马骨硷性磷酸酶的提纯和性质的研究

用正丁醇抽提、DEAE纤维素(DE—52)和Con.A—Sepharose 4B柱层析等方法从马骨中分离提取硷性磷酸酶(ALP)同工酶。提纯倍数为24倍。从DE—52柱层析中得到两个有部分交叠的酶活性峰。经等电聚焦电泳鉴别其pI值分别为4.22(酶峰Ⅰ)和4.18(酶峰Ⅱ)。两酶峰的热稳定性较差,于56℃作用10min,活性降低60％以上。作用于磷酸苯二钠的km值分别为25mM(酶峰Ⅰ)和6.67mM(酶峰Ⅱ)。尿素对酶活性的影响随着浓度的增高而加强,3M尿素对酶峰Ⅰ抑制达86％,对酶峰Ⅱ达71％。一定浓度的Mg~(2+)对酶有显著激活作用。Zn~(2+),Ca~(2+)激活不明显,高浓度时却有抑制作用。两峰对Ca~(2+)浓度变化有明显的不同反应。EDTA对酶抑制作用显著,Zn~(2+)、Ca~(2+)在一定浓度下对此抑制有轻度逆转作用。上述结果表明,马骨ALP至少有两种同工酶成分。它们不同的等电点、热稳定性差及对尿素敏感等特性,为临床检测马血清中的骨ALP提供了实验依据。     

乳牛胎盘硷性磷酸酶的提纯和性质

通过正丁醇抽提、硫酸铵沉淀、DE-52离子交换层析和Con.A—Sepharose4B亲和层析,从乳牛胎盘中提取出硷性磷酸酶(ALP)。提纯倍数为109倍,比活为87金氏单位/mg蛋白。乳牛胎盘提取液经薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳只出现1条酶带,pI值4.5;提取的ALP分子量为168000;对热稳定性差,于56℃下作用10min,其活性丧失84％;对磷酸苯二钠的km值为2.1mmol/L;L—苯丙氨酸和L—色氨酸对该酶有抑制作用,10mmol/L—苯丙氨酸使酶活性抑制27％,10mmol/L L—色氨酸使酶活性抑制49％;尿素对该酶的抑制作用随着尿素浓度的增加而逐渐加强,2mol/L尿素可使酶活性抑制87％;左旋咪唑对该酶有较强的抑制作用,10~(-4)mol/L左旋咪唑使酶活性抑制79％;该酶在pH<7的条件下不稳定,在pH7～11范围内较为稳定;最适pH为10.4;妊娠乳牛血清中不含有胎盘来源的ALP同工酶。     

实验性佝偻症对鸡血清、肠、肝、肾、骨中碱性磷酸酶活性的影响

用高磷低钙饲料使幼龄来航母鸡产生佝偻症,结果发现佝偻症鸡血清和骨组织碱性磷酸酶(AKP)活性均极其显著地高于正常鸡;肠、肝和肾中AKP活性与正常鸡无显著差异。 鉴定了四种碱性磷酸酶抑制剂,结果表明30mM L一苯丙氨酸对鸡肠AKP活性抑制70％左右,而对肝、肾、骨AKP的抑制作用很小。30mM L一高精氨酸对鸡骨AKP活性抑制81％左右,而对鸡肠AKP基本不抑制。30mM L一高精氨酸对正常鸡血清AKP抑制19％左右,对佝偻症鸡血清AKP则抑制75％左右,对以上结果进行了讨论.     

鸽肝、肾、骨、小肠碱性磷酸酶同功酶谱及其生物学特征的研究

本文报导了从王杂鸽的肝、肾、骨和小肠等四个脏器中用正丁醇抽提,高速离心,Sephedex G—100凝胶层折及DEAE—纤维素离子交换等方法分离纯化了碱性磷酸酶(AKP),并用聚丙烯酰胺凝胶平板电泳进行了分离鉴定,达到PAGE纯的各脏器AKP同功酶。其中肝AKP同功酶谱有三条带,肾AKP同功酶谱为一条带,骨AKP有二条带,肠AKP有一条带。我们对提纯了的各脏器AKP同功酶进行了生物学特性的研究。1.各脏器AKP R_f值肾>骨>肝>小肠。2.56℃±1作用10分钟、骨AKP保留活性3.8％,肝AKP保留活性13.4％,肠AKP保留活性38.8％,肾AKP保留活性58.4％。3.四个脏器AKP对磷酸苯二钠的Km是:骨Km0.581×10~(-6)M,肝Km0.305×10~(-6)M,肠km0.607×10~(-6)M,肾Km0.436×10~(-6)M。4.L—phe的抑制作用是:小肠AKP>肾AKP>骨AKP。对肝AKP无抑制作用。5.L—Leu,L—Arg,Urea均对小肠有强烈的抑制作用。肝AKP、骨AKP对L—Leu均不敏感,肾AKP对L—Leu稍敏感。肝AKP对Urea的敏感性高于肾AKP、骨AKP。6.EDTA—Na_2对各脏器 AKP均有强烈的抑制作用。故根据上述各种生物学特性可把鸽肝、肾、骨、肠四个脏器AKP同功酶分离开。     

