中国美利奴羊不同MBL型个体感染绵羊肺炎支原体的免疫应答分析

为探讨中国美利奴羊不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)型个体感染绵羊肺炎支原体的免疫应答变化,对4种不同MBL型个体进行MBL水平测定,选择其中20只作为对照组,50只为试验组,在相同饲养条件下试验组人工感染绵羊肺炎支原体,分别在攻毒前1 d(-1 d)、攻毒后1 d(1 d)、1周(7 d)、2周(14 d)、3周(21 d)用ELISA方法定量分析血清中TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平.结果显示,A型和B型其MBL浓度较低,C型MBL浓度较高,与对照组相比,在攻毒后1周,A型和B型IFN-γ表达显著降低(P＜o.05),攻毒后2周,补体C3表达显著降低,TNF-α升高显著(P＜0.05);与A型和B型相比,在攻毒后1周,C型IFN-γ表达增加(P＜0.05),在攻毒后2周,补体C3表达增加、TNF-α显著降低(P＜o.05),补体C1各组均不显著.结论:低血清MBL浓度与绵羊支原体肺炎有一定的相关性,不同基因型之间其TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平有差异,低浓度MBL绵羊更易发生比较严重的炎症反应.     

血清中不同甘露(聚)糖结合凝集素浓度的绵羊感染绵羊肺炎支原体后免疫因子表达的变化

为研究中国美利奴羊不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)浓度感染绵羊肺炎支原体(MO)的免疫因子水平变化,本研究选择血清中MBL高、低浓度的绵羊各6只(感染组和对照组各3只),感染组人工感染MO,分别在人工感染前和感染后不同时间,采用荧光定量PCR法检测血液中血清因子及补体表达水平。结果显示,不同MBL浓度的绵羊人工感染后MBL m RNA水平呈下降趋势,MBL高浓度促炎因子IL-2和IFN-γ的m RNA表达水平较高,抗炎因子IL-4的m RNA表达水平在感染后1 d升高,此后开始下降,而IL-4的m RNA水平在14 d后有所升高;MBL低浓度羊感染后其TNF-α的m RNA水平显著升高,随炎症的缓解,逐渐降低;补体C1和C3的m RNA在感染后表现出不同的变化,MO感染可以激活补体途径。本研究结果表明,低血清MBL浓度与绵羊支原体肺炎具有一定的相关性,MBL不同浓度组之间其IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平存在差异,低浓度MBL的绵羊更易发生比较严重的炎症反应。     

注射甘露糖结合凝集素治疗人工感染绵羊肺炎支原体的效果

研究探讨甘露糖结合凝集素(MBL)治疗人工感染绵羊肺炎支原体的效果,揭示MBL蛋白对绵羊支原体肺炎的免疫调节作用,为阐明绵羊肺炎支原体的致病机制提供依据。人工感染绵羊肺炎支原体2周后注射MBL蛋白,对绵羊进行剖检,以及荧光定量PCR检测血浆MBL蛋白和重组MBL蛋白治疗前后,MBL、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、C1、C3的表达变化。结果显示,注射重组MBL蛋白3周后可以减缓患病羊的病程,肺部出血斑和出血点都有轻微的减轻,与无注射治疗的对照组比较,临床症状和病理变化较轻。蛋白治疗7d后血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、C3的表达水平升高,14d后呈现下降趋势,但高于对照组。MBL蛋白治疗后,患病绵羊血清中MBL、IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α、C1和C3表达量均升高,随后减少,证明MBL蛋白能短期内减轻绵羊支原体肺炎症状以及增强机体的细胞和体液免疫,提高机体的抵抗力并改善炎症。     

绵羊支原体肺炎中不同甘露(聚)糖结合凝集素基因型对肺组织病变的影响

为建立不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因型绵羊支原体肺炎的动物疾病模型,本研究选择MBL外显子1中4种不同基因型共32只绵羊作为试验组,6只健康羊作为对照组,在人工感染绵羊肺炎支原体3周后全部迫杀,取肺脏组织做病理切片,以组织病理学评分确定肺部的炎症反应程度.不同MBL型绵羊的肺脏呈现不同程度病理改变,组织病理学评分结果为MBLA型和B型平均分为18.3和19.1,表现为重度病变;MBLD型平均分为12.3,为中度病变;MBL C型平均分为8.9,为轻度病变.本研究以组织病理学评分方法客观量化了不同MBL基因型肺部炎症反应的严重程度,根据评分结果推测MBL A型和B型为易感型,C型为抗性型.本研究利用组织病理学评分方法对其肺炎程度进行量化评价,为筛选绵羊支原体肺炎抗性基因型提供依据.     

