灰霉菌(Botrytis cinerea)采后致病性研究

 灰霉菌(Botrytis cinerea)是引起葡萄采后病害的主要病原真菌之一。葡萄灰霉菌可在田间潜伏侵染,采后由健康果实携带进入销售市场,该菌的显著致病症状为果实软腐和脱落。灰霉菌与葡萄的其它采后致病菌,如链格孢菌(Alternaria alternata)、镰刀菌(Fusarium sp.)、芽枝霉(Cladosporium sp.)、青霉菌(Penicillium sp.)、黑曲霉(Aspergillus nigar)和粉红单端孢菌(Trichothecium roseum)相比,不仅表现出明显的潜伏侵染优势,而且具有较强的低温(4℃)条件下的致病优势。4℃低温下灰霉菌在寄主葡萄体外和体内分泌多聚半乳糖醛酸酶(PG)活力均显著高于以上各菌,而在25℃下无显著差异,这一结果与该2种温度下灰霉菌接种果实后的症状表现一致。     

淡紫紫孢菌防治采后番茄果实灰霉病

本文通过孢子萌发检测、平板生长抑制法和果实病害防治试验,测定了淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinus PL36-1防治储藏期番茄果实灰霉病的效果。结果表明,菌株PL36-1发酵滤液不仅能够抑制灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长,而且可以抑制灰葡萄孢菌丝生长。对峙培养的菌株PL36-1显著抑制灰葡萄孢的菌丝生长,菌丝生长抑制率可达到74.45%,菌株PL36-1产生的挥发性物质也对灰葡萄孢菌丝生长有一定的抑制作用。菌株PL36-1发酵液处理樱桃番茄果实后,能有效控制番茄果实灰霉病的发生,含有2×10~8孢子/m L的发酵液10 d的防治效果达70.64%。     

串珠镰刀菌细胞壁多糖激活寄生菌纤细齿梗孢的孢子萌发

 利用碱抽提法从串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)菌丝细胞壁得到多糖粗提物。该多糖提取物可以激活寄生于串珠镰刀菌上的活体寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)的孢子萌发,多糖浓度为0.2 mg/m L时,萌发率达80.5%。纤细齿梗孢的孢子仅在存在该多糖提取物的条件下才能萌发,在马铃薯-葡萄糖或葡萄糖-酵母液体培养基上不能萌发,一些糖、氨基酸、无机盐、维生素不能促使其萌发,光也不影响萌发。纤细齿梗孢孢子萌发最适p H是7.0,最适温度25℃。结果表明,串珠镰刀菌菌丝细胞壁多糖可能在激活纤细齿梗孢孢子萌发中起重要作用。     

丁香精油及其与壳聚糖复合物对水果采后病原菌的抑制作用

研究了丁香精油以及丁香精油-壳聚糖复合物对几种水果采后腐烂的主要致病真菌灰霉菌、链格孢,青霉菌、浆孢菌的孢子萌发和菌丝生长的抑制效应,确定其最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果表明,丁香精油对供试病原菌均有较强的抑制效果,10μL/mL丁香油对4种菌菌丝生长和孢子萌发的抑制率达到85%以上。丁香油-壳聚糖复合物溶液在10μL/mL时(含丁香油有效成分5μL/mL)对4种菌菌丝生长和孢子萌发的抑制率在80%以上,而5μL/mL丁香油对其菌丝生长和孢子萌发的抑制率大都在80%以下,复合物的抑菌效应比含有相同有效浓度的丁香精油抑菌效应有明显提高。     

