大豆脂肪氧化酶缺失体检测方法研究

薄层等电聚焦电泳技术(IEF)具有准确、快速、分辨率高的特点.作者对IEF-PAGE电泳制胶及酶染技术进行改进,应用于大豆脂肪氧化酶同工酶类型鉴定,获得很好效果,大大降低实验成本,为此,作者研究制定了一套准确、简便的大豆脂肪氧化酶缺失体检测方法.     

大豆脂肪氧化酶生理作用研究进展

富含蛋白质和油脂的大豆为人类食用已有悠久历史,Ａｎｄｒｅ和Ｈｏｕ（１９３２）首先发现大豆蛋白制品产生豆腥味是因聚不饱和脂肪酸的酶促反应的结果,其中关键的酶是脂肪氧化酶（Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ）（ＥＣ１．１３．１１．１２）,Ｔｈｅｏｒｅｌ等（１９４７...     

植物脂肪氧化酶同功酶快速检测技术在无豆腥味大豆育种上的应用研究

利用植物脂肪氧化酶同功酶快速检测技术对60个大豆种质资源和后代材料进行筛选。得到大豆脂肪氧化酶同功酶部分缺失和全缺失材料9个，用筛选的脂肪氧化酶同功酶缺失材料进行自交，在其自交后代中，得到无豆腥味且农艺性状优良的脂肪氧化酶同功酶部分缺失和全缺失的大豆品系10个，其中有大量的脂肪氧化酶同功酶全缺失和部分缺失的单株。     

黔南山区大豆脂肪氧化酶类型及活性鉴定

采用等电聚焦凝胶电泳法对贵州黔南山区68份大豆地方品种的脂肪氧化酶进行了测定，发现了17份Lox－3缺失体。通过脂肪氧化酶漂白胡萝卜素试验，发现这17份材料的脂肪氧化酶活性均较低，其中荔波二月豆等4份材料与日本、美国的同类材料水平相当。     

大豆种子脂肪氧化酶与豆制品产生豆腥味关系的研究进展

全面阐述了大豆种子脂肪氧化酶参与形成豆腥味物质的主要途径、豆腥味的主要成份以及脂肪氧化酶同功酶及其缺失体类型在豆制品形成豆腥味中的作用差异,指出了在遗传育种上开展大豆种子脂肪氧化酶同功酶缺失体材料选育的必要性。     

花生种子脂肪氧化酶鉴定方法研究

借鉴其他作物脂肪氧化酶的鉴定方法,根据花生脂肪氧化酶同工酶等电点差异,利用等电聚焦电泳技术,建立花生脂肪氧化酶同工酶的鉴定方法,并探讨其适宜实验条件。该方法具有分辨率高、特异性强的特点,为广泛开展花生脂肪氧化酶筛选鉴定工作奠定基础。     

大豆脂肪氧化酶缺失体的农艺和品质性状鉴定

从贵州省大豆品种中随机抽取１４４份进行脂肪氧化酶测定、豆奶加工试验和品质、农艺性状分析。结果发现了３３份脂肪氧化酶缺失品种（其中２份育成品种）,占鉴定总数的２２．９％,包括缺失Ｌｏｘ２、Ｌｏｘ３和Ｌｏｘ２、３类型,以缺失Ｌｏｘ３类型较多。缺失脂氧酶地方品种的蛋白质、脂肪含量较低,其氨基酸成分及比例与正常品种相近,而缺失的育成品种的蛋白质含量则高达４７％以上。利用强碱高温消除豆浆中的豆腥味后,正常品     

大豆种子脂肪氧化酶的缺失对种子劣变的影响

用Suzuyutaka及其全套种子脂肪氧化酶缺失体近等位基因系作实验材料，研究评价缺失大豆种子脂肪氧化酶同功酶对种子劣变的影响。结果表明，在贮藏期间，所有缺失体类型与正常品种Suzuyutaka一样贮藏始期 都具有高的活力和发芽率，随着贮藏时间的推移，都以相似的规律和基本一致的速率丧失种子的发芽率和活力；而且酶活性的变化规律也基本一致。表明种子脂肪氧化酶的缺失对大豆种子劣变没有明显影响。     

