多。染青霉酸低剂量组脾脏组织中Bcl-2、Fas和FasL的表达增加,Bax表达下降,高剂量组和中剂量组中Bax、Fas和FasL表达增加,Bcl-2表达下降,说明青霉酸可能通过促使Bax、Fas/FasL表达增加和Bcl-2表达降低来诱导小鼠脾脏细胞的凋亡。     

乐果诱导大鼠肝胞凋亡的分析

为研究乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响,将24只SD大鼠分成对照组和3个染毒组,分别按体质量以0、1、6和30 mg·kg-1的剂量灌服乐果,连续灌服30 d后,观察肝脏组织学和超微结构变化.同时,通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(染毒终浓度分别为0、3、10、30、100和300 μmol·L-1),染毒12、24 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹明123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(△ψm)变化.结果表明,组织学和超微结构检查显示肝细胞脂肪变性、凋亡等.肝细胞染毒12和24 h后,细胞凋亡率明显升高,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),且呈时间-剂量效应;3μmol·L-1组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P<0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3～100μmol·L-1范围内随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300 μmol·L-1组略有下降,除3μmol·L-1组外,与对照组相比均差异极显著(P<0.01);△ψm除24 h高剂量染毒组(300 μmol·L-1)外均出现持续下降,30～300 μmol·L-1组均小于对照组(P<0.01).本研究表明低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和△ψm可能参与了这一过程.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导CTLL-2细胞凋亡的信号途径研究

为探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对动物免疫功能的影响及其机理,以细胞毒性T淋巴细胞株CTLL-2为材料,用不同浓度的DON(0、0.5、1、2μg/m L)处理CTLL-2细胞48h,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫印记法检测细胞凋亡相关通路蛋白CleavedCaspase 9、Cleaved-Caspase 3、Fas L、Fas、Cleaved-Caspase8等表达情况;并用流式细胞术检测了DON(1μg/m L)与Fas L中和抗体(10μg/m L)共处理后细胞的凋亡率。结果表明,随着DON浓度的升高,CTLL-2细胞的凋亡率呈上升趋势,染毒组均较对照组有极显著差异(P0.01);Bax/Bcl-2的比值升高,呈剂量-效应关系;DON促进细胞色素c(Cyt-c)从线粒体中释放到胞浆中,能够上调Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3的表达,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P0.05或P0.01);Fas L、Fas、Cleaved-Caspase 8蛋白表达量随着DON浓度的升高逐渐增加,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P0.05或P0.01);随着DON浓度的升高,p38 MAPK、JNK、Erk的磷酸化水平也升高,呈剂量-效应关系;与DON处理组相比,Fas L中和抗体与DON共同处理组细胞凋亡率明显下降(P0.01)。结果表明,DON可以诱导CTLL-2细胞发生凋亡,激活CTLL-2细胞线粒体通路、MAPKs通路,DON通过死亡受体途径诱导CTLL-2细胞凋亡,影响动物的免疫机能。     

T-2毒素对大鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

将未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的T-2毒素染毒细胞24 h.染毒结束后,采用MTT法检测细胞相对活力,荧光染料Hoechst 33258检测卵巢颗粒细胞的凋亡变化,RT-PCR检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax和P53 mRNA的表达.结果显示,随着T-2毒素染毒剂量的增加,颗粒细胞的细胞活力逐渐下降;而细胞凋亡率、Bcb2、Bax、P53 mRNA表达水平、Bax mRNA/Bcl-2 mRNA比值则逐渐上升;除1 nmol/L剂量组外,其余各剂量组与对照组比较差异显著(P＜0.05).结果表明,T-2毒素可显著抑制大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导颗粒细胞凋亡,并呈浓度依赖关系.     

乐果引起大鼠肝细胞凋亡的机理

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(0、3、10、30、100、300μmol/L),染毒122、4 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,探讨乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响。结果显示,肝细胞染毒12、24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3μmol/L组外,与对照组相比差异显著(P0.05或P0.01),且呈时间-剂量效应。3μmol/L组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3~100μmol/L随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300μmol/L组略有下降,除3μmol/L组外,与对照组相比均差异极显著(P0.01);Δψm除24 h 300μmol/L组外均出现持续下降。结果表明,低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和Δψm可能参与了这一过程。     

锰致鸡睾丸DNA-蛋白质交联的研究

目的:探讨锰致鸡睾丸DNA-蛋白质交联效应。方法:在饲料中添加500、800、1 700 mg/kg MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,分别在试验30 d、60 d、90 d剖杀鸡只取睾丸组织,进行DPC(DNA-蛋白质交联)的检测,并在90 d进行生精细胞的凋亡检测。结果:与对照组相比,各染毒组睾丸组织DPC系数显著增大,凋亡指数升高。结论:锰能使睾丸组织DPC系数增大,生精细胞凋亡指数升高,导致DNA损伤,进而引起细胞凋亡。     