ABC转运蛋白BcAtm1参与灰葡萄孢分生孢子萌发及对寄主植物的侵染

 灰葡萄孢 (Botrytis cinerea)引起的灰霉病可在200多种植物上发生,每年造成全世界高达近千亿美元的损失。Atm1是一种在真核生物中进化保守的线粒体内膜ABC转运蛋白,主要通过向细胞质转运Fe/S簇参与维持细胞的正常生命活动,但Atm1在病原菌致病过程中的作用至今仍不清楚。本研究筛选到一株灰葡萄孢ATM1被T-DNA标记的致病缺陷突变体,并在野生型中对该基因实施了敲除。表型分析发现,突变体ΔBcatm1的分生孢子萌发缓慢且不同步,培养4 h的萌发率只有10%(野生型超过90%),直到12 h,萌发率才接近90%;突变体菌丝生长速度减慢,只能达到野生型水平的67%;菜豆成熟叶片离体接种实验显示,突变体ΔBcatm1基本丧失了致病能力,侵入寄主后只能在接种点附近引发微小的病斑,病斑面积只能达到野生型的10%左右。将完整的BcATM1基因重新导入突变体ΔBcatm1可以完全或部分恢复上述异常表型。本研究结果表明BcATM1是一个关键的致病相关基因,参与了灰葡萄孢分生孢子的萌发、菌丝生长及侵染寄主等过程。     

辽细辛提取物对灰葡萄孢菌的抑制效果

采用生长速率法和孢子萌发法测定了辽细辛根的不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇)粗提取物和精油对引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌菌丝生长和孢子萌发的作用。结果表明,细辛不同溶剂提取物和精油对灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有一定的抑制作用,且对孢子萌发的抑制效果好于对其菌丝生长的抑制效果;石油醚提取物和精油的抑菌效果较好,对菌丝生长的EC₅₀分别为177.44 mg/L和159.98 mg/L,对孢子萌发的EC₅₀分别为173.23 mg/L和125.29 mg/L;试验还显示细辛所含的主要抑菌活性成分易被极性小的有机溶剂所提取。     

樱桃灰霉病菌LFD-RPA快速检测方法的建立

 灰霉病是樱桃的主要病害,由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)侵染所致。该病菌可为害樱桃的花、叶、果实等多个部位,尤其在樱桃生长中后期及贮藏期发病率极高,危害严重。依据樱桃灰霉病菌内转录间隔区(ITS)序列设计引物,建立了樱桃灰霉病菌的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条(LFD-RPA)检测方法。结果表明,该方法检测条件为37℃扩增30 min,能特异性地检测灰葡萄孢,灵敏度为100 fg·μL^-1,略低于常规PCR(10 fg·μL^-1)和荧光定量PCR(7.43 fg·μL^-1);检测方法用时短,PRA扩增仅需30 min,LFD检测仅需10 min。本研究建立的快速检测方法可用于樱桃灰霉病菌的实时监测及病害的田间快速诊断。     

农药对虫生真菌粉虱座壳孢孢子萌发和菌丝生长的影响

虫生真菌粉虱座壳孢Aschersonia aleyrodis是大有前途的粉虱和介壳虫杀虫剂。用6种大田常用农药在推荐浓度下，研究其在25℃下对座壳孢菌孢子萌发和菌丝生长的影响，发现甲氰菊酯和克螨特抑制其孢子萌发和菌丝生长，表明二者与本菌极不相容。吡虫啉、水胺硫磷和双甲脒能促进孢子萌发且后两者亦可加速菌丝生长，多菌灵对其孢子萌发起暂时促进作用然而抑制其菌丝生长。     

核盘菌重寄生菌链孢粘帚霉HL-1-1菌株的生物学特性研究

 对植物真菌病害优良生防菌株链孢粘帚霉(Gliocladium catenulatum) HL-1-1的生物学特性进行了研究。结果表明,以核盘菌菌核粉为唯一碳源的培养基最适合HL-1-1的菌丝生长,PDA最适合产孢;蔗糖作为碳源、硝酸钾作为氮源、2530℃、pH值5及黑暗等条件适合HL-1-1的菌丝生长;可溶性淀粉作为碳源、牛肉膏作为氮源、25℃、pH值6及光照等条件适合产孢;菌核浸出液对HL-1-1的分生孢子萌发有促进作用,葡萄糖对分生孢子萌发有抑制作用;2530℃及黑暗条件适合孢子萌发,温度低于5℃或高于40℃,孢子不能萌发;孢子致死温度为52℃。     

