几种工业废水对牙鲆仔稚鱼的急性毒性及联合毒性作用

印染废水、电镀废水、农药废水都是常见的、易进入近岸海域的工业废水。本文通过室内实验，研究了这3种工业废水及其混合物对牙鲆仔稚鱼的急性毒性作用。结果表明，印染废水、电镀废水、农药废水及其混合物对牙鲆初孵仔鱼48hLC50(95％置信区间）和96h LC50（95％置信区间）分别为2．28％（1．39％－3．74％）、0．21％（0．18％－0．27％）、0．47％（0．37％－0．60％）及0．42％（0．07％－2．54％）和0．58％（0．15％－0．76％）、0．10％（0．04％－0．25％）、0．23％（0．18％－0．29％）及0．17％（0．12％－0．23％）；对牙鲆后期仔稚鱼48h LC50(95%置信区间）和96h LC50（95％置信区间）分别为2．95％（1．65％－5．29％）、0．22％（0．15％－0．31％）、0．71％（0．50％－1．01％）及0．77％（0．50％－1．19％）和0．69％（0．51％－0．93％）、0．14％（0．10％－0．20％）、0．38％（0．23％－0．61％及0．24％（0．16％－0．35％）。以对牙鲆仔稚鱼半致死浓度为指标，这几种工业废水的毒性顺序为电镀废水＞农药废水＞印染废水，初孵仔鱼较后期仔稚鱼对这些废水更为敏感。这些废水以等体积混合时，对初孵仔鱼和后期稚鱼的联合毒性作用表现为相加作用。     

褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆( ♂)杂交子一代胚胎发育及仔稚鱼形态学观察

杂交是目前水产育种中应用最为广泛、最有成效的育种途径,为了选育一个能够促进中国海水鱼类养殖业发展,改善目前养殖褐牙鲆发病严重的现状的牙鲆类养殖新品种,对褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)(♀)×犬齿牙鲆(P.dentatus)(♂)的杂交进行了研究。在Nikon MS800解剖镜下对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)人工杂交子一代的胚胎及胚后发育进行观察,并使用Nikon数码相机拍摄其发育特征,描述了各发育时期的发育时序和形态特征。杂交子一代胚胎发育可分为卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官发生期、尾芽期、肌肉效应期、脱膜孵化期共9个时期,除克氏泡出现时期以及胚体开始扭动时期具有相对特异性外,胚胎发育过程与褐牙鲆相比无显著差异。在水温(16.5±0.5)℃,盐度32~33的条件下,受精卵历时67 h完成孵化。(19±0.5)℃水温下,仔鱼3 d以前营内源性营养(卵黄囊仔鱼),3 d开口摄食营外源性营养(前弯曲期仔鱼),20 d左右进入变态期(弯曲期仔鱼),40 d后基本完成变态进入稚鱼阶段,生活方式由浮游转为底栖生活,50 d左右全身被鳞。同时观察了自胚胎发育时期至幼鱼期体表色素的分布及形态变化过程,描述了仔鱼变态期冠状鳍条、眼位置和尾部的发育、变化过程。早期生活史无鳔器官发生。     

全雌褐牙鲆稚鱼对硫酸铜和甲醛的耐受性实验

以全雌褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)稚鱼为研究对象,通过96h急性毒性试验,研究了硫酸铜和甲醛对全雌褐牙鲆稚鱼的半数致死浓度(LC50)和安全浓度(SC)。全雌褐牙鲆稚鱼对硫酸铜48h、96h的LC50分别为4.68mg·L-1、2.097mg·L-1,SC为0.209 7mg·L-1;对甲醛48h、96h的LC50分别为95.941mg·L-1、48.61mg·L-1,SC为4.861mg·L-1。     

三种常用化学消毒剂对牙鲆仔稚鱼的急性毒性研究

选用3种化学消毒剂对牙鲆仔稚鱼进行急性毒性试验。结果表明,高锰酸钾对牙鲆仔鱼的24 hLC504、8 h LC50和安全浓度分别为1.678×10-6、1.382×10-6和0.281×10-6,对牙鲆稚鱼的24 h LC50、48 hLC50和安全浓度分别为2.555×10-6、1.789×10-6和0.263×10-6;甲醛对牙鲆仔鱼的24 h LC50、48 h LC50和安全浓度分别为25.821×10-6、10.671×10-6和0.547×10-6,对牙鲆稚鱼的24 h LC50、48 h LC50和安全浓度分别为33.959×10-6、17.046×10-6和1.288×10-6;聚维酮碘对牙鲆仔鱼的24 h LC50、48 h LC50和安全浓度分别为15.744×10-6、8.163×10-6和0.658×10-6,对牙鲆稚鱼的24 h LC504、8 h LC50和安全浓度分别为25.802×10-6、21.286×10-6和4.346×10-6。牙鲆仔稚鱼对3种化学消毒剂的敏感性依次为:高锰酸钾>甲醛>聚维酮碘,并且牙鲆仔鱼分别对3种消毒剂的敏感性均大于牙鲆稚鱼分别对3种消毒剂的敏感性。最后依据本试验结果,作者对牙鲆疾病防治中消毒剂的使用进行了探讨。     