二烯丙基二硫化物诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡及Fas/FasL信号通路调控作用

为探究二烯丙基二硫化物(DADS)对马立克氏病肿瘤细胞系(MDCC-MSB-1细胞)的增殖抑制作用及其信号通路的调控机制,以MDCC-MSB-1细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度DADS分别作用MDCC-MSB-1细胞24、48、72 h后对细胞增殖抑制的影响。用0、80、160、240μmol/L DADS预处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33342核酸染色法检测细胞形态变化;caspase-8活性试剂盒检测细胞中caspase-8蛋白酶活性;并用荧光定量PCR法检测Fas/FasL信号通路关键因子mRNA的转录水平。结果显示,40μmol/L～240μmol/L的DADS抑制MDCC-MSB-1细胞的增殖呈时间剂量依赖性;随着浓度的升高,细胞形态逐渐出现细胞核核膜消失,染色体降解为多个片段并且边缘化,形成凋亡小体;240μmol/L的DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞caspase-8蛋白酶活性及Fas、FADD、caspase-8、Bid和caspase-3 mRNA的转录水平极显著升高(P0.01)。结果表明,DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡,并活化其Fas/FasL死亡受体凋亡信号通路,可为鸡马立克氏病的治疗提供参考。     

镉对大鼠大脑皮质神经细胞Bcl-2，Bax和Caspase-3mRNA转录的影响

为研究镉对大鼠大脑皮质神经细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA转录水平的影响,选用不同浓度（0、5、10、20μmol／L）醋酸镉染毒大鼠大脑皮质神经细胞12h,用MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的转录水平,并计算Bcl-2／Bax的比值。结果表明,与对照组相比,各染毒组细胞存活率随染毒剂量增加而显著下降（P〈0．05或P〈0．01）;Bax和Caspase-3mRNA转录水平极显著升高（P〈0．01）,而Bcl-2mRNA转录水平显著降低（P〈0．05）,Bcl-2／Bax极显著降低（P〈0．01）。说明镉能抑制大鼠大脑皮质神经细胞的生长,并可调节凋亡相关基因Bcl2、Bax和Caspase-3mRNA的转录。     

GnRH免疫去势对公鸡生长发育的研究

用GnRH抗原对10日龄、17日龄公鸡人工免疫2次与对照组相比较,实验组各日龄鸡冠的体积小于对照组。其中90日龄实验组的鸡冠体积与对照组差异显著(F.>F0.05);从31日龄到120日龄实验组的鸡体重大于对照组,其中60日龄、90日龄鸡体重实验组与对照组差异显著(F.>F0.05)。结果表明:用GnRH免疫去势公鸡可以促进其生长发育。     

饲粮硒对种公鸡睾丸中硒含量和硒蛋白酶基因mRNA表达的影响

本试验旨在研究饲粮硒对海兰褐种公鸡睾丸中硒含量和硒蛋白酶基因mRNA表达的影响.选取224只48周龄海兰褐种公鸡,随机分为7个处理,每个处理4个重复,每个重复8只.将亚硒酸钠(SS)和酵母硒(SY)2种硒源分别以3个硒水平(0.2、0.5和0.8 mg/kg)添加到海兰褐种公鸡基础饲粮中,对照组饲喂基础饲粮,进行为期3...     

Exogenous Estradiol Benzoate Induces Spermatogenesis Disorder through Influencing Apoptosis and Oestrogen Receptor Signalling Pathway

As the exact role for exogenous oestrogen in spermatogenesis is not fully understood, the aim of this study was to investigate the effect of estradiol benzoate (EB) exposure to male mice on their spermatogenesis and fertility. Sixty male mice aged 4 weeks were randomly divided into three groups, including a control group and two treatment groups. The mice of the control group were injected with 250 μl paraffin oil only by every other day subcutaneous injection for 4 weeks. Meantime, the mice of the treatment groups were injected with EB at the concentration of 5 or 10 mg/kg, respectively. Results showed that EB slowed down the body weight gains and generated testicular atrophy with spermatogenesis disorder compared with that of the control mice, and consequently induced their infertility. Moreover, the number of TUNEL‐positive cells in the testis of EB‐treated mice was significantly increased with the EB concentration rise. In comparison with controls, the mRNA expression level of pro‐apoptosis factors (Fas, TNF, Cytochrome C, Apaf1, Chop, Caspase‐3, Caspase‐8, Caspase‐9 and Caspase‐12) and key genes in oestrogen receptor (ER) signalling pathway (ER α, ER β, Erk1/2, Hsp90 and DAX‐1) were upregulated in the testes of the treatment groups. Furthermore, Western blotting results proved the protein expression level of Fas, TNF, Cytochrome C, Chop, Caspase‐3, cleaved Caspase‐3, Caspase‐9, Erk1/2 and Hsp90 were upregulated, and the phosphorylation level of Erk1/2 was also increased. These results indicate that EB may impair spermatogenesis through influencing the apoptosis and ER signalling pathway.     

