仔猪腹泻源大肠杆菌的PCR快速检测

仔猪腹泻是危害养猪业的重要疾病,尽管导致仔猪腹泻的原因非常复杂,但大肠杆菌是其主要病原已经明确.本研究根据GenBank登录的肠毒素ST1、ST2、LT1以及耶尔森氏菌强毒力岛(HPI)的基因序列分别设计特异性引物,建立了检测相应毒力因子的PCR方法.通过对已知毒力型参考菌株的扩增,证明了所建立的PCR方法能够特异鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和HPI+大肠杆菌.采集临床110例仔猪腹泻病例的直肠棉拭子样品.接种LB肉汤于37℃增菌培养4 h～6 h后,运用所建立的PCR方法进行检测,结果表明有55例(50%)为HPI+大肠杆菌感染,9例(8.18%)为HPI+大肠杆菌与ETEC混合感染,7例(6.37%)为ETEC感染.通过与细菌分离后鉴定的比较,证明该诊断方法具有速度快、检出率高的特点,适合于临床活体检测.     

投用K_(99)菌毛免疫鸡卵黄粉预防新生犊牛大肠杆菌病

1 前言产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是导致新生犊牛腹泻和死亡的主要病因。现已明确ETEC至少有二种毒力因子:介导粘附于上皮、使ETEC在小肠能迅速繁殖的定居因子和引起腹泻、脱水的热稳肠毒素(ST)或热敏肠毒素(LT)。K99菌毛     

皖北地区仔猪源大肠杆菌毒力因子及HPI毒力岛的检测

我国皖北地区哺乳仔猪腹泻频发,临床直肠棉拭子培养物有34例符合大肠杆菌特征,并进行产肠毒素大肠杆菌(ETEC)毒力因子(STa、STb、LT、SLT-2e)和HPI毒力岛的PCR快速检测。结果,仅有10例表达STa和STb(29.41%),其中3例表达STa基因(8.82%),2例表达STb基因(5.88%),2例表达STa和STb基因,1例表达STa和irp2基因(2.94%),2例表达STa和STb及irp2基因,揭示HPI+大肠杆菌与ETEC混合感染共有3例(8.82%);未检测到LT和STL-2e毒力因子。有10例表达irp2基因(29.41%),其中7例独立表达irp2基因(20.59%)。STa、STb和Irp2的PCR产物测序结果分别与GenBank检索的目标序列比对,其同源性均达到100%。结果初步揭示了皖北地区致哺乳仔猪腹泻ETEC毒力因子及HPI毒力岛的分布情况。     

产肠毒素大肠杆菌疫苗在断奶仔猪中的应用

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起新生仔猪和断奶仔猪腹泻的主要病原之一。通过免疫母猪,新生仔猪通常可以从初乳和乳汁得到有效保护,但在断奶阶段,母乳的保护消失。有关研究发现,引起断奶仔猪腹泻常见的ETEC菌株均有菌毛F4或F18。这些菌毛是重要的毒力因子,它们使细菌结合到宿主易感肠上皮细胞,在肠内定植繁殖,随后分泌肠毒素引起腹泻。文章针对由菌毛F4和/或F18产毒素大肠杆菌引起的腹泻,概括了在养猪生产中其相关免疫接种途径,包括口服弱毒苗和亚单位疫苗、胶囊疫苗和注射免疫接种等。     

牛产肠毒素大肠杆菌毒力因子多重PCR检测方法的建立

通过多重PCR扩增产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigentic E.coli，ETEC）的毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa肠毒素的编码基因来检测和鉴定ETEC。试验中对影响PCR扩增的dNTP、Mg^2＋、引物浓度以及退火温度等因素进行优化，在优化条件的基础上，确定多重PCR的特异性和灵敏性，以此建立同时检测ETEC多个毒力因子的多重PCR方法。用该方法对分离于犊牛腹泻和犊牛肠毒血症的7株大肠杆菌进行检测，结果2株为F41、K99和STa阳性，4株为F41、STa阳性，1株为K99STa阳性。这与玻片凝集试验检测菌毛的结果一致。试验表明，该方法特异性强、敏感性高、简便、快速，适用于临床鉴定和检测牛ETEC菌株。     

