水牛活体采卵体外生产胚胎技术

本研究应用B超引导阴道穿刺法,对40头尼里-拉菲和摩拉水牛连续3次采卵,采卵间隔为3 d.共采卵120头次.共穿刺卵泡935个,采集卵母细胞643枚,可用卵母细胞为456枚,卵母细胞回收率为68.77%(643/935),卵母细胞可用率为70.92%(456/643),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细胞单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵,并利用卵母细胞进行体外受精生产胚胎是可行的. 3),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细 单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵     

采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响

为探讨采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响,本研究选自2006-2008年78批次的626头牛活体采卵收集3143枚卵母细胞数据和同一操作者的51批次共培养1366枚卵母细胞的体外受精生产胚胎数据,并根据水牛繁殖特点和发情规律,每年分为3个阶段,即春季(1～4月),夏季(5～7月)和秋冬季(8～12)3个季节进行统计分析。结果发现,水牛活体采卵和体外受精效果受季节影响较大。在秋冬季进行活采时,平均头次获卵母细胞总数和可用卵母细胞数分别为(5.88±2.84)枚和(3.56±1.51)枚,平均头次卵母细胞总数明显高于夏季的(3.72±1.58)枚(P<0.01),但与春季的(4.80±1.77)枚差异不显著(P>0.05),而头均可用卵母细胞数则高于春季的(2.77±1.19)枚(P<0.05)和夏季的(2.11±1.11)枚(P<0.01);季节之间卵母细胞可用率没有差异(P>0.05);虽然每个季节活体采卵体外受精卵分裂率没有差异(P>0,05),但在秋冬季采卵时,其囊胚率(27.09%)则明显高于春季(20.95%)和夏季(20.45%),P<0.05,而春季和夏季之间没有差异(P>0.05)。研究表明:一年四季都可以进行水牛活体采卵体外生产胚胎,但从采卵效果和胚胎生产效率上看,在秋冬季进行活体采卵效果最好。     

水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育的研究

本研究比较了不同来源的水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育。对10头摩拉母水牛连续6周进行活体采卵,共采集292枚卵母细胞,头均回收卵母细胞4.87枚,头均A级卵数为3.07枚,从屠宰场收集74头水牛卵巢共采集559枚卵母细胞,头均回收卵母细胞和A级卵母细胞分别为7.55枚和5.20枚,均显著高于活体采集的水牛卵母细胞(P<0.01)。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、体外受精和体外培养至囊胚。结果表明,活体采卵组和屠宰水牛卵母细胞组受精分裂率差异不显著,分别为54.81%和57.73%。屠宰水牛卵母细胞组的囊胚率则高于活体采卵组(28.78%vs21.34%,P<0.05)。利用两组的胚胎进行常规法冷冻保存,冻胚解冻后的存活率差异不显著(P>0.05)。     

用B型超声波导引活体采集奶水牛的卵母细胞

本试验利用B型超声波导引活体采集42头奶水牛的卵母细胞,每头牛每周采卵2次,共采卵96次,卵母细胞回收率67%,可用卵母细胞数平均为3.1,成熟培养的囊胚率平均为24.7%.对水牛的卵巢观察结果表明活采对水牛的健康及生殖机能不产生影响.     

牛有腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究

试验从屠宰场收集了 4 8头青年黄牛、34头青年水牛的卵巢共 16 4个 ,共回收可用卵母细胞 86 4枚。水牛平均每个卵巢可回收 3.2 2枚可用卵母细胞 ,相当于黄牛 (6 .72枚 )的一半。试验结果表明 :水牛卵巢生长卵泡少 ,卵母细胞产量少、质量差 ;3种采集黄牛卵泡卵母细胞的方法 ,用抽吸加切割法平均从每个卵巢回收的可用卵数 (7.71枚 )都极显著高于抽吸法 (6 .19枚 )和切割法 (6 .4 4枚 ) (P <0 .0 1) ,但是该法手续繁杂 ,适于一次且只能收集少量卵巢时使用 ;在黄牛和水牛卵母细胞成熟培养液中用 0 .3%PVP代替 10 %FBS ,牛卵母细胞的体外成熟率无显著差异 (P >0 .0 5 )。     