镉对体外培养鸡骨髓基质细胞成骨分化的毒性作用

骨是镉毒性作用的主要靶器官之一,但其对鸡骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)增殖和成骨分化的毒性作用仍不清楚。本研究利用差速贴壁纯化法获得鸡BMSCs,加入不同浓度镉处理不同时间,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定成骨分化,RT-PCR检测成骨相关基因(COL1、OSX、RUNX2、ALP、OCN、OPG、OPN、RANKL)表达变化。结果显示,1~10μmol/L的镉显著促进BMSCs增殖,20μmol/L的镉显著抑制其增殖(P<0.05);5μmol/L以上的镉可显著抑制ALP活性,并以浓度依赖方式极显著抑制成骨相关基因(COL1、OSX、RUNX2、ALP、OCN、OPG、OPN)mRNA表达,上调RANKL mRNA表达(P<0.01)。表明,一定浓度镉可抑制鸡BMSCs体外增殖及其向成骨细胞(OB)的分化。     

黄芪多糖对黄曲霉毒素B_1诱发雏鸡肝损伤的防治研究

为研究黄芪多糖(APS)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发雏鸡肝损伤的防治作用,120只1日龄雏鸡随机分为空白对照组(A)、阳性对照组(B)和APS低、中、高剂量组保护组(C~E组)。B~E组分别在饲料中添加AFB12.8 mg/kg·7 d,C~E组在给予AFB_1的同时,分别在饮水中添加浓度为100 mg/m L、500 mg/m L、1 000 mg/m L的APS,连续给药21 d。各组分别在投药后的7、14、21、28 d取肝脏称重,计算肝指数,心脏采血,检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的活性,白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)和总胆红素(TBIL)的含量,并在7 d时制作肝脏病理切片。结果显示,连续给药7 d,500、1 000 mg/m L APS组有效拮抗AFB_1引起的脂肪变性,肝脏组织结构得到显著恢复,肝指数显著下降。肝功能生化指标ALT、AST、ALP活性,TBIL、ALB、TP含量与空白对照组无显著差异(P0.05)。表明500 mg/m L或1 000 mg/m L APS可拮抗AFB1引起的雏鸡肝损伤,并有较好的防治作用。     

高邮鸭主要血浆生化指标与产蛋性状的相关分析

通过对200日龄产蛋早期的78只高邮鸭血浆总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-淀粉酶(AMY)、总胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和无机磷(P)共11项生化指标进行测定,研究其与产蛋性状的相关性.结果显示TP(58.25±7.83)g/L,ALB(18.16 4.23)g/L,AST(25.83±9.35)U/L,ALT(55.07±36.25)U/L,ALP(332.2±153.1)U/L,LDH(319.46±99.61)U/L,AMY(554.3±168.8)U/L,HDL-C(1.19 0.65)mmol/L,CHO(3.19±0.83)mmol/L,LDL-C(1.72 0.96)mmol/L,P(0.29 0.12)mg/mL;AST活性与开产体重呈强负相关(P＜0.01).     

锶对苜蓿生长和抗氧化酶系统的影响

在1/2浓度Hoagland营养液中添加终浓度至0、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L和40mmol/L的SrCl_2处理2叶1心期苜蓿,待其生长至3叶1心期分析6个处理对苜蓿生长、抗氧化酶(POD、SOD和CAT)活性和同工酶谱的影响。结果表明:SrCl_2处理在低浓度对苜蓿生长有一定促进作用,浓度超过5mmol/L后,苜蓿生长受到抑制。当SrCl_2处理浓度在0~40mmol/L范围内,苜蓿POD、SOD和CAT活性表现为先升高后降低,其中POD和CAT在10mmol/L、SOD在20mmol/L浓度时活性最高。SOD/POD、SOD/CAT和SOD/(POD+CAT)比值先降低后升高,10mmol/L SrCl_2处理比值最小,说明POD和CAT活性在锶胁迫时降低更快,限制了锶胁迫的缓解。锶处理导致POD同工酶谱带减少,20mmol/L SrCl_2可诱导产生2条新的SOD谱带,同时导致SOD-3不表达,10mmol/L SrCl_2诱导1条新的CAT谱带;但随浓度增加,新产生的酶不表达,没有相应谱带。     