环境因素对芸苔链格孢生长发育的影响

研究结果表明,芸苔链格孢(Alternaria brassicae)在0—35℃下均可萌发,最适温度15—20℃。菌丝在0—30℃下均能生长,最适温度20—25℃;孢子及菌丝的致死温度为50℃,10分钟。该菌对湿度要求较严格,相对湿度在90％以上时孢子才能萌发,最适相对湿度为98％;病菌在相对湿度达93％时可以侵染,98％以上最适。脱落后孢子曝露在室内(相对湿度约63％)经1小时萌发率下降32.4％,4小时下降80％。耐旱能力较差。一般情况下紫外光能促进该菌产孢,但是对某些菌系的促进作用不明显。过长的紫外光照射对该菌产孢不利,照射160分钟孢子萌发率下降近80％。麦芽糖、蔗糖为该菌的最佳碳源;硝态氮、有机氮是该菌的良好氮源。pH值为4—6时有利于分生孢子萌发,强酸、强碱对分生孢子萌发有抑制作用。     

Effects of low temperature on mycelial growth and spore germination of Botrytis allii in culture and on its pathogenicity to stored garlic bulbs

Botrytis allii was incubated at 20, 10,4, 2,0, – 2 and –4° to investigate effects of temperature on growth, sporulation and germination on potato dextrose agar (PDA), and to estimate incidence and severity of disease on garlic bulbs inoculated with the pathogen during storage. B. allii-was capable of growing to a colony diameter of 17 mm after 20 weeks, sporulating and germinating on PDA at temperature as low as – 4°C. After 12 weeks at –4 and -2°C the mycelial growth was observed only on 45–54% of bulbs wound-inoculated with conidial suspension, and infection was limited to 5 mm in diameter on the surface of inoculation sites without producing any symptoms of the disease. Temperature responses were similar for mycelial growth, conidial germination and infection, but mycelial growth and sporulation was slower and later on garlic bulbs than in culture. Wounds were readily colonized by B. allii. No disease was found on unwounded bulbs that were inoculated with conidial suspensions and with mycelial plugs at various temperatures. Only 16–95% of cloves became infected by contact with other cloves within the same bulb after 12 weeks of storage at temperatures of 4–20 C.     

荔枝炭疽病菌生物学特性的研究

 本文主要研究了温度、湿度、pH值、光照、营养对荔枝炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)生长、产孢和孢子萌发的影响。该菌菌丝生长的温度范围为8~38℃,最适28℃;产生分生孢子的温度范围为12~36℃,最适28~32℃;分生孢子萌发的温度范围为8~38℃,最适28~32℃。在pH 3~10的范围内该菌均能生长和产孢,菌丝生长最适pH 5~6;产生分生孢子最适pH3~4,分生孢子萌发最适pH 6~7。分生孢子在饱和湿度或水滴中萌发快,相对湿度低于85%时不能萌发。光照处理对该菌生长发育无显著性影响。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖对分生孢子萌发有促进作用。分生孢子的致死温度为50℃ 10 min,菌丝体的致死温度为60℃ 30 min。     

烟草米根霉对6种杀菌剂的敏感性及菌株保存条件筛选

采用孢子萌发法测定了烟草上米根霉Rhizopus oryzae对6种杀菌剂 (代森锰锌、多菌灵、嘧霉胺、嘧菌酯、啶酰菌胺及氟啶胺) 的敏感性,并就其适宜的保存条件进行了筛选,同时采用离体叶片法测定了上述6种杀菌剂对烟叶霉烂病的防治效果。结果表明:6种杀菌剂对米根霉孢子萌发和烟叶霉烂病均表现出了不同的抑制活性。其中,抑制孢子萌发活性最为明显的是氟啶胺和啶酰菌胺,其EC₉₀值分别为0.67 和1.53 mg/L;其次为代森锰锌和嘧菌酯,15.16和17.66 mg/L;最弱为嘧霉胺和多菌灵,71.87和81.96 mg/L。对烟叶霉烂病防效最好的为嘧菌酯,50 mg/L处理的防效为85%;其次为啶酰菌胺,200 mg/L处理时防效为83%;氟啶胺的防效较差,1 000 mg/L处理时仅为48%;而代森锰锌、多菌灵和嘧霉胺在最高使用剂量 (分别为4 000、800和800 mg/L) 时防效均低于20%。病原菌保存方法筛选结果表明,保存后米根霉的孢子萌发率均发生了不同程度降低。其中,4 ℃保存于20%甘油组的孢子悬浮液萌发率为60%;4 ℃保存的孢子干样萌发率为36%;4 ℃保存的孢子悬浮液和 –20 ℃保存于20%甘油的孢子悬浮液萌发率均低于20%;20 ℃保存的孢子干样萌发率为11%;–20 ℃保存的孢子悬浮液萌发率为6%。研究结果可为烘烤期烟叶霉烂病防治和米根霉孢子的保存提供参考依据。     

