百合类体细胞胚和体细胞胚的形态学与组织学研究

 以东方百合‘Siberia’的无菌苗叶柄为试材,诱导产生初始分生结节组织。其后对分生结节组织进行分化再生采用体式显微镜观察和石蜡切片分析的方法对诱导得到的类体细胞胚和体细胞胚再生结构进行形态学和组织学观察。百合类体细胞胚结构呈球形至心形结构或芽状,组织内部主要由薄壁细胞组成,与母体组织存在着明显的维管组织联系,具有多个维管组织中心,其外形与体细胞胚极为相似。百合体细胞胚发源于分生结节表面新生的胚性愈伤组织,经历球形、椭圆形和子叶形胚阶段发育形成完整的植株,在整个发育过程中与母体愈伤组织在整个发育过程中无维管组织联系,且它的根芽两极同时发生,相互联系。研究结果表明,两种再生结构虽然具有极相似的外观形态,但是在发育方式和内部组织结构上截然不同。     

基于体细胞胚发生的细叶百合和兰州百合多倍体诱导及鉴定

以细叶百合（Lilium pumilum DC. Fisch.）和兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）的鳞片和胚性愈伤组织作为诱导材料,用不同浓度秋水仙素以浸泡和混培两种处理方式进行多倍体诱导。以形态学观测、根尖染色体计数、气孔观测对多倍体植株进行倍性鉴定,分别获得了19株细叶百合四倍体植株和6株兰州百合四倍体植株,最佳处理方式为0.1%秋水仙素浸泡胚性愈伤组织24 h。使用ISSR对经体细胞胚发生的二倍体和多倍体再生植株进行遗传分析,发现两种百合二倍体植株遗传较稳定,而多倍体植株均发生遗传变异,其中细叶百合和兰州百合遗传变异率分别为15.48%和9.75%。     

2,4-D对成熟与非成熟西洋参种胚体细胞胚发生的影响

以西洋参成熟种子及未成熟种子为试材,在无菌操作条件下剥取种胚,将其依次接种在不同2,4-D浓度的MS培养基中,在光照和暗培养条件下分别进行培养,研究2,4-D对西洋参种胚体细胞胚发生的影响.结果表明:成熟种胚在不同浓度2,4-D中皆可发生体细胞胚,最佳浓度为0.5 mg/L,光照可以促进体细胞胚发生;未成熟种胚不能形成体细胞胚.说明成熟种胚体细胞胚发生需要2,4-D诱导,未成熟种胚的表现与成熟种胚差异显著;西洋参种胚在发育控制上与人参存在明显不同.     

百合鳞片叶离体诱导形成不定芽和体细胞胚

四倍体龙牙百合鳞片叶直接形成不定芽和体细胞胚的培养及不定芽直接发生的生理生化特性测定结果表明；在ＭＳ培养基中添加一定浓度的６－ＢＡ可以诱导外植体直接分化不定芽。生长素２，４－Ｄ等则强烈抑制不定芽的直接分化。龙牙百合体胚发生的重要调节因素是２，４－Ｄ，体胚发生与２，４－Ｄ浓度及２，４－Ｄ的预培养时间密切相关。     

仙客来体细胞胚发生和发育过程中淀粉粒的动态变化

以仙客来(Cyclamen persicum Mill.)开花植株的新生叶片为外植体,诱导筛选胚性愈伤组织,并使其进一步发育成体细胞胚.组织切片观察结果表明:胚性愈伤组织由胚性和非胚性细胞组成,胚性细胞多以胚性细胞团的形式存在,胚性细胞团起源于诱导的胚性决定细胞.体细胞胚起源于单个胚性细胞,经多细胞原胚、球形胚、心形胚和鱼雷胚等时期发育成完整植株.在体细胞胚的发生发育过程中,淀粉粒出现4次积累高峰,分别为胚性细胞、球形胚、早期鱼雷胚和成熟胚发育成完整的小植株时期,淀粉代谢与体细胞胚发生、发育及小植株的形态建成密切相关.     