家蚕卵巢膜结合海藻糖酶的纯化及性质研究

用TritonX-100把海藻糖酶从卵巢膜上溶解下来,在缓冲液中含6%甘油的条件下.通过DEAE-SCphaccl柱层析、HPLC、Native-PAGE等步骤,从家蚕卵巢膜上纯化得到了家蚕卵巢膜结合海藻糖酶.该酶是海藻糖的特异性酶.分子量为18 000道尔顿,最适pH是6.5,米氏常数(Km)是1.25mM,且被竞争性抑制剂Validoxylamine A 抑制活性.     

成骨生长肽对体外培养奶牛成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素的影响初探

体外培养奶牛成骨细胞,用10^-12mol／L、10^-11mol／L、10^-10mol／L、10^-9mol／L和10^-8mol／L成骨生长肽（OGP）干预5d后．紫外分光光度法检测细胞上清液中碱性磷酸酶（ALP）活性,以放射免疫法检测细胞上清液中骨钙素（OC）含量。结果显示：成骨生长肽对细胞上清液中ALP活性起抑制作用,其中在10^-10mol／L时抑制作用最为显著（P〈0．01）;对细胞上清液中OC亦起抑制作用,且该抑制呈现剂量双向性．在10^-10mol／L时抑制作用显著。结论：成骨生长肽对体外培养奶牛成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素起轻微抑制作用而且呈双向性。     

Immunological investigation of intestinal, liver, kidney, bone, placental and serum alkaline phosphatase in cattle

The purpose of this study is to investigate the immunological difference between intestinal, liver, kidney, bone, placental and serum alkaline phosphatase (ALPs) in cattle. Kidney, bone and placental ALPs were purified from each tissue by gel filtration and ion-exchange chromatographies, and intestinal, liver, and placental ALPs were obtained from a commercial source. The antibody to each tissue ALP was prepared by immunizing rabbits and tested by double immunodiffusion analysis in cross reactivities. The results indicated that the bovine tissue ALPs are divided into four groups in antigenicity, that is, intestinal, bone, liver and kidney-placental ALPs. The fetus, calf and cow sera contained bone ALP, and calf and cow sera also contained kidney or placental ALP, but all of the sera did not contain intestinal and liver ALP.     

糖对长白猪精液NAGaseⅡ的抑制机理

以长白猪精液为材料,采用经典的纯化方法获得N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC 3.3.1.52,NAGase）的2种同工酶,命名为：NAGaseⅠ和NAGaseⅡ。其中NAGaseⅡ的比活力为358.21U/mg,纯化倍数为6.37倍。以海藻糖、D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖为效应物,研究其对该酶活性的影响。结果表明：在特定浓度范围内,海藻糖对酶活力基本没有影响;D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖对该酶均有一定的抑制作用;D-甘露糖对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI为11.94mmo/L;蔗糖对酶的抑制作用表现为竞争型,抑制常数KI为0.56mmol/L;葡萄糖对酶的抑制作用表现为混合型,抑制常数KI和KIS分别为0.35mol/L和64.29mmol/L。     

肉鸡Trx1和Trx2蛋白的表达纯化及其抗氧化应激效果评价

试验旨在对肉鸡Trx1和Trx2蛋白进行表达和纯化,并评价其抗氧化特性。将原核表达载体GgTrx1-pET28a(+)和GgTrx2-nsp-pET28a(+)转入大肠埃希菌中进行蛋白表达;应用镍柱亲和层析的方法对该融合蛋白进行纯化;采用胰岛素还原法对重组肉鸡Trx1和Trx2蛋白(GgTrx1和GgTrx2)进行活性鉴定;通过细胞体外试验分析比较GgTrx1和GgTrx2对大鼠肝细胞BRL-3A氧化应激保护作用的影响。结果显示,试验成功获得两种重组蛋白:GgTrx1和GgTrx2,最适诱导条件分别为37℃、0.4mmol/L IPTG诱导4h和37℃、1.0mmol/L IPTG诱导4h;纯化的重组蛋白GgTrx1和GgTrx2纯度可达到90%,浓度分别达到4.0和5.0 mg/mL。重组蛋白GgTrx1和GgTrx2均具有较高的还原胰岛素二硫键的能力,并呈现出浓度效应。体外细胞试验发现,重组蛋白GgTrx1和GgTrx2均能显著降低过氧化氢诱导的BRL-3A膜脂过氧化,保护抗氧化酶SOD和CAT活性,且重组蛋白GgTrx2效果更明显。本试验结果表明,重组蛋白GgTrx1和GgTrx2均具有生物学活性和良好的抗氧化应激特性,且线粒体型Trx2为临床治疗氧化应激性疾病提供了更多可能。     

