猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌5型二联灭活疫苗研制与免疫效力研究

猪圆环病毒2型(PCV2)和副猪嗜血杆菌(HPs)混合感染十分普遍,造成我国养猪业严重经济损失。本研究将杆状病毒表达的重组PCV2 Cap蛋白(BCap)和PCV2灭活病毒液(i PCV2),分别与HPs血清5型(HPs5)灭活菌液混合,加入水性佐剂混合制备成BCap/HPs5与i PCV2/HPs5二联灭活疫苗,进行猪体免疫保护试验。仔猪免疫保护试验结果为:两种疫苗免疫后均可诱导猪体产生PCV2和HPs抗体。免疫后35天用PCV2攻击,两免疫组猪均无明显临床症状,相对日增重(RDWG)与空白对照组相似,但高于攻毒对照组(P0.05);攻毒后14天,病毒血症明显低于攻毒对照组(P0.05);攻毒后28天剖解,腹股沟淋巴结PCV2载量明显低于攻毒对照组(P0.05),病理学变化明显轻于攻毒对照组。免疫后35天用HPs攻击,对照组猪均出现明显临床症状,但两免疫组猪无明显临床症状;攻毒后14天剖检,两免疫组病理学变化方面相似,但明显轻于攻毒对照组。结果表明,BCap/HPs5与i PCV2/HPs5两种二联苗免疫仔猪后均能诱导机体产生免疫应答,产生免疫保护作用,具有较好应用前景。     

荧光定量RT-PCR检测高致病性PRRSV疫苗免疫仔猪攻毒前后抗原在体内的动态分布

为了更好地了解高致病性PRRSV疫苗的免疫机理,试验应用荧光定量RT-PCR方法比较了PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫仔猪攻毒前后PRRSV在体内动态分布的差异。结果表明:HuN4活疫苗组攻毒后,病毒在各组织中的含量明显低于JXA1灭活苗组和对照组;JXA1灭活苗组攻毒后,病毒在各组织中的分布、载量与对照组相似,但较对照组轻。说明HuN4活疫苗免疫仔猪攻毒后,能明显抑制病毒在各组织中的复制,其免疫效果明显优于JXA1灭活苗。     

犬冠状病毒YS1株细胞培养弱毒的实验免疫研究

应用纯化后的犬冠状病毒 (CCV)YS1株细胞培养致弱的弱毒 (CCVYS1V60 ) ,经口鼻和肌肉接种CCV ,SN抗体小于 1∶2的易感犬作安全试验 ,结果未见任何CCV临床症状与病理解剖学改变 ;用不同剂量的该CCV弱毒分组免疫CCV易感犬 ,经SN抗体测定与用CCV强毒攻毒试验 ,结果SN抗体达 1∶60以上的犬 90 %以上可获得免疫保护 ;应用该CCV弱毒分别免疫母源抗体达 1∶4和 1∶8的 2组试验犬 ,第 1次免疫 1 4d后SN抗体均未见升高 ,追加 2～ 3次免疫后 ,SN抗体才逐渐上升至 1∶60以上的免疫保护水平 ;用CCV易感犬和猫肾传代细胞 (CRFK)分别将该CCV细胞培养弱毒连续传 5代和 2 0代 ,结果对犬仍然安全 ,免疫原性也未见下降 ;与犬瘟热病毒 (CDV)、犬传染性肝炎病毒 (ICHV)和犬细小病毒(CPV)弱毒作免疫互扰试验 ,结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异 ;该毒的免疫期在 1年以上 ,- 2 0℃冻结保存的保存期为 9个月。     