肠道中有或无大肠杆菌K88受体的猪的性能

粘附于小肠上皮细胞的能力,是产肠毒素大肠埃希氏杆菌(ETEC)的重要毒力因素。ETEC的表面抗原(又称粘附素,如K88抗原)可促进其粘附于仔猪肠上皮。K88~+菌株是新生腹泻的重要病原,而K88~-菌株在断奶后腹泻中占优势。业已发现,K88~+大肠杆菌并不能粘附于所有猪的小肠,有些猪的肠道中缺乏K88抗原的受体,它们对K88~+ETEC的实验和自然感染均有抵抗力。肠道受体通过单一位点上的两个等位基因(Adh~s     

致犊牛腹泻肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法的建立

肠毒素大肠杆菌((Ent erot oxi geni c E.col i,ETEC)是引起犊牛腹泻的主要病原之一。本试验建立了多重PCR检测ETEC毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa、LT肠毒素相关基因的技术方法。试验对影响PCR扩增的dNTP、引物浓度以及退火温度等因素进行优化,确定了多重PCR的特异性和灵敏性。结果表明:所建立的多重PCR方法快速、特异、灵敏,在2.5h-3h内就可以完成,为致犊牛腹泻肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供另一种选择。     

我国预防幼畜腹泻大肠杆菌基因工程菌苗的研究现状

肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起新生幼畜(仔猪、犊牛、羔羊)腹泻在国内外都很普遍,是导致幼畜死亡的主要原因之一.ETEC的致病环节主要有两个方面:一是肠毒素,有不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST),可促使肠腔积液,引起腹泻;二是粘着素(定居因子).粘着素抗原是细菌细胞膜上长出的菌毛状结构,它们是由蛋白亚单位经装配而成,不同的菌株产生不同的粘着素抗     

猪肠型大肠杆菌病的发病机制(综述)

猪肠道感染肠毒性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)会造成养猪场重大经济损失。掌握猪肠型大肠杆菌病的流行病学、诊断方法和控制措施对攻克该病至关重要。造成新生仔猪大肠杆菌病的ETEC通常携带F4菌毛(K88)、F5菌毛(K99)、F6菌毛(987P)或F41菌毛,而造成断奶仔猪腹泻的ETEC携带F4菌毛(K88)和F18菌毛。这些菌毛能够附着到猪肠腔刷状缘上皮细胞(肠上皮细胞)的特异性受体上,由此开启肠道感染的进程。在完成这一定植后,该菌会产生一种或多种能够引发仔猪腹泻的肠毒素,如热稳定肠毒素a(Heat Stable Toxin a,STa)、热稳定肠毒素b(Heat Stable Toxin b,STb)和热不稳定毒素(HeatLabileToxin,LT)。业已证明,这些毒素对该病的发生起到一定作用。肠型大肠杆菌病的诊断基于致病性大肠杆菌的分离和定量,外加通过PCR方法证实存在编码毒力因子(菌毛和毒素)的基因。肠型大肠杆菌病的诊断方法必须考虑到鉴别诊断和可能与疾病暴发有关的各种潜在病因。在控制大肠杆菌病的各种方法中,抗菌剂或抗生素得到人们的普遍采纳,人们主要使用抗生素来防止疾病的发生并治疗病猪。肠型大肠杆菌病的精确诊断需要有一个合适的样本,以便利用半定量细菌学方法对引起该病暴发的ETEC进行分离和定量。基于出现的典型病变、细菌学检测结果以及确定特定致病因子来鉴定分离大肠杆菌。确认诊断结果和进行药敏试验具有重要意义,因为不同大肠杆菌分离株对抗菌剂的敏感性差异巨大。消费者对抗菌剂耐药性关注的增加,迫使养猪生产者更加理性地使用抗生素,这可以通过正确认识与抗生素疗法以及操作者和农场主对抗生素使用有关的问题来实现。     

同位素标记检测卵黄抗体对大肠杆菌的黏附抑制作用

<正>仔猪大肠杆菌性腹泻的主要病原为产肠毒素性大肠杆菌(enterototxigenic Escherichia coli,ETEC)[1,7]。ETEC的致病作用主要由肠毒素和黏附素性菌毛等两类毒力因子共同构成[2],其主要的致病环节是ETEC     