Effect of orally administered furazolidone on volume and sperm concentration of dwarf and non-dwarf cock semen

2 groups of 20 cocks each were selected at random from non-dwarf White Leghorn (28 weeks post-hatch) and dwarf Krishna-J (38 weeks post-hatch) genotypes. The treated groups comprised 10 White Leghorn and 10 Krishna-J cocks. The remaining birds served as controls. 8 weeks prior to furazolidone treatment, semen was collected from both control groups at regular 4-day intervals, for 4 weeks. Cocks of the treated groups of both genotypes were administered furazolidone (0.14 g/bird/day) for 7 consecutive days. Semen was collected from all cocks at regular 4-day intervals for 4 weeks. Semen from the cocks of the same group was pooled. The pooled ejaculate volume and sperm density did not differ significantly in the 2 genotypes. The semen output as well as sperm density increased along with progressive attainment of sexual maturity. Furazolidone treatment caused significant reduction in semen volume as well as sperm concentration in either genotype.     

归芪饮安全药理学试验研究

23日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡640羽随机均分为6个不同剂量用药组、1个疫苗对照和1个空白对照组,另取60羽设1个疫苗对照组和1个空白对照组,30羽/组,除空白对照组外均用新城疫Ⅳ系苗滴鼻、点眼免疫(3羽份/羽),37日龄二免。在免疫的同时,6个用药组分别饮水添加6种浓度的的归芪饮,0.5mL/羽,每天1次,连续3d;给药后每天观察各组鸡群精神、活动、采食、饮水和发病死亡情况;分别于免疫后第7、14、21、28、35和42天翼静脉采血,检测血清NDV-HI抗体效价;于首次免疫后第8周选取0.5g/mL、1g/mL、1.5g/mL、2g/mL4个剂量组(50羽/组),1个疫苗攻毒对照组(50羽/组),1个空白攻毒对照组(50羽/组),1个疫苗对照组(30羽/组)和1个空白对照组(30羽/组)进行攻毒保护试验。同时,进行了体外刺激外周血T淋巴细胞转化增殖试验。结果显示,各组给药后未见任何不良反应,各剂量组在各时间点的抗体效价多明显或显著高于疫苗对照组和空白对照组,1g/mL剂量组鸡只末重显著增加,1g/mL、1.5g/mL剂量组日增重显著高于对照组,料重比显著低于对照组,2g/mL剂量组料重比显著低于对照组;1.5g/mL组的攻毒保护率最高,其次为1g/mL剂量组;体外试验结果也显示,归芪饮在合适的剂量可以刺激外周血T淋巴细胞增殖。表明归芪饮临床应用安全,增强细胞免疫和体液免疫的效果确实,可以将1-2g/mL剂量作为临床试验应用剂量,1g/mL剂量最佳。     

日粮铬水平对热应激种公鸡免疫功能及蛋白质代谢的影响

选用72只35周龄罗曼褐种公鸡随机分成6组,每组12只,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别在基础日粮中添加酵母铬0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/kg,探讨日粮铬水平对热应激种公鸡免疫功能及蛋白质代谢的影响.结果显示:与对照组相比,试验Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组热应激种公鸡血清中牛血清白蛋白抗体滴度、免疫球蛋白含量、血清总蛋白、白蛋白含量显著提高,全血T淋巴细胞转化率增强.     

线粒体凋亡途径在锰致鸡支持-生精细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在锰致鸡支持-生精细胞凋亡中的作用。取对数生长期鸡支持-生精细胞,用含0、2、3、4mmol.L-1MnCl2的DMEM培养液,培养24h,采用吖啶橙-溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法检测鸡支持-生精细胞凋亡,流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm),Westernblot法检测胞浆内细胞色素C(Cytc)蛋白表达含量,分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9,3(Caspase-9,3)活性。用含MnCl2的DMEM培养液培养24h后,处理组细胞与对照组相比,鸡支持-生精细胞凋亡指数逐渐升高(P0.01);线粒体膜电位显著降低(P0.01);胞浆中Cytc蛋白表达量逐渐增加;Caspase-9,3活性逐渐升高(P0.01)。线粒体途径介导的凋亡是锰对鸡生殖毒性作用的主要机制之一。