水杨酸浸种处理对黑麦草种子萌发及幼苗抗旱性的影响

用0.25、0.50和0.75 mmol/L水杨酸(SA)对黑麦草‘托亚'(Lolium perenne 'Taya')进行浸种处理,研究不同浓度SA对种子萌发的影响及0.50 mmol/L SA浸种处理对黑麦草幼苗抗旱性的影响.结果表明,0.25～0.75 mmol/L SA浸种预处理有效地提高了黑麦草种子的发芽率和...     

高效离子色谱法测定乳及乳制品中低聚果糖含量

建立离子色谱法定量测定乳及乳制品中低聚果糖的方法,应用CarboPacTMPA1(4mm×250mm)阴离子交换柱、氢氧化钠和醋酸钠淋洗液梯度淋洗、脉冲安培检测器检测。6次测定液态奶中低聚果糖的含量,相对标准偏差小于9%,3种糖的加标回收率在94.8%～103.6%之间。本方法简单快捷,适用于乳及乳制品中低聚果糖含量的检测。     

Immunochemical study of canine intestinal, hepatic, and osseous alkaline phosphatases.

Partially purified alkaline phosphatase (ALP) from canine intestine, liver, and bone were injected into rabbits to elicit anti-canine intestinal, hepatic, and osseous ALP antibodies, respectively. The antibody formed a soluble enzyme-antienzyme complex when directly interacted with the ALP antigen. In order to form an insoluble complex, it was then necessary to interact the initial soluble complex with the goat anti-rabbit gamma-globulin antibody in the 2nd step. Antiintestinal ALP antibody was highly specific and did not cross react with canine hepatic, osseous, splenic, and renal ALP. Antiliver and antibone ALP antibodies, on the other hand, did cross react with hepatic, osseous, splenic, and renal ALP, but not with the intestinal ALP.     

Purification and Characterization of Liver Ferritins from Different Animal Species

The ferritins were purified from liver homogenates of buffalo, camel, cattle, sheep and shark by thermal denaturation, ammonium sulphate fractionation, Sephacryl S-300 gel filtration and DEAE-blue gel affinity chromatography. The yield and iron content of affinity-purified liver ferritins ranged from 0.008 to 0.052 mg/g and 3.17% to 11.4% respectively. As they are glycoproteins, the ferritins contained variable amounts of neutral carbohydrates. Except for shark ferritin, the ferritins all exhibited immunological cross-reactivity with anti-buffalo liver ferritin and anti-horse spleen ferritin by immunodiffusion and immunoelectrophoresis. Gel electrophoresis, gel filtration and ultracentrifugal analysis indicated the presence of a monomeric ferritin in all cases. SDS-gel electrophoresis of shark ferritin gave a protein band of 18 kDa. Ovine, buffalo and bovine ferritin comprised two protein subunits, the H (20 and 21 kDa) and the L types (18 and 19 kDa). Oligomeric ferritin subunits with molecular weights of 27, 37 and 55 kDa were also found for bovine and buffalo ferritin. SDS-PAGE of camel ferritin revealed a complex pattern with four prominent bands of 61, 51, 44 and 39 kDa. Two fast-migrating components of 15 and 16 kDa were also found in the purified liver ferritins, including reference preparations. The PO₄ ^3–/Fe ratios of purified shark (0.10) and bovine ferritin (0.12) were similar to that of standard equine spleen ferritin (0.11). However, the ratio was higher in ovine (0.17), camel (0.22) and bovine (0.26) ferritins. The amino acid compositions, molecular weights and sedimentation coefficients of the different liver ferritins were similar.     