温度和元素浓度对Sr在褐牙鲆仔稚鱼耳石中的沉积影响

科学认识鱼类耳石中微量元素沉积与主要水环境因子的关系是基于耳石微化学方法重新构建鱼类生活史及反演其环境履历的重要前提。本研究以环境与耳石中重要元素Sr为例,研究在不同水温(16℃、19℃和22℃)和不同元素浓度(1×、2×和3×Sr)下Sr在褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)仔稚鱼耳石形成生长过程中(孵化后15~93 d)的沉积(Sr∶Ca比)特征。结果显示,在不同水温下,耳石中Sr∶Ca比随水体中Sr浓度的升高呈线性增长,而元素分配系数(DSr)随元素浓度的升高先降低然后趋于稳定。在不同Sr浓度下,耳石中Sr∶Ca比及DSr均随水温升高呈增长趋势,二者在22℃时的值均显著高于在其他水温时的值。耳石中Sr沉积能够表征褐牙鲆仔稚鱼所经历的水环境中Sr浓度和水温的变化,可作为元素指纹应用于褐牙鲆早期生活史的重建和环境履历的反演。     

舟山褐牙鲆（Paralichthysolivaceus）仔鱼摄食和生长的研究

试验研究了褐牙鲆Paralichthys olivaceus仔鱼的摄食和生长。结果表明,仔鱼初次开口摄食时间在6日龄（16~18℃）,初次摄食率为30%,8日龄饥饿仔鱼最大初次摄食率为65%,孵出后第9天达到不可逆点（PNR）,混合营养期为3 d左右。初次摄食强度和初次摄食率开始时较低,在卵黄囊耗尽时达最高,然后下降。随着饥饿时间的延长,仔鱼出现负增长,孵化第11天存活率仅为10%,12日龄全部死亡。     

温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代（杂交F1）胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明，杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃，在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短，二者符合乘幂函数关系式N=115．99T^-0.768.8（R^2=0．9769）。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7．54℃和540．1℃·h，积算温度（A）与试验水温间呈乘幂函数相关，表达式：A=1328．1T^-0.3149。（R^2=0．9624）。胚胎发育的最低盐度界限为10，孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35；初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐唐范围分别为10～40和10～20。     

舟山褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）仔鱼摄食和生长的研究

试验研究了褐牙鲆Paralichthys olivaceus仔鱼的摄食和生长。结果表明,仔鱼初次开口摄食时间在6日龄（16～18℃）,初次摄食率为30％,8日龄饥饿仔鱼最大初次摄食率为65％,孵出后第9天达到不可逆点（PNR）,混合营养期为3d左右。初次摄食强度和初次摄食率开始时较低,在卵黄囊耗尽时达最高,然后下降。随着饥饿时间的延长,仔鱼出现“负增长”,孵化第11天存活率仅为10％,12日龄全部死亡。     

温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代(杂交F1)胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明,杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃,在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短,二者符合乘幂函数关系式N=115.99T-0.7668(R2=0.9769)。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7.54℃和540.1℃.h,积算温度(A)与试验水温间呈乘幂函数相关,表达式:A=1328.1T-0.3149(R2=0.9624)。胚胎发育的最低盐度界限为10,孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35;初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐度范围分别为10～40和10～20。     

原油和燃油对南海重要海水增养殖生物的急性毒性试验

测定了南海原油、０号柴油和２０号柴油对３种仔虾、种仔鱼和４种贝类的急性毒性。油类对仔鱼和仔虾的毒性大小顺序为：０号柴油〉２０号柴油〉南海原油;对３种贝类（文蛤除外）的毒性大小顺序为０号柴油〉南海原油。油类分散液的毒性大于其水溶性组分。在曝油的３种仔虾中,刀额新对虾对０号柴油和２０号柴油的耐受力最弱,而日本对虾对南海原油最为敏感。曝油仔鱼对３种湍类的耐受力顺序为：黄鳍鲷〉前鳞鲻〉黑鲷,而七星鲈对０号     