贵州大豆脂肪氧化酶缺失体的农艺和品质性状分析

从贵州大豆品种中随机抽取１４４份进行脂肪氧化酶测定、豆奶加工试验和品质、农艺性状分析。结果发现了３３份楷氧酶缺失品种（其中包括２份育成品种）,占鉴定总数的２２．９％,包括缺失Ｌｏｘ２、Ｌｏｘ３和Ｌｏｘ２、３几种类型,以缺失Ｌｏｘ３类型较多。脂氧酶民缺失的地方品种的蛋白质、脂肪含量较低,其氨基酸成分及比例与正常品种一样,而缺失的育成品种的蛋白质含量则高达４７％以上。利用强碱高温消除豆浆中的豆腥味后,     

大豆种子脂肪氧化酶同工酶缺失体的超弱发光研究

利用超弱发光方法对具有不同脂肪氧化酶同工酶缺失体的大豆种子进行整体水平上的测试，跟踪测量了在种子吸涨到萌动以及发芽的全过程中顷豆种子超弱发光的变化，并且测定了它们的发光谱线。探索用发光强度鉴别是否有缺失Ｌｏｘ３异型材料的可能性和有效性；同时通过超弱发光发射光谱的差异来进一步     

应用大孔树脂纯化大豆异黄酮的工艺研究

先用聚醚砜有机膜对豆粕乙醇提取液进行超滤,然后用D101大孔树脂纯化,研究大豆异黄酮的精制工艺.结果表明:用孔径5000D的有机膜超滤处理豆粕乙醇提取液,能够去除其中56.1％的杂质.用D101大孔树脂纯化,采用上样液浓度为0.750 mg·mL -1大豆异黄酮溶液,流速为1.0 BV·h-1,依次用去离子水、1.0 ...     

大豆胰蛋白酶抑制因子的分离纯化

以脱脂豆粉为原料,经pH7.6磷酸溶液抽提、65℃热变性、硫酸铵分步沉淀等提取技术制备粗提液,之后再经过DEAE-52离子交换、亲和层析和葡聚糖凝胶过滤等纯化技术研究大豆胰蛋白酶抑制因子的分离纯化方法。结果表明,从脱脂豆粉中分离纯化的大豆胰蛋白酶抑制因子的比活力高达4 600 U.mg-1,提纯倍数为73.85。纯化的大豆胰蛋白酶抑制因子经SDS-PAGE电泳分析,呈现2条谱带,分子量分别为21.92和20.04 kDa,这2种蛋白均为大豆胰蛋白酶抑制因子。该法操作简便,分离纯化效果好,对大豆胰蛋白酶抑制因子的研究与生产有重要的参考价值。     

抗氧化大豆多肽纯化的研究

利用超滤技术分离大豆多肽酶解物,得到分子量在5 KDa～10 KDa与小于5 KDa的多肽,利用高速逆流色谱技术(HSCCC)对分子量小于5 KDa的多肽进行分离,并利用反相高效液相色谱技术(RP-HLPC)进一步纯化,得到纯度为73.68%的大豆多肽.与未纯化的大豆蛋白酶解物相比,纯化后的大豆多肽清除超氧阴离子自由基和过氧化氢的能力分别提高了43.72%和71.64%.因此,该系列纯化方法所得产物的纯度高,抗氧化能力强,适合于抗氧化大豆多肽的制备.     

大豆GmGBP1基因的原核表达及重组蛋白纯化

将大豆中已克隆的一个新的SKIP基因(GmGBP1)构建到原核表达载体pGEX-6p-1上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,对其进行IPTG诱导.结果表明:在IPTG浓度为0.1 mmol·L-1,诱导时间为8h,诱导温度为37℃时,重组蛋白得到表达,分子量大约为95 kDa,SDS-PAGE电泳结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在,用8 mol·L-1尿素对其进行溶解后经GST柱纯化,得到较好的纯化效果.     