腹泻牦牛产毒素大肠杆菌感染情况调查及耐药性检测

为了解腹泻牦牛产毒素大肠杆菌(ETEC)的感染情况及分离菌株的耐药情况,试验采用麦康凯平板对2015年10月份采自川西北甘孜州和阿坝州腹泻牦牛的新鲜粪便样品,进行ETEC的分离培养和ETEC K99基因PCR扩增鉴定,并对ETEC K99阳性菌株进行耐热肠毒素(ST)和热敏性肠毒素(LT)基因PCR扩增,K-B纸片扩散法做耐药性检测。结果表明:48份腹泻粪便中检出41份ETEC,ETEC K99检出率85.4%(41/48),而ST检出率9.76%(4/41),LT未检出;所有ETEC菌株对美罗培南和头孢唑啉100%敏感,对其他头孢类、喹诺酮类和氨基糖苷类敏感性高于90%,对阿莫西林/克拉维酸不敏感。可见分离鉴定的腹泻牦牛ETEC对大部分药物的敏感性较高,头孢唑啉可治疗由ETEC引起的牦牛腹泻。     

浙江省猪源产肠毒素大肠杆菌分子流行病学调查

本研究旨在调查浙江省猪源产肠毒素性大肠杆菌的流行情况和毒力基因特征。采用标准细菌学方法对大肠杆菌进行分离,并用聚合酶链反应(PCR)方法检测大肠杆菌的毒力基因。2014-2021年共分离到137个携带ETEC黏附素或肠毒素基因的大肠杆菌菌株,其中禁抗后平均每年分离到的菌株数量是禁抗前的2倍。肠毒素基因检测结果表明,STb (129/137,94.2%)最常见,其次是STa (64/137,46.7%)和LT (62/137,45.3%);黏附素基因以F18 (56/137,40.9%)最占优势,其次为K88 (28/137,20.4%),未检测到K99和987P及F41等黏附素。上述137个临床分离株中共检测到16种不同的毒力因子模式,平均每8.6个菌株产生一种不同的毒力因子模式;其中39.4%的菌株仅携带肠毒素基因,检测不到经典的黏附素基因,而1.5%的菌株则与之相反。共有81株菌同时检测到肠毒素和黏附素基因,占检出总数的59.1%。在所有被检测的生长阶段,肠毒素STb均为检出率最高的肠毒素,且随着日龄增加检出率逐渐降低。黏附素F18随着仔猪日龄的增加检出率不断提高;K88黏附素在各...     

K88菌毛及其蛋白亚基FaeG在防治仔猪腹泻中的应用性研究进展

肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起仔猪腹泻的重要病原之一,其致病性主要与菌毛粘附素及其产生的肠毒素有关。ETEC依靠菌毛粘附素与小肠粘膜上皮细胞上的受体特异性结合,这种粘附作用可以使ETEC抵抗肠道蠕动的冲刷作用而定植,并大量繁殖。ETEC在生长过程中,产生大量的肠毒素并不断释放到肠道内,造成肠道内水和电解质比例失衡,从而引起腹泻。不同肠毒性大肠杆菌(ETEC)菌株的菌毛抗原类型不同,主要有K88、K99、987P及F41,其中以K88的流行最为普遍,因而亦尤为重要。1K88粘附素菌毛,又称纤毛或柔毛,由菌…     

K88-K99-987P-F41菌毛疫苗预防仔猪黄痢的效果

仔猪大肠杆菌性腹泻是养猪场最常见的疾病之一。而肠毒源性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病菌之一。其致病的前提是必须能在小肠黏膜定居、繁殖并产生肠毒素。ETEC表面能产生菌毛粘附因子使得这些菌株很容易吸附并定居于小肠黏     

仔猪源肠毒素性大肠杆菌毒力因子的分布研究

为了解河北省腹泻仔猪源产毒素性大肠杆菌肠毒素的流行分布情况,试验采用PCR方法以质粒DNA为模板对40株大肠杆菌进行肠毒素基因Sta和Stb的检测,并通过对其序列比对分析菌株之间的同源性。结果表明:在40株大肠杆菌中成功扩增出Sta基因36株,Stb基因23株,其中有19株同时携带2种肠毒素,占全部菌株的47.5%(19/40);单独携带肠毒素Sta基因的有17株,占肠毒素阳性菌株的42.5%(17/40)。Sta和Stb基因序列同源性分析显示,已测序的试验菌株之间的同源性在99.6%~100%之间。说明河北省致仔猪腹泻大肠杆菌流行株所携带的肠毒素主要是Sta+Stb及Sta,各地区流行菌株所携带的ST基因具有高度的同源性,具有相近的亲缘关系。     