猪乙型脑炎病毒灭活疫苗(A6株)的制备及免疫保护研究

为了制备猪乙型脑炎病毒(A6株)灭活疫苗,并研究其免疫保护效果,试验将猪乙型脑炎病毒(A6株)在Vero细胞上培养增殖,用β-丙内酯灭活,将检验合格的抗原与206疫苗佐剂乳化制备成猪乙型脑炎病毒灭活疫苗(A6株)。将制备的猪乙型脑炎病毒灭活疫苗(A6株)用PBS稀释成1∶5、1∶50、1∶500 3个稀释度免疫小鼠后攻毒,后备母猪肌肉注射猪乙型脑炎病毒灭活疫苗(A6株)后间隔14 d后加强免疫1次,对免疫后备母猪及所产仔猪的中和抗体效价进行测定。同时,进行后备母猪免疫攻毒试验,分为疫苗免疫组和攻毒对照组,母猪妊娠30 d后用猪乙型脑炎病毒(A6株)进行攻毒,攻毒后记录各组母猪临床症状及所产仔猪的健康状况,发病仔猪剖检,观察病变。结果表明：猪乙型脑炎病毒灭活疫苗(A6株)1∶50倍稀释免疫小鼠进行攻毒,保护率可达到80%。后备母猪间隔14 d免疫两次可以产生高水平的中和抗体,而且所产仔猪的中和抗体效价可以维持到30日龄。对妊娠30 d母猪进行攻毒,疫苗免疫组妊娠母猪均正常产仔,仔猪全部健活,全部保护;攻毒对照组妊娠母猪发生流产,产出死胎、木乃伊胎和弱胎,全部发病。发病胎儿剖检,可见脑积水...     

猪细小病毒(BJ-2株)灭活疫苗免疫效力试验

用实验室制备并经初步检验合格的猪细小病毒灭活疫苗免疫豚鼠和试验猪,测定免疫豚鼠和猪的HI抗体效价,并对免疫的怀孕母猪进行攻毒,探索HI抗体效价与攻毒免疫保护的相关性.结果显示免疫后一个月所有经免疫的豚鼠、猪的HI抗体效价均达到1∶256以上,高水平的抗体可持续一个月以上;初产母猪免疫后攻毒试验显示攻毒后免疫组不出现病毒血症,且免疫攻毒组的平均窝产仔数和产活仔数均明显高于未免疫攻毒组,且胎猪的体长、体重等指标存在显著差异,试验结果充分说明该疫苗的免疫效果是非常确实的.     

新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合征三联灭活油乳剂疫苗的攻毒保护试验

用新支减三联灭活油乳剂疫苗皮下注射健康鸡，免疫3周后，分别用NDVF48E9株、IBVM41株、EDSVHE02株进行攻毒，检验新支减三联灭活油乳剂疫苗的免疫保护能力。结果显示，免疫组的攻毒保护率为：新城疫100％保护，传染性支气管炎书0％保护，减蛋综合征90％保护；对照组攻毒保护率为：新城疫0％保护，传染性支气管炎2...     

鸡传染性鼻炎灭活疫苗免疫效力的试验研究

应用当地分离株研制的鸡传染性鼻炎氢氧化铝胶灭活苗进行了免疫保护试验。并与油佐剂苗进行了比较,经对免疫鸡的抗体检测,攻毒后的临床症状,眶下窦中HPg分离表明鸡传染性鼻炎氢氧化铝胶苗优于油乳剂灭活苗。     

NDV、IBDV二联灭活苗对蛋雏鸡免疫程序研究

为探讨鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)二联灭活疫苗在蛋雏鸡养殖中的实际应用效果进行本试验。用鸡新城疫、传染性法氏囊二联灭活疫苗及传染性法氏囊活疫苗以不同免疫程序免疫7~14日龄蛋雏鸡,定期监测NDV、IBDV抗体水平,并在雏鸡60日龄时进行攻毒保护试验。结果表明,各二联苗免疫组NDV抗体水平在免疫后14 d即达到NDV血清学最低有效保护价标准,并维持至雏鸡60日龄。免疫后28 d,灭活苗一次性免疫各组IBDV中和抗体水平显著高于活苗两次免疫组,琼扩抗体水平与活苗两次免疫组无明显差异。雏鸡60日龄时攻毒,各免疫组均100%保护,对照组无保护。以上结果说明该二联灭活疫苗可替代IBDV活毒疫苗用于7~14日龄商品雏鸡免疫,免疫期至少为60d。     

国内、外鸡传染性鼻炎不同佐剂灭活疫苗免疫效力比较试验

为了评价我们应用当地分离株研制的鸡传染性鼻炎(IC)氢氧化铝胶灭活苗的免疫效力,我们从意大利引进了鸡传染性鼻炎氢氧化铝胶灭活苗,从荷兰引进了鸡传染性鼻炎油乳剂灭活苗并进行了免疫保护对比试验。经对注苗鸡的局部反应、抗体检测、攻毒后的临床症状、眶下窦中Hpg分离结果表明,我们研制的IC氢氧化铝胶灭活苗与引进的氢氧化铝胶灭活疫苗的免疫效果基本相同,均优于从荷兰引进的IC油乳剂灭活苗。     

PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究

为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。     

HSN2与H5N1禽流感油乳灭活疫苗免疫鹅群对H5N1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰

应用HSN2和HSN12种类型禽流感油乳灭活疫苗分别免疫鹅群，观察比较了二者对HSN1型高致病性禽流感病毒的攻毒保护效力。结果表明，在同等剂量免疫条件下，从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律3项指标综合评价来看，HSN1灭活苗水禽免疫组对高致病性禽流感HSN1流行株攻毒的保护妓率较HSN2灭活苗理想，且水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

鸡传染性法氏囊病活疫苗与鸡痘活疫苗联合免疫效果研究

鸡传染性法氏囊病(IBD)活疫苗与鸡痘活疫苗通过颈部皮下注射途径,同时接种1日龄出雏鸡,检测2种活疫苗联合免疫的安全性和免疫效力。将2种活疫苗同时免疫SPF雏鸡,免疫后21天用传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒和鸡痘强毒进行攻毒,观察试验组与对照组的攻毒保护情况。结果表明:安全性试验结果显示,免疫后14天内观察所有鸡的精神、食欲和生长发育均正常;剖检所有试验鸡脏器均未见异常,说明2种活疫苗联合免疫SPF雏鸡后是安全的。效力检验结果显示:免疫后21天,分别用鸡痘强毒和法氏囊强毒进行免疫鸡和对照鸡攻毒,鸡痘部分:攻毒后,对照鸡均发痘,免疫鸡无不良反应,未引起全身痘,获得10/10保护;法氏囊部分:攻毒对照鸡法氏囊病变10/10,免疫鸡法氏囊无病变。研究表明2种活疫苗联合免疫雏鸡后,可同时抵御IBDV强毒与鸡痘强毒株的攻击,保护效果良好。结论:IBD与鸡痘活疫苗联合免疫,对雏鸡安全,免疫保护效果好,避免多次免疫对雏鸡带来的应激反应,提高养殖经济效益。     

鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）最小有效免疫剂量的研究

为科学指导鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）的临床免疫剂量,通过测定免疫鸡HI抗体滴度和攻毒保护试验,进行了10日龄和30日龄SPF鸡最小有效免疫剂量的研究。动物实验使用10 μL、20 μL和40 μL三种不同免疫剂量,免疫疫苗后21 d检测HI抗体效价,10日龄SPF鸡001批次疫苗HI抗体平均效价依次为：4.8、6.2和6.5,攻毒保护率依次为80%、100%和100%,30日龄SPF鸡HI抗体平均效价依次为：5.0、6.3和6.5,攻毒保护率依次为70%、100%和100%,结果表明,新城疫灭活标记疫苗（MG7株）HI 抗体效价和保护效力呈正相关, 免疫剂量与HI 抗体效价和保护效力也呈正相关。用NDV基因Ⅶ型强毒G7株进行攻毒保护试验,两种日龄鸡在20 μL的免疫剂量下,疫苗仍能达到良好的免疫保护效果。     

内源性干扰素及转移因子对兔病毒性出血症的保护作用

通过对家兔人工免疫后血清干扰素的测定及注射聚肌胞后的攻毒保护试验，结果表明：兔病毒必出血症疫苗同聚肌胞一样，是一种良好的干扰素诱生剂，疫苗诱导产生的内源性干扰素参与疫苗的免疫保护机理，提供早期保护作用，而特异性转移因子基本上不保护家兔抵御强毒攻击，故不以用之替代脏器组织灭活苗。     

规模化猪场猪伪狂犬病攻毒及免疫效果监测

伪狂犬病（PK）是由疱疹病毒引起的多种动物共患的急性传染病。在养猪生产中主要引起种猪不育、妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎，新生仔猪和断奶仔猪大量死亡，肥猪增重减慢、饲料报酬降低等，给养猪业造成巨大的经济损失。目前，该病主要通过疫苗接种进行预防，应用的免疫程序为：妊娠母猪产前30d应用猪伪狂犬病灭活苗免疫；疫区仔猪应用猪伪狂犬病基因缺失弱毒疫苗进行超前免疫或20～25日龄免疫。为验证现行的免疫程序特进行免疫效果监测和攻毒保护试验。     