大豆球蛋白直接ELISA检测方法的建立与初步应用

以大豆球蛋白特异性多克隆抗体为一抗,辣根过氧化酶标记抗兔IgG(HPR)为酶标二抗,TMB为底物,建立一种检测大豆球蛋白直接ELISA方法。应用该方法对在吉林省部分地区收集的25个样本进行初步检测,并与竞争ELISA方法进行对比,每个样品进行6个重复,结果显示,约64%的样本使用直接ELISA法的蛋白检出显著高于竞争ELISA法,且标准差的符合率达到72%以上。本试验建立的直接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于食品及饲料行业中过敏蛋白的批量检测。     

利用种子萌发法快速检测抗草铵膦转基因大豆

转基因后代植株遗传存在不稳定性,能够快速有效地筛选后代阳性植株成为转基因研究工作的重点。通过在培养基中添加不同浓度的草铵膦进行种子萌发试验,结果普通受体大豆品种东农50在大于5.0 mg.L-1草铵膦筛选压力下,种子萌发率显著降低,植株根系生长受到抑制,基本不能完成正常的生活史;携带bar基因的Southern拷贝T2代转基因大豆种子在添加5.0 mg.L-1草铵膦的MS培养基中34.7%能正常萌发生长,利用CaMV35S和bar 2对引物对5.0 mg.L-1草铵膦筛选得到的转基因植株进行检测,能扩增出正确的条带,结果均为阳性。研究表明应用种子萌发法能够快速检测草铵膦转基因大豆。     

光度法快速测定大豆水溶性蛋白质的研究

在室温条件下的酸性介质中,大豆水溶性蛋白质能与偶氮洋红G(azocarmine G)迅速结合,生成紫红色复合物,该复合物的最大吸收波长为580 nm,比偶氮洋红G红移了50 nm,其吸光强度与大豆水溶性蛋白质的质量浓度在3~34μg.mL-1范围内存在较好的选择性和较宽的线性关系。依此建立了测定大豆水溶性蛋白质的新方法,同时优化了大豆水溶性蛋白质的提取过程。该方法具有快速、稳定的特点,与凯氏法所得测定结果基本一致。     

速溶性大豆分离蛋白生产工艺优化

以中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复配为工具酶,以水解度为指标,通过单因素试验与响应面分析对大豆分离蛋白的酶解工艺进行优化,并添加磷脂、蔗糖,以溶解性为指标优化调配工艺,提高其速溶性.结果得到最佳酶解工艺参数为pH7.08,温度51.6℃,酶(木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按质量比1∶1复配)添加量22.45 mg·g-1,酶解时间3h;在此酶解条件下,大豆分离蛋白的水解度达20.3％,溶解度达72％.最佳调配工艺为磷脂添加量0.8％,蔗糖添加量3.0％,最终产品溶解度达92.9％.样品溶于水后下沉快,易溶解,无团块.     

一种从大豆胞囊线虫中快速提取DNA的方法

由于大豆胞囊线虫(soybean cyst nematode,SCN)特殊的生长环境,用细菌专用DNA试剂盒提取方法提取DNA的质量不理想,而且耗时长,本文介绍了一种快速提取线虫DNA的方法。通过比较细菌专用DNA试剂盒提取法、质粒试剂盒提取法和CTAB法,发现利用质粒提取试剂盒,改良提取步骤,可以快速的提取质量较好的线虫DNA,r DNAITS区域序列扩增可有效扩增出目的基因,该方法可以直接用于线虫基因获取试验。     

大豆幼苗根和叶片原生质的分离与纯化

研究了大豆幼苗根和叶片原生质体的分离、纯化方法及其影响因素.结果表明:适宜大豆根和叶片原生质体分离的酶种类、浓度分别为CPW-13M{CPW(细胞清洗液)+13%(W/V)甘露醇}+3%纤维素酶(cellulose R10)+1.1%果胶酶(macerozyme R-10)+1.0%半纤维素酶(hemicellulase)和0.15%CaCl2·2H2O+9%甘露醇+1%cellulase R-10+0.20%pectolase Y-23,pH 5.8,酶解温度为28℃.在根酶解时间为16 h时,原生质体产量可高达1.46×105个·g-1FW,活力达57.8%;叶片酶解时间为4 h时,原生质体产量可高达1.74×106个·g-1FW,活力达70.3%.对于根而言,从产量和活力两方面考虑,其原生质体用23%蔗糖和CPW-18M混合后的下沉法纯化效果较好,而叶片用25%蔗糖的上浮法纯化效果较好.