猪源产肠毒素性大肠杆菌主要毒力因子研究进展

产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起婴幼儿和幼畜腹泻的主要细菌性病原,初生幼畜感染后常因剧烈腹泻脱水而死亡。菌毛黏附素和肠毒素是ETEC目前研究最多的2类毒力因子,随着技术手段的不断进步和研究的深入,一些新型毒力因子不断被发现,如鞭毛、非菌毛黏附素、肠聚集性耐热毒素(the enteroaggregative heat-stable toxin1,EAST1)、自转运黏附蛋白、细胞溶血素等。本综述主要针对猪源ETEC的主要毒力因子以及新型毒力的结构功能及致病性进行阐述,为进一步深入探索ETEC的致病机理提供理论基础。     

猪源产肠毒素大肠杆菌eltA、flhD、fimA、faeG基因启动子的预测、克隆和鉴定

猪源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原菌之一,其致病机制与染色体上特定的毒力岛以及毒力质粒上的某些毒力基因相关。基于对ETEC毒力因子的前期研究,本研究初步预测并鉴定了eltA基因(编码LT毒素A亚单位)、flhD基因(编码鞭毛系统一级调控子)、fimA基因(编码I型菌毛主要结构亚基)和faeG基因(编码K88菌毛主要结构亚基)的启动子位置。通过构建含eltA、flhD、fimA、faeG基因启动子的LacZ报告质粒,利用β-半乳糖苷酶试验检测其活性,为进一步定位启动子、确定启动子序列,探索猪源ETEC毒力调控关系,了解细菌感染过程中各毒力因子的表达规律奠定试验基础。     

仔猪断奶前腹泻与控制

新生仔猪腹泻可由产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、传染性胃肠炎(TGE)病毒、猪流行性腹泻(PED)病毒、A型和C型产气荚膜梭菌等引起,7日龄至断奶前仔猪的腹泻有时还可由轮状病毒和猪等孢子球虫(球虫病)引起(图1)。1产肠毒素性大肠杆菌1.1病原ETEC是新生仔猪腹泻最常见的病原之一。该菌引起疾病(仔猪黄痢)的能力主要取决于细菌在小肠内吸附、增殖和定植以及产生肠毒素的能力。ETEC可产生热敏感肠毒素(LT)和/或两种热稳定毒素(STa和STb)。产LT菌株可引起严重急性腹泻和高死亡率,而产ST菌株则引起温和型的腹泻,其死亡率较低。定植因子又称…     

仔猪产肠毒素性大肠杆菌和产气荚膜梭菌引发腹泻的症状与防治

1产肠毒素性大肠杆菌 产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）是新生仔猪腹泻最为常见的病原。ETEC菌株引起疾病的能力主要取决于菌株在小肠内的吸附、增殖和定植的能力以及产生肠毒素的能力。能引起新生仔猪腹泻的ETEC菌株可产生热敏感的肠毒素（LT）或两种热稳定的毒素。定植因子决定了大肠杆菌在动物肠道定植的能力。如果能发生细菌定植,则产生的毒素会引起腹泻,其可与黏膜表面细胞的特异性受体结合而定植于黏膜。     

上海临港地区猪源ETEC毒力因子及耐药性调查

为了解上海市畜源产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)的携带情况和耐药性本底数据,对上海市临港区域内致仔猪腹泻病原进行多重PCR鉴定以及药物敏感试验。结果显示,从上海市临港地区不同猪场240份样品中分离得到3株ETEC,检出率为1.25%。PCR结果表明成功分离到2株ST2型ETEC,1株LT1+ST2型ETEC,且其菌毛基因型均为F18ac。耐药性分析表明,这3株细菌均对羧苄青霉素敏感,对呋喃妥因、左氧氟沙星中度敏感,对庆大霉素、四环素耐药,对氨苄西林、恩诺沙星、多黏菌素B因菌株不同存在差异。结果表明上海市临港地区猪群中确实存在高耐药性ETEC,建议加强对ETEC的监控。