猫疱疹病毒Ⅰ型HB株的分离鉴定及其免疫原性初步评价

从疑似患猫鼻气管炎的幼猫鼻拭子样品分离到1株猫疱疹病毒(FHV-HB),对该分离株进行了形态学、血清学、免疫原性和动物回归试验分析。结果显示,分离毒株FHV-HB在电镜下具有疱疹病毒粒子的典型形态特点。第5代细胞培养物的病毒滴度为10^7.5 TCID₅₀/mL,灭活后免疫猫并进行攻毒试验,免疫组猫全部存活,对照组猫全部发病甚至死亡。结果表明本试验分离到的FHV-HB株免疫原性较好,并且具有较强的毒力,既可作为疫苗生产用候选毒株,也可作为疫苗评价用候选毒株,为猫鼻气管炎疫苗研发提供毒种和科学依据。     

规模化猪场猪伪狂犬病攻毒及免疫效果监测

伪狂犬病(PR)是由疱疹病毒引起的多种动物共患的急性传染病。在养猪生产中主要引起种猪不育、妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎，新生仔猪和断奶仔猪大量死亡，肥猪增重减慢、饲料报酬降低等，给养猪业造成巨大的经济损失。目前该病主要通过疫苗接种进行预防，应用的免疫程序为：妊娠母猪产前30天应用猪伪狂犬病灭活苗免疫；疫区仔猪应用猪伪狂犬病基因缺失弱毒疫苗进行超前免疫或20～25日龄免疫。为验证现行的免疫程序特进行免疫效果监测和攻毒保护实验。     

鸭瘟灭活疫苗效力试验和安全试验

将已建立的鸭瘟病毒(DPV)AV1221株基础种毒经鸭胚繁殖、收集胚液病毒、0.2%甲醛溶液灭活后,与矿物油佐剂乳化制备了3批鸭瘟灭活疫苗.成鸭的免疫攻毒测定,疫苗最小免疫剂量为0.12 mL,确定使用剂量为每羽份0.5 mL.单剂量、单剂量重复和超剂量安全试验结果显示,疫苗不引起产蛋鸭的全身不良反应和明显的局部反应.疫苗的免疫攻毒试验结果表明,疫苗在不同品种的成鸭中,使用不同的免疫途径,均能诱导产生80%以上保护;在雏鸭中,经二次免疫也能够诱导产生80%以上保护.疫苗一次免疫鸭后,不同时间诱导产生的中和抗体滴度(GMT)分别是,7 d为1:3.2、10 d为1:4.6、14 d为1:8,21 d、30 d和60 d均为1:7;免后10 d可以产生80%攻毒保护,14 d和21 d可产生完全保护.疫苗的免疫持续期试验结果表明,成鸭经1次免疫后150 d,雏鸭经二次免疫后60 d均可维持80%以上保护.     

H5N2与H5N1禽流感油乳灭活疫苗免疫鹅群对H5N1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰

应用H5N2和H5N12种类型禽流感油乳灭活疫苗分别免疫鹅群,观察比较了二者对H5N1型高致病性禽流感病毒的攻毒保护效力。结果表明,在同等剂量免疫条件下,从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律3项指标综合评价来看,H5N1灭活苗水禽免疫组对高致病性禽流感H5N1流行株攻毒的保护效率较H5N2灭活苗理想,且水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

血清10型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制

鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染是主要危害2~8周龄雏鸭的高致病性细菌性传染病。为研制血清10型RA灭活油乳剂疫苗,选取10株血清10型RA分离株进行动物体复壮、分离和鉴定后,分别对部分毒株进行了毒力测定和灭活油乳剂疫苗的研制。结果表明,所有试验用分离株对7日龄雏鸭均具有较强的致病力。分离株YXL1和HXb2的半数致死量分别为2.8×108 cfu和82 cfu,不同菌株之间的毒力差异很大。用研制的灭活油乳剂疫苗对雏鸭进行2次免疫后,免疫鸭可获得高水平的特异性抗体,并可抵抗强毒RA的攻击,以HXb2免疫后的攻毒保护性最好。抗体水平检测和攻毒保护试验结果表明,用血清10型RA分离株HXb2制备的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护作用。