芒果疮痂病菌生物学特性研究

 本文主要研究了温度、pH、光照、维生素对芒果疮痂病菌(Sphaceloma mangiferae Bit.&Jenk.)孢子萌发、营养生长及孢子形成的影响,在14种半固体、固体培养基上对产孢量作了比较,还对湿度和营养对孢子萌发的影响做了试验。湿病原菌分生孢子萌发的温度范围为12℃~37℃,最适28℃;pH值范围为3~9,最佳pH 5;以自由水或饱和湿度条件下萌发率最高;连续黑光灯光照促进萌发;1%的葡萄糖液在28℃或33℃下明显增加了萌发率。该菌营养生长的温度范围为4℃~37℃,22℃~33℃生长良好,最适为28℃,与Bitancourt的报道基本相似;pH值范围为2~11,最佳为pH 5;黑光灯连续光照有利生长,VB₂、VB₆及V A对生长均有促进作用,在试验的培养基中PDA是生长最好的。该菌孢子形成的温度范围为12℃~33℃,最适温度为28℃;pH值范围为5~9,最佳为pH 7;光暗12 h交替处理比连续光照更利于产孢;VB₁及VA可促进产孢,但只有VA (50μg/L)既促进生长,又促进产孢;所试验的培养基中以PDA₊牛肉浸膏及PDA的产孢量最多,胡萝卜块是固体培养基中较理想的。     

辣椒褐斑病菌生物学特性研究

本文对辣椒褐斑病病原菌Cercospora capsici Heald et Wolf的生物学特性进行了研究,结果表明,不同的营养、温度、pH等条件对菌丝生长和孢子萌发有显著影响。病菌菌丝的生长以PDA培养基为最适;适宜温度为20~25℃,最适温度为25℃;最适pH为8.0~9.0,光照对菌丝生长没有明显的促进作用,菌丝致死温度及时间为55℃ 10 min。分生孢子萌发适宜碳源为1%的蔗糖溶液,适宜氮源为1%的甘氨酸溶液;孢子萌发适宜温度为20~30℃,最适温度25℃;最适pH为5~6,光照对孢子萌发没有明显的促进作用,分生孢子致死温度及时间为52℃10 min。     

Control of postharvest Botrytis fruit rot of strawberry by volatile organic compounds of Candida intermedia

A study was conducted to identify volatile organic compounds or volatiles produced by Candida intermedia strain C410 using gas chromatography-mass spectrometry, and to determine efficacy of the volatiles of C. intermedia in suppression of conidial germination and mycelial growth of Botrytis cinerea and control of Botrytis fruit rot of strawberry. Results showed that, among 49 volatiles (esters, alcohols, alkenes, alkanes, alkynes, organic acids, ketones, and aldehydes) identified from C. intermedia cultures on yeast extract peptone dextrose agar, two compounds, 1,3,5,7-cyclooctatetraene and 3-methyl-1-butanol, were the most abundant. Synthetic chemicals of 1,3,5,7-cyclooctatetraene; 3-methyl-1-butanol; 2-nonanone; pentanoic acid, 4-methyl-, ethyl ester; 3-methyl-1-butanol, acetate; acetic acid, pentyl ester; and hexanoic acid, ethyl ester were highly inhibitory to conidial germination and mycelial growth of B. cinerea. Inhibition of conidial germination and mycelial growth of B. cinerea by volatiles of C. intermedia was also observed. Meanwhile, results showed that incidence and severity of Botrytis fruit rot of strawberry was significantly (P < 0.01) reduced by exposure of the strawberry fruit to the volatiles from C. intermedia cultures or C. intermedia-infested strawberry fruit. These results suggest that the volatiles of C. intermedia C410 are promising biofumigants for control of Botrytis fruit rot of strawberry.     