镉对波斯菊种子发芽的影响及外源MeJA的缓解作用

以波斯菊种子为研究材料,采用滤纸床进行发芽实验,探究镉(Cd²⁺)胁迫对种子发芽的影响,及外源茉莉酸甲酯(MeJA)对种子Cd²⁺胁迫缓解的最佳处理方式与最适浓度,对发芽率、发芽势、活力指数、胚芽长、鲜重、丙二醛含量以及抗氧化酶的活性进行了测定。结果表明,波斯菊种子的发芽势、发芽率、活力指数及胚芽长随着Cd²⁺浓度的升高,逐渐降低。波斯菊种子能忍耐<0.6 mmol/L的Cd²⁺处理,但高浓度的Cd²⁺ (≥0.6 mmol/L)对波斯菊的发芽指标有显著的抑制作用。在对单Cd²⁺处理下的波斯菊种子采用不同浓度梯度的外源MeJA的处理方式表明,MeJA浸种预处理方式的效果优于MeJA与Cd²⁺同时处理的方式。且1.0 μmol/L的外源MeJA浸种预处理的缓解效果最佳,与单Cd²⁺处理相比,分别提高了波斯菊种子19.3%的发芽率,73.0%的活力指数,幼苗28.1%的鲜重,并降低了植物丙二醛(MDA)的含量。低浓度的MeJA主要通过提高植物的过氧化物酶(POD),过氧化氢酶(CAT)以及谷胱甘肽还原酶(GR)的活性清除体内产生的活性氧(ROS),并降低膜脂质过氧化反应,来增强种子逆境胁迫的耐受能力。     

维生素A过量对肉鸡早期骨骼钙磷代谢的影响

试验通过研究维生素A过量对肉鸡早期骨形成生化指标及组织中碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（BGP）基因表达的影响,旨在为深入研究日粮维生素A过量对肉鸡骨骼钙磷代谢产生负面影响的机理提供理论基础。采用完全随机试验设计,将450只1日龄健康爱拔益加（AA）肉鸡（公母各半）称重后随机等分为5个处理组,每个处理6个重复,每个重复15只鸡。各处理组日粮分别在基础日粮中添加3 000、6 000、15 000、30 000和60 000 IU/kg维生素A。试验期28 d,分别于试验第14、28天从每个重复中随机抽取1只鸡,翅静脉采血制备血清后随即宰杀,在冰浴上迅速分离右侧肝脏、十二指肠、空肠、回肠、胫骨组织,-80℃保存备用。试验结果表明,随日粮维生素A添加剂量的升高,肉鸡血清BGP浓度、ALP活性和骨特异性碱性磷酸酶（BAP）活性及胫骨、肝脏及小肠组织中ALP、BGP mRNA相对表达量均呈显著（P<0.05）或趋于显著的一次线性或一元二次（P<0.10）降低,通过回归分析得出：维生素A水平在42 766~47 185 IU/kg时,肉鸡14 d胫骨和肝脏ALP mRNA相对表达量、肝脏BGP mRNA相对表达量,28 d的血清ALP活性及肝脏ALP mRNA相对表达量、胫骨和回肠的BGP mRNA相对表达量最低。综合试验结果,维生素A线性降低了肉鸡早期血清BAP活性;日粮维生素A以剂量依赖模式影响肉鸡早期血清BGP浓度、ALP活性及其在组织中的基因表达,42 766~47 185 IU/kg维生素A对上述指标的降低作用较大,提示日粮维生素A过量可抑制肉鸡早期骨形成相关生化指标的活性,并下调胫骨、肝脏及小肠组织中ALP、BGP mRNA的相对表达量。     

The thermostability of proteases from virulent and benign strains of Bacteroides nodosus

Protease enzymes, produced by Bacteroides nodosus strains isolated from animals with virulent and benign forms of ovine footrot, were partially purified by ultra-filtration, ion exchange chromatography and gel permeation chromatography. Each enzyme had a similar pH optimum, was inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA) and ethyleneglycot-bis-aminoethylether-N,N-tetraacetic acid (EGTA), but was not inhibited by 1,10-phenanthroline. The results suggest that these enzymes are serine proteases that require divalent cations for activity. The enzymes could be distinguished by their differential temperature stability and differing susceptibility to irreversible inactivation by EDTA. Both enzymes were stabilised by incubation in the presence of Ca2+, but the enzyme purified from the virulent isolate required less Ca2+ for maximum stability. These results suggest that the differential thermostability of the protease activity detected in virulence tests is an intrinsic property of the protease enzymes.