影响水牛活体采卵效果的因素研究

为探讨不同采卵季节、供体牛年龄和连续采卵时间3个因素对水牛活体采卵效果的影响,本实验选择3～12岁、体重400～700 kg的尼里拉菲水牛52头（其中3～7岁40头、8～12岁12头）,根据单因子完全随机试验设计进行分组,分别观察不同采卵季节、供体牛年龄、连续采卵3个月以下（包含3个月）和3～9个月时间对活体采卵效果的影响。结果表明：冬季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均高于春季（P<0.05）和夏季（P<0.01）,且夏季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均低于其他季节（P<0.01）;3～7岁牛的头均可用卵母细胞数比8～12岁牛的多1.78枚（P<0.05）;活体连续采卵时间在3个月以下（包含3个月）的卵母细胞可用率比连续采卵3～9个月的多8.03(P<0.01)。可见,一年四季都可进行水牛活体采卵,但秋、冬季进行活体采卵较为适宜;3～7岁年龄段牛做供体的活体采卵效果更佳;卵母细胞可用率会随着连续采卵时间延长而明显下降,建议同一批牛连续采卵不超3个月。     

牛活体采集卵母细胞技术的研究

本研究利用自制采卵器对 2 4头健康牛和 2 0头有生殖障碍牛进行活体采集卵巢卵母细胞试验。卵母细胞回收率 4 2 .9% ,共采集卵母细胞 397枚 ,其中可用卵 2 6 6枚 ,占 6 6 .7% ,平均每头母牛获卵母细胞和可用卵母细胞数分别为 9.0 2枚和 6 .0 4枚。采集的卵母细胞经体外受精和体外培养 ,移植受体母牛 ,成功地分娩了我国第一头活体采卵牛犊     

牛活体卵母细胞的采取及早期受精卵获得技术的研究

从牛活体卵母细胞的采集方法、体外成熟培养、体外受精及早期胚胎发育培养等方面进行研究。结果表明 :(1 )供试奶牛前后两次采卵的最短间隔为 6d,采集回收卵子数最多为 2 2枚和2 1枚 ,最少为 3枚和 5枚 ;(2 ) 2头供试奶牛采集回收卵子平均为 1 0 .72± 1 1 .6枚 /次和 1 0 .5± 7.5枚 /次 ,A、B级卵子比例分别为 70 .34% (83/ 1 1 8)和 61 .88% (1 38/ 2 2 3)。(3)受精后 48h观察卵裂结果 ,分别为 45.76%和 32 .38% ,囊胚发育率分别为 2 9.66%和 2 0 .95%。     

水牛分离精子与不同来源卵母细胞体外受精的效果研究

本研究的目的是探讨水牛分离精子与不同来源(活体采卵或屠宰场卵巢采卵)卵母细胞体外受精的效果。活体采卵是选用20头空怀河流型母水牛(其中摩拉母牛12头,尼里-拉菲母水牛8头)每间隔3 d采卵1次,连续采卵5~6周,活体采集卵母细胞;屠宰场卵巢采卵是收集屠宰场水牛卵巢,用10 mL注射器连接18 G针头吸取水牛卵巢上可视的卵泡来收集卵母细胞。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、然后用分离或未分离精子进行体外受精以及体外培养至囊胚。结果发现:活体采卵组和屠宰场收集的水牛卵母细胞组用分离精子受精分裂率和囊胚率没有差异(P>0.05);分离精子和未分离精子的体外受精分裂率和囊胚率也没有差异(P>0.05)。由此说明,水牛分离精子可以用于体外生产性控胚胎。     

促卵泡素诱导羔山羊卵泡发育及活体采卵研究

对8只131￣150日龄山羊采用5 mg FSH诱导卵泡发育后,采用手术法间隔7 d进行采卵,第1￣4次诱导卵泡发育的可用卵泡数分别为(20.1±5.6)、(15.5±3.2)、(9.3±3.7)、(8.7±2.5)个,回收可用卵母细胞数分别为(11.1±3.2)、(8.3±1.8)、(6.6±3.7)、(6.0±1.7)枚,随采卵次数增加,每只羊的可用卵泡数呈下降趋势;不同采卵次间卵泡直径、回收卵母细胞的可用率无显著性差异。26次采卵抽吸卵泡376个(14.5个/只.次),回收COCS279枚(10.7枚/只.次),回收可用COCS 219枚,每只羊每次采卵获可用卵8.4枚,卵母细胞回收率和可用率分别为74.2%和78.5%;不同个体间回收率和可用率无显著性差异。     

奶牛活体采卵及体外生产胚胎技术研究

采用盲吸法对17头空怀奶牛和25头青年奶牛进行活体采卵,采集卵母细胞199枚,平均每头采得卵母细胞4.74枚,其中,可用卵母细胞139枚,平均每头获可用卵母细胞3.3枚,经体外系统培养,获受精卵101枚,发育至桑葚胚和囊胚期阶段35枚,受精率和胚胎发育率分别为72.66%和25.17%.选择11枚胚胎移植黄牛受体11头,妊娠4头,妊娠率为36.36%,正常产犊4头.     

