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用蔗糖密度梯度离心法提纯鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)作包被抗原,建立了间接ELISA的最佳工作程序,其中抗原包被浓度为0.61μg/孔,被检血清为1:50.酶结合物1:1600;其灵敏度为琼脂凝胶沉淀试验(AGP)的238.5倍.在受检的529份鸡血清中,该法检出率(85.1%)显著高于AGP(46.0%).间接ELISA对S1133疫苗及AVAV—J株接种鸡抗体消长情况的观察结果表明,S1133疫苗常量接种后所产生的免疫力足以抵抗强毒株AVAV—J的攻击,AVAV—J毒株的良好免疫原性.使其有可能成为研制国产疫苗的候选毒株. 相似文献
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应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将400份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为81.25%(325/400).此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400~800倍,而且还有特异性强,操作简便、快速等优点. 相似文献
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用双抗体夹心ELISA法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
应用鸡病毒性关节炎病毒U.Com Sun株,建立了检测鸡病毒性关节炎病毒抗原的双抗体夹心ELISA法。用该法检测三组接毒鸡的关节液,接毒后3天即可检出阳性,阳性率为58.3%;发病严重的4 ̄11天阳性检出率达95.7%;14天阳性率为50%;17天阳性率为31.3%;20天以后则全部为阴性。用该法对大肠杆菌、葡萄球菌、败血支原体、滑膜支原体、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性脑脊髓炎病毒进行检 相似文献
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《中国兽医杂志》2019,(6)
副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是鸡传染性鼻炎的致病菌,可以引起急性呼吸道病,可导致蛋鸡产蛋率下降、从而造成严重的经济损失。副鸡禽杆菌引起的症状与鸡毒支原体等病原引起的其他上呼吸道传染病非常相似,本试验利用副鸡禽杆菌外膜蛋白,建立间接ELISA抗体检测方法,用于血清抗体的检测。通过分析副鸡禽杆菌外膜蛋白HMTp210中较为保守的P9片段,将其进行原核表达并纯化,纯化的P9蛋白免疫鸡制备了抗血清。结果显示,P9蛋白分子量62 Ku,纯度80%以上。以纯化的蛋白P9作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原最佳包被浓度为1μg/mL、血清样品最佳稀释度为1∶100,作用时间为60 min;酶标二抗的最佳稀释浓度为1∶10 000,最佳作用时间为30 min;底物显色时间为15 min;阴、阳性的判定值为0.3。按上述条件建立的间接ELISA方法可以检测出P9蛋白免疫后的鸡血清及三种血清型副鸡禽杆菌的阳性鸡血清,与其他禽病病原体抗血清无交叉反应,本研究为检测副鸡禽杆菌血清抗体提供了一种新的方法。 相似文献
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检测鸡黄病毒血清抗体间接ELISA方法的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究以鸡黄病毒FQ-C1株为包被抗原,建立检测鸡黄病毒血清抗体的间接ELISA方法。经优化后确定其最佳工作条件为每孔包被抗原0.57μg,血清以1:640倍稀释,羊抗鸡IgG酶标抗体以1:3200稀释,显色10 min后读取OD450值,P/N值≥2.1的血清为阳性。本实验所建立的诊断方法敏感性高于血清中和试验。对849份来自福建的血清样品进行检测表明,鸡黄病毒的血清阳性率达33.1%,说明鸡黄病毒感染有一定的流行性。 相似文献
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利用鸭源鸡杆菌YU-PDS-RZ-1-SLG分离株制备超声波裂解抗原,建立了可以检测鸭源鸡杆菌多个血清型抗体的间接ELISA方法。包被抗原质量浓度为10mg/L,包被条件为37℃2h,再4℃过夜;封闭液为1%明胶,封闭条件为37℃1h;阴、阳性血清最佳稀释度为1∶100,酶标二抗工作滴度为1∶1 000;底物显色时间为15min。经交叉性试验、阻断试验和重复性试验证实建立的ELISA方法重复性好,特异性强。板内变异系数为2.01%~5.75%,板间变异系数为2.43%~6.20%。间接ELISA方法的灵敏度是微量凝集试验的25~100倍。利用所建立的ELISA方法检测了人工感染鸭源鸡杆菌的4日龄SPF鸡在感染后不同阶段感染组、同居组和空白对照组的血清抗体,并根据感染后不同阶段所测D450值绘制抗体消长曲线,其抗体水平在感染后32~47d开始上升,60d时达到高峰,但维持时间较短,2周后迅速下降。建立的间接ELISA方法可以用于临床病例的血清学快速检测,为进行鸭源鸡杆菌的血清流行病学调查提供了手段。 相似文献
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为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性. 相似文献
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鸭病毒性肠炎间接ELISA诊断方法的建立及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究以鸭病毒性肠炎(DVE)病毒作为包被抗原,建立了检测DVE抗体的间接ELISA诊断方法.应用该ELISA诊断方法检测DVE阳性对照血清,当血清稀释至12800 倍时,结果仍为阳性;检测其它7种鸭病阳性血清结果均为阴性;批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均小于10%;该检测方法与血清中和试验的符合率为100%.DVE 活疫苗皮下免疫鸭抗体监测结果表明:鸭免疫后第7d 可以在血清中检测出DVE特异性抗体.本试验建立的诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为DVE免疫鸭的抗体监测和DVE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法. 相似文献
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检测鸡慢性呼吸道病抗体ELISA方法的建立 总被引:12,自引:1,他引:11
用败血支原体(MG)A5969株制备ELISA抗原,与抗鸡IG单抗IB7酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ELISA方法,交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。确立了将鸡血清64倍稀释监测ELISA效价(ET)的回收方程y=1.383+0.224x,可用于定量测定,血凝抑制试验(HI)与ELISA比较试验表明,ELISA法比HI试验敏感性高4倍以上。 相似文献
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以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒(ALV)重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10%,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验(IFA)有更高的符合率. 相似文献