温度对绿僵菌LA菌株孢子萌发、酶活力及毒力的影响

为明确温度对绿僵菌LA菌株生物学特性和毒力的影响,采用微室萌发、酶标仪测定A值以及体外涂抹法,对不同温度下LA菌株孢子萌发率、胞外蛋白酶、几丁质酶活力以及对东亚飞蝗的毒力进行了测定,结果表明:LA菌株在30℃下孢子萌发速率最快,对东亚飞蝗的致死速率也最快;38℃下培养,孢子萌发率开始受到限制,40℃下培养孢子的萌发率接近于0;高温处理转至适温培养,对孢子萌发速率产生一定影响,48℃下处理不同时间,孢子萌发速率、萌发率均显著降低,转至30℃下培养24h仅有10.6%～20.9%的孢子可萌发;LA胞外蛋白酶活力培养至第6天达到最高,为31.37U/mL,不同温度下活力测定表明37℃下胞外蛋白酶活力最高,几丁质酶在培养至第5天酶活力达到最高,为34.62U/mL,最高酶活温度为50℃。     

布朗李叶枯病菌生物学特性研究

对布朗李叶枯病菌(Macrophoma kawatsukai Hara)生物学特性研究表明,该菌最适生长和产孢的培养基为布朗李果汁。菌丝生长和产孢的最佳碳源分别为蔗糖、麦芽糖和果糖;氮源分别为酪氨酸、谷氨酰胺、天门冬酰胺和半胱氨酸。菌丝生长最适温度25℃,最适pH5～7;分生孢子形成最适温度25～30℃,最适pH8,饱和湿度有利于产孢,阳光照射形成分生孢子器最多,紫外光照射对分生孢子器形成有一定的抑制作用。孢子萌发最适温度为20～30℃,最适pH6～9,相对湿度为90%～100%,以在水滴中萌发最好。布朗李杆煎汁和布朗李果汁对孢子萌发有促进作用。     

8种杀菌剂对核桃炭疽病病原菌胶孢炭疽菌的室内毒力

由胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起的核桃炭疽病是目前危害山东省核桃生产的主要病害。为筛选防治该病害的高效药剂,在确定了最适菌丝生长和分生孢子萌发温度的基础上,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,测定了8种常用杀菌剂对胶孢炭疽菌的毒力,评估了温度对咪鲜胺和戊唑醇毒力的影响,检测了17个胶孢炭疽菌菌株对咪鲜胺和戊唑醇的敏感性,同时评价了这2种杀菌剂的预防和治疗作用。结果显示:在胶孢炭疽菌菌丝生长和孢子萌发的最适温度28℃下,供试8种杀菌剂中,咪鲜胺、戊唑醇和三唑酮对供试菌株菌丝生长的抑制作用最强,平均EC50值分别为0.07、1.45和3.04 mg/L;异菌脲、代森锰锌和咪鲜胺对分生孢子萌发的抑制作用最强,平均EC50值分别为21.07、25.14和25.18 mg/L。咪鲜胺对菌丝生长的抑制作用受温度影响较小,而戊唑醇对菌丝生长的抑制作用随温度降低而增强;供试17个菌株对咪鲜胺和戊唑醇均有较高敏感性,平均EC50值分别为0.08 和 1.03 mg/L。建议在核桃炭疽病发病的不同时期,轮换使用咪鲜胺、戊唑醇、三唑酮、异菌脲和代森锰锌等杀菌剂,以有效控制该病害。     

橡胶树棒孢霉落叶病病原菌的生物学特性

通过对橡胶多主棒孢进行生物学特性研究,结果表明:菌丝生长的适宜温度范围为25～30℃,最适温度为30℃;最适pH范围为4～8;菌丝在以麦芽糖为碳源和以KNO3为氮源的培养基上生长最好。分生孢子萌发的适宜温度范围为20～35℃,最适温度为25℃;水滴是孢子萌发的必要条件;在不同的pH条件下分生孢子萌发无明显差异;分生孢子在果糖中萌发率最低。