促卵泡素对摩拉水牛超数排卵的试验初报

用20毫克促卵泡素（FSH）对河流型乳用水牛进行超数排卵，采用递减法连续注射4天（8次），可达到超排效果，共处理3头牛，其中屠宰1头经卵巢计数排卵14枚，闭锁卵泡2枚；直肠检查2头平均排卵5．15枚，闭锁卵泡2枚。在采用卵方法上，外科手术冲洗输卵管1头，共回收卵子2枚；非外科手术采卵2头，1头回收未受精卵子5枚，另一头回收32细胞胚胎2枚。     

成年奶牛与青年奶牛活体采卵效果分析

采用盲吸法对17头空怀奶牛和25头青年奶牛进行活体采卵,采集卵母细胞199枚,平均每头采得卵母细胞4.74枚,其中,可用卵母细胞139枚,平均每头获可用卵母细胞3.3枚,经体外系统培养,获受精卵101枚,发育至桑葚胚和囊胚期阶段35枚,受精率和胚胎发育率分别为72.66%和25.17%。     

不同季节水牛卵母细胞体外受精效果的研究

利用屠宰场收集水牛卵巢回收卵母细胞，比较了不同季节的水牛卵母细胞体外受精的效果。试验连续进行了2年，按水牛发情的规律，1年的试验数据分3个阶段统计。结果表明，水牛发情旺季（8~11月）平均每个水牛卵巢回收可用卵母细胞3.66枚，明显高于发情淡季的4~7月和12月~次年3月两个季节（分别为2.76和3.07枚，P＜0.01）；而在不同季节回收的水牛卵母细胞体外受精后分裂率和囊胚率差异不显著（P＞0.05）。     

血清对水牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎发育的影响

从屠宰场收集了本地水牛55头、黑白花奶牛22头的卵巢共获卵泡847枚,平均每个水牛卵巢回收3.67枚可用卵母细胞,约为黑白花奶牛(10.23枚/头)的1/3。试验分别采用添加与不添加血清的培养液体外成熟培养水牛卵母细胞,结果二者的成熟率无明显毒性差异(58.23%对56.67%),但体外受精后早期胚胎发育的8-细胞率有显著差异(35.4%对23.0%),表明体外成熟液中有无血清对水牛卵母细胞体外成熟率没有影响,但血清对卵母细胞的早期胚胎发育有重要影响。进一步比较成熟液中不添加血清但在受精液及胚胎液中添加血清和在各个阶段均有血清参与的早期胚胎发育率(8-细胞率),表明二者差异不显著(33.8%对35.4%)。经无血清成熟培养液培养的成熟卵母细胞可以经孤雌激活后得到早期胚胎(4细胞)。     

黄牛利用活体采卵的应用研究

应用活体采卵仪对两组黄牛进行活体采卵.对黄牛每周2次和每周1次进行活体采卵,平均获卵分别为5.30枚、4.75枚,两者比较差异不显著(P>0.05);回收率分别为64.92%和81.85%,每周1次采卵回收率显著高于每周2次(P<0.05);优质卵母细胞率分别为80.12%和65.79%(P<0.01).健康和非健康牛只采卵,平均获卵母细胞数分别为6.71枚、5.10枚(P<0.05);回收率分别为65.28%、62.20%,无明显差异(P>0.05);优质卵母细胞率分别为79.91%、73.37%,差异不显著(P>0.05).     

雪龙黑牛活体采卵与屠宰采卵在体外受精技术中的应用研究

利用超声波活体采卵技术(ovum pick-up,OPU)对12头纯种雪龙黑牛间隔4d采卵2次,对51头F2代遗传性能优秀的雪龙黑牛每周采卵1次,并对活体采卵与屠宰采卵及体外受精后胚胎的发育进行了对比分析.结果表明,活体采卵第2次卵泡数比第1次多82个,而获得的卵母细胞数第2次比第1次少1 2枚;屠宰采卵优秀卵母细胞率高于活体采卵,并且囊胚发育率高于活体采卵.     