柑橘体细胞胚发生的组织细胞学研究

以伏令夏橙长期继代培养的愈伤组织诱导体细胞胚发生。切片观察表明:胚性愈伤组织由胚性和非胚性细胞组成,体细胞胚发生以单细胞外起源方式为主,也可能来自胚性细胞团。胚性细胞分裂产生两个细胞,进而分化发育成多细胞原胚、球形胚、心形胚及子叶胚。次生胚和畸形子叶胚的产生较常见。通过PAS反应发现,胚性细胞和球形胚时期有两次淀粉积累高峰,淀粉的消长与体细胞胚发生的能量供应密切相关。     

仙客来体细胞胚发生和发育过程中淀粉粒的变化

 以仙客来（Cyclamen persicum Mill.）开花植株的新生叶片为外植体，诱导筛选胚性愈伤组织，并使其进一步发育成体细胞胚。组织切片观察结果表明：胚性愈伤组织由胚性和非胚性细胞组成，胚性细胞多以胚性细胞团的形式存在，胚性细胞团起源于诱导的胚性决定细胞。体细胞胚起源于单个胚性细胞，经多细胞原胚、球形胚、心形胚和鱼雷胚等时期发育成完整植株。在体细胞胚的发生发育过程中，淀粉粒出现4次积累高峰，分别为胚性细胞、球形胚、早期鱼雷胚和成熟胚发育成完整的小植株时期，淀粉代谢与体细胞胚发生、发育及小植株的形态建成密切相关。     

番木瓜均质胚性细胞悬浮系的建立和高效植株再生

【目的】提高番木瓜体细胞胚发生的同步性及其植株再生率,为番木瓜大量快繁、细胞工程和分子育种技术研发提供技术基础。【方法】以紫晖110～120 d果实的未成熟合子胚为外植体,经胚性愈伤组织诱导、液体悬浮培养和体细胞胚发生过程,建立均质胚性细胞悬浮系和高效植株再生技术体系,重点比较了不同质量浓度2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)对胚性愈伤组织诱导、不同质量浓度6-苄基氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine,6-BA)+萘乙酸(1-naphthlcetic acid,NAA)组合和活性炭(activated carbon,AC)对子叶期体细胞胚萌发与生根的影响。【结果】4 mg·L^-12,4-D可诱导62.86%未成熟合子胚形成胚性愈伤组织。经5个继代周期的筛选培养,可建立由单细胞和小细胞团组成的均质胚性细胞悬浮系。采用液体培养方式能诱导大量球形胚的形成,被转移至含5 g·L^-1AC的半固定培养基成熟培养30 d后,可获得大量子叶期体细胞胚。在含0.4 mg·L^-1<...     

河套蜜瓜子叶诱导形成体细胞胚的研究

 以河套蜜瓜成熟种子子叶为外植体, 研究体细胞胚途径再生培养的主要影响因子, 并对体胚发生过程进行了观察。结果表明; 体细胞胚发生对培养基糖源浓度要求较高, MS附加60 g/L的糖源效果最好; 最佳植物生长调节剂组合为2,4-D 2.0 mg/L + 6-BA 1.0 mg/L; 1日苗龄子叶为最佳外植体源; 在诱导培养基上经暗培养1周、光培养1周, 再转入胚发育培养基, 有利于成熟胚的产生; 体细胞胚可产生在愈伤组织内部或表面、外植体表面、不定根上及外植体维管束的束中分生组织等部位。     

菠萝愈伤组织中体细胞胚起源过程的组织细胞学观察

以菠萝（Ananas comosus）‘神湾’品种为材料,采用石蜡切片法对其愈伤组织中球形胚形成过程进行了组织细胞学观察。结果表明,非胚性愈伤组织转入到MS + 4.0 mg · L-1 2,4-D + 0.5 mg · L-1 6-BA培养基培养后,愈伤组织中先出现一些胚性细胞;然后单个胚性细胞分裂形成一个由多细胞组成的原胚。原胚细胞分生能力强,与周围的母体组织之间形态差异显著,界限明显,其下部形成一个类似胚柄的结构。随着原胚不断生长,其形状由长椭圆形发展成倒卵形,最后逐渐形成表面较光滑、外观近球形的球形胚,并在‘胚柄’基部与母体组织连接处形成离层。与此同时,球形胚内出现细胞分化。菠萝体细胞胚发生具有内、外两种起源方式,另外愈伤组织中体细胞胚发生普遍存在着不均匀、不同步和次生胚等现象。