Cr6+对牙鲆仔幼鱼的急性毒性效应研究

为深入了解Cr~(6+)对海水鱼类的毒性机理,利用静水式鱼类急性毒性测试方法,开展了Cr~(6+)对牙鲆(Paralichthys olivaceus)仔鱼和幼鱼的急性毒性效应研究。获得了24、48、72、96 h所对应的半致死浓度LC50值,计算了Cr~(6+)对牙鲆的安全浓度,并对急性毒性下红细胞核异常率和鳃的损伤进了观察。结果表明,Cr~(6+)对牙鲆仔鱼24、48、72、96 h的LC50分别为75. 19、67. 13、49. 77、31. 09 mg·L~(-1);对幼鱼的LC50分别为462. 13、435. 36、390. 19、322. 41 mg·L~(-1)。安全浓度分别为16. 05 mg·L~(-1)(仔鱼)和115. 91 mg·L~(-1)(幼鱼)。Cr~(6+)对牙鲆仔鱼的毒性属于中等毒性,而对幼鱼的毒性为低等毒性。Cr~(6+)对红细胞核异常率的影响呈现质量浓度、处理时间—效应关系。Cr~(6+)会造成牙鲆鳃的损伤,且损伤程度随着浓度和时间的增加而加重。本研究可为进一步开展Cr~(6+)对海水鱼类的毒性机理研究奠定基础。     

Acute ammonia toxicity and gill morphological changes of Japanese flounder Paralichthys olivaceus in normal versus supersaturated oxygen

Ammonia toxicity and morphological changes in gills of juvenile Japanese flounder Paralichthys olivaceus (5.76 ± 0.12 g) were investigated when fish were separately exposed to normal dissolved oxygen (DO) at 6.5 ± 0.5 mg L^?1 and supersaturated oxygen at 16.0 ± 2.0 mg L^?1 at different ammonia concentrations. Under normal oxygen, ammonia concentrations were tested from 0.04 (control) to 93.3 mg L^?1 total ammonia nitrogen (TAN), whereas under oxygen supersaturation, ammonia concentrations ranged from 0.04 (control) to 226.7 mg L^?1 TAN in the trial. After exposure to ammonia for 96 h, the ammonia LC₅₀ for fish was 62.48 mg L^?1 TAN (0.50 mg L^?1 NH₃–N) at normal oxygen and 160.71 mg L^?1 TAN (0.65 mg L^?1 NH₃–N) at oxygen supersaturation. Light microscopic observations confirmed that gill damage in normal oxygen was more profound than in oxygen supersaturation when fish were exposed to the same level of TAN (93.3 mg L^?1). Furthermore, electron microscopic scanning also showed more crimple, retraction and fibrosis on the secondary lamella surface in fish exposed to normal oxygen than those in fish exposed to supersaturated oxygen at the same TAN (93.3 mg L^?1). This study suggests that supersaturated oxygen can increase ammonia tolerance in Japanese flounder through reducing gill damage by ammonia, which partially explains the merit of using pure oxygen injection in intensive fish farming.     

Hg2+对克隆牙鲆和普通牙鲆的急性毒性

以相同规格的牙鲆Paralichthys olivaceus普通群体为对照,采用静水生物测试法开展了Hg2+对牙鲆克隆群体的急性毒性实验,实验所用幼鱼为130日龄,体长为(12.38±1.13)cm,体质量为(17.97±5.79)g。实验期间,水温为(21±1.2)℃,pH为8.1-8.3,盐度为31.0,硬度6200 mg/L,连续充气保证溶氧充足。研究表明,实验初始阶段,高浓度组克隆牙鲆在容器内躁动不安,上升到水面沿池壁缓慢转圈游动,一段时间后安静伏在池底;而普通牙鲆则仅个别鱼在水面游动,多数静止在池底不动。随中毒程度加深,用玻璃棒触碰普通牙鲆时,其反应剧烈,在水中侧翻、打转、急速游动或上下窜动,而克隆牙鲆则仅沿池底缓慢游动。最终克隆牙鲆和普通牙鲆均身体僵直,失去呼吸能力死亡。Hg2+对克隆牙鲆的24、48、96 h的半致死质量浓度分别为1.50、0.86、0.84 mg/L,而对普通牙鲆的半致死质量浓度则分别为1.93、1.04、0.90 mg/L。结果表明,克隆牙鲆对Hg2+的耐受性弱于普通牙鲆,对Hg2+更加敏感。从死亡过程看,各处理组的克隆牙鲆从出现死亡个体开始,死亡时间集中在8 h内,具有同步性;普通牙鲆则在实验期间陆续出现死亡,持续时间较长,同步性较差。     