娟姗青年母牛超数排卵及冻胚移植效果试验报告

2005年3月至7月,在广西地区选择25头娟姗母牛作为供体,用不同厂家、不同剂量的促排卵激素进行超排和重复超排,观察了超排及重复超排效果.结果25头供体共采卵46头次,排卵数502枚,回收到278枚胚胎,采卵率为55.4%,获得207枚可用胚胎,平均4.5枚/头次,可用胚率为74.5%;与此同时在2005年4月至2006年1月,开展了娟姗牛冷冻胚胎的移植工作,对185头本地黄母牛和杂交母牛进行了同期发情处理,结果共有166头发情,其中113头可移植,同期发情率为89.7%,可移植率为61.1%.113头可移植牛移植2个月后,经妊娠检查共有47头怀孕,移植妊娠率为41.6%.     

连续活体采卵对水牛卵母质量的影响

本研究旨在探讨连续活体采卵(OPU)对水牛卵母细胞质量的影响,为建立高效的水牛胚胎体外培养体系奠定基础。实验选择4～12岁、体重580～700 kg的92头水牛(摩拉27头、尼里-拉菲30头、杂交水牛35头),每隔3d进行1次OPU,连续5次OPU。供体不用激素处理,收集的卵母细胞分为A、B、C和D级,计算各级卵母细胞百分率、优质卵母细胞百分率、卵母细胞回收率。结果表明:连续5次OPU时,卵母细胞回收率分别为65.91%、48.16%、43.54%、50.77%和47.31%,第1次OPU时卵母细胞回收率显著高于第2～5次,而第2、3、4、5次之间差异不显著;优质卵母细胞(A+B级)在第1～2次OPU的百分率比第3、4、5次效果差(P0.05);C级卵母细胞在第1次OPU时的百分率与第2、3、4、5次差异极显著;尼里-拉菲水牛第1次OPU时,C级卵母细胞百分率显著高于与第2、3、4、5次;第1次OPU时的优质卵母细胞百分率显著低于第2、3、5次;摩拉水牛第1次OPU时,C级卵母细胞百分率显著高于第2～5次,第1次卵母细胞百分率显著高于第2～5次,第1次的优质卵母细胞百分率显著低于第4、5次OPU;杂交水牛第1次OPU时的卵母细胞百分率显著高于第2～5次。综上,杂交水牛的优质卵母细胞百分率比尼里-拉菲和摩拉水牛好,并且效果相对稳定。     

水牛卵母细胞体外受精与早期胚胎发育的研究

本实验通过 3种水牛卵母细胞体外成熟培养系统的比较 ,与早期胚胎发育研究结果表明 ,3组是最好的培养系统 ,卵母细胞成熟率为 5 1.9% (2 8 5 4 ) ;卵裂率为 5 2 .76 %± 9.0 8% (193 35 9) ;囊胚率 (占授精卵数 )为 2 7.2 2 %± 9.17% (10 1 35 9)、(占分裂卵数 )为 5 2 .13%± 16 .32 % (10 1 193) ;孵化囊胚率为 83.34%± 11.5 6 % (85 10 1)。该系统为含 10 %FBS的TCM - 199液中添加促性腺激素FSH、LH ,类固醇激素E2 ,表皮生长因子 (EGF)和硫醇类化合物β—巯基乙醇 (β—ME)的较完善系统。据 39批次早期胚胎体外发育至囊胚 (343枚 )所需时间 (以授精当日为 0d计算 )分析 ,5d囊胚 2枚 (0 .6 % ) ;6d囊胚 89枚 (2 5 .9% ) ;7d囊胚14 9枚 (43.4 % ) ;8d囊胚 73枚 (2 1.3% ) ;9d囊胚 2 5枚 (7.3% ) ;10d囊胚 5枚 (1.5 % )。2头经超数排卵处理的母水牛 ,授精后第5d非手术回收 3枚囊胚 ,说明受精卵在体外发育速度比在体内发育慢 ,推测试管水牛胚胎移植的适宜时间 ,应是受体母牛站立发情后第 4～ 6d