癸甲溴铵对褐牙鲆的急性毒性及抑菌试验

通过药浴方式,进行了癸甲溴铵对褐牙鲆的急性毒性试验;采用二倍稀释法,进行了癸甲溴铵对鳗弧菌、副溶血弧菌的体外抑菌试验;探讨了癸甲溴铵对鳗弧菌引起的褐牙鲆细菌性疾病的防治效果。结果表明,在19.0～21.0℃和24.5～25.5℃时,癸甲溴铵对褐牙鲆的24、48h半数致死浓度(LC50)和安全浓度(Sc)分别为6.35、4.84、0.84和2.43、2.14、0.5mg/L。通过对中毒死亡褐牙鲆的病理组织学观察表明,癸甲溴铵对褐牙鲆的鳃损害最严重,其次是肝脏,对肾脏的损害相对较轻,特别是对鳃的损害与鱼的死亡有很大的关系。在24和32℃,癸甲溴铵对鳗弧菌、副溶血弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为10、20和5、10mg/L。防治效果试验表明,癸甲溴铵0.3mg/L浓度药浴可有效防治鳗弧菌引起的褐牙鲆细菌性疾病。     

双歧杆菌细胞壁肽聚糖的分离及其对二种海产动物免疫活性的影响

采用三氯乙酸裂解法分离双歧杆菌细胞壁肽聚糖,得到的肽聚糖约占双歧杆菌细胞干重的8．4％,其中总糖含量约为24．2％,脂肪酸含量约为3．2％,蛋白质含量约为2．4％;氨基酸含量及组分分析结果显示：与N-乙酰胞壁酸羧基连接的肽链上的甘氨酸、谷氨酸、赖氨酸和丙氨酸间的摩尔比为1：0．7：1．1：6．7。将所得肽聚糖经超声波破碎后,制成0．1％和1％两种浓度的悬液,并将相应的缓冲液设置为对照组,分别注射给日本对虾和牙鲆,测定其对日本对虾和牙鲆血清酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和溶菌酶(LSZ)5种免疫酶活性的影响。结果显示：肽聚糖可显著提高日本对虾血清内的PO活性和LSZ活性,并在96h内一直维持在较高水平;肽聚糖可适当提高日本对虾血清SOD活性,但到72h又降回原来的水平;肽聚糖可影响日本对虾血清的ALP活性和ACP活性,且两种作用趋势相近,96h内呈逐渐平缓上升的趋势。肽聚糖可显著提高牙鲆血清的LSZ活性,但这种升高具有明显的时效性,72h后降至原来的水平,且不同浓度的作用效果也有差异。由此可见,肽聚糖可作为免疫增强剂用于提高养殖日本对虾和牙鲆的非特异性免疫水平。     

恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在牙鲆体内代谢消除规律

以80 mg/kg鱼体重对牙鲆单次口灌给药恩诺沙星,给药后在不同的时间点取样,用高效液相色谱荧光检测器检测,研究恩诺沙星及其主要代谢产物环丙沙星在牙鲆体内的代谢消除规律。研究表明,停药后0.25 h,肌肉中恩诺沙星残留量最低。各组织的消除半衰期依次为腮肝脏血液肾脏肌肉,其中肌肉中恩诺沙星消除半衰期最低为67.759 h,消除最快,停药后12 d检测不到恩诺沙星。停药后0.25 h,在牙鲆血液、肝脏、肾脏中均有环丙沙星残留,残留量依次为肝脏肾脏血液,肌肉和鳃中未检出环丙沙星。停药后22 d在血液、肝脏和肾脏3个组织中仍然能够检测出恩诺沙星,但是停药7 d后这3个组织中均检测不出环丙沙星。结果显示,恩诺沙星在牙鲆体内代谢速度较慢,而且只是在一段时间内有脱乙基代谢为环丙沙星的反应发生,但并不是在恩诺沙星消除的全过程都发生,而且代谢物环丙沙星在牙鲆体内的消除速度要比恩诺沙星快。     

牙鲆的胚胎发育

在牙鲆胚胎玻璃化冷冻中,为了准确选择胚胎的冷冻时期,掌握胚胎发育进程,同时为牙鲆苗种培育提供一定的依据,对海水工厂化养殖牙鲆的胚胎发育进行了研究。牙鲆受精卵培养在14-16℃、盐度29．9的海水中,利用Olympus显微镜对牙鲆胚胎发育过程连续观察,对各个胚胎时期的发育时间进行了记录,并对每一时期的特征用Olympus照像机进行了拍摄。实验记录了从受精卵到出膜后5d的29个具体发育时期的特征和发育时间,拍摄了30张具有代表性的胚胎和鱼苗图片,将牙鲆胚胎发育划分为卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、肌节期、尾芽期、心跳期、胚体转动期、出膜前期、出膜期10个连续的典型时期。在此培养条件下牙鲆胚胎历时93h完成整个胚胎发育,孵化出膜,再经96h的胚后发育卵黄囊完全吸收,之后进入变态期,向成鱼转化。