绵羊肺炎支原体黏附因子的定点突变及原核表达

本研究采用点突变PCR方法成功克隆并表达了绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoiae,M.O)内蒙古分离株(SZWQ株)的黏附因子基因(SZWQ-860)。表达产物经SDS-PAGE电泳检测,与预期目的蛋白的大小一致,将重组蛋白纯化后经Western blot检测,结果表明重组蛋白具有良好的免疫反应性。     

绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究

为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 ku蛋白带处存在共同抗原。     

绵羊支原体肺炎的诊治

1　发病情况　 2 0 0 1年 1月 ,靖江市郊区一养羊户从浙江省某地调进湖羊 1 0 6只 (其中母羊 1 0 1只 ,多为怀孕绵羊 ) ,入场后第 5天发现一只公羊流浆液性鼻涕 ,咳嗽 ,体温升高 ,食欲减退 ,经常反复。到第 2 0天 ,部分母羊体温升高、不食 ,后经紧急治疗 ,疫病得到有效控制 ,共     

绵羊肺炎支原体的研究进展

文章介绍了绵羊肺炎支原体的病原特征、致病性及致病机理、疫苗研制情况,并提出加强研究的方向,为该病的防治及疫苗开发提供参考。     

4种佐剂对绵羊肺炎支原体的免疫辅佐效力研究

不同种类的佐剂对同种抗原的免疫辅佐效力不同。为筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)灭活疫苗的理想佐剂,本研究制备了4种不同佐剂的MO灭活疫苗,分别免疫成年家兔,用MO间接血凝试剂盒测定免疫后1～9周血清抗体效价。检测结果显示,4种疫苗在免疫后都能迅速产生抗体,其中用MO Buonavoglial's和ISA-760佐剂疫苗免疫家兔,产生抗体均于免疫后第3周达到高峰((5.67±0.70) log2,6.00 log2),到第9周时维持抗体高峰(6.00 log2,(6.00±1.00) log2);MO ISA-206和白油佐剂疫苗免疫抗体均于免疫后第4周达到高峰((4.33±0.57) log2,5.00 log2),至第9周下降约1个滴度。统计学分析结果显示,ISA-760、Buonavoglial's佐剂对MO的免疫增强效力显著优于ISA-206和白油佐剂(P<0.05),是MO灭活疫苗的理想候选佐剂,为高效MO灭活疫苗的研发提供了科学依据。     

绵羊肺炎支原体的培养与提纯

试验用改进的Ｈａｒｔｌｅｙ氏消化汤培养基,培养绵羊肺炎支原体效果较好,一般在菌体复苏后２４～４８ｈ即可使培养基ｐＨ值下降至６．９左右,同时建立了操作简单,省时,省力,染色效果良好的支原体复红染色法和提纯绵羊炎支原体抗原的具体方法。     

Antibody response in sheep experimentally infected with different small ruminant lentivirus genotypes

Two groups of sheep were experimentally infected by intratracheal route with two small ruminant lentivirus (SRLV) isolates belonging to different genotypes (It-561 genotype A3 and It-Pi1 genotype B2). Seroconversion was evaluated using recombinant homologous and heterologous matrix protein/capsid antigen fusion protein. Results clearly indicate that seroconversion against homologous antigen was detected well in advance as regards heterologous antigen in both groups, although the advantage of using homologous antigen was less evident in detecting seroconversion against the caprine arthritis encephalitis virus (CAEV)-like strain, compared with the maedi-visna virus (MVV)-like infection. Commercially available ELISAs detect CAEV-like seroconversion earlier than MVV-like infection suggesting a closer relationship between CAEV-like isolate and the antigen used in the latter ELISA tests. Seven recombinant subunits developed from matrix protein and capsid antigen of strain K1514 (prototype A1) were used to better define the antibody response in sheep infected with It-561 isolate. Two animals clearly reacted against type specific epitopes in the early stage of infection. This study highlights the relative insensitivity of gag encoded cross-reacting epitopes during the early stage of infection and suggests the development of novel diagnostic tests based on both genotype specific antigens.     

绵羊肺炎支原体感染羊细胞因子的动态变化

为检测绵羊在感染绵羊肺炎支原体(MO)前后细胞因子的含量变化情况,将6只巴什拜羊和6只盘羊杂交羊人工感染MO,在感染前后分别采集静脉血,分离血清,用ELISA方法检测IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10及IFN-γ含量。结果显示:两组羊在感染后IL-1β浓度均升高,第21天巴什拜羊的IL-1β含量降低,且显著低于杂交羊(P0.05);感染后两组的TNF-α含量逐渐升高,第14~21天巴什拜羊TNF-α含量开始下降,且第14天显著低于杂交羊(P0.05),第21天极显著低于杂交羊(P0.01);感染后第14和21天,巴什拜羊的IL-8含量开始下降,而杂交羊则继续升高,且杂交羊IL-8含量均极显著高于巴什拜羊(P0.01);两组羊的IL-10含量在第5天达到最高,且杂交羊极显著高于巴什拜羊(P0.01),而第14和21天巴什拜羊显著(P0.05)和极显著(P0.01)高于杂交羊;感染后两组羊的IFN-γ含量逐渐升高,第14~21天,巴什拜羊的IFN-γ含量开始下降,而杂交羊则继续升高,第14和21天巴什拜羊显著(P0.05)和极显著(P0.01)低于杂交羊。结果提示:绵羊感染MO前后细胞因子变化明显,巴什拜羊和杂交羊细胞因子变化也有差异,这对研究支原体肺炎发病机理及免疫治疗有指导意义。     

感染绵羊肺炎支原体前后绵羊血清中相关细胞因子的动态检测

为研究绵羊感染绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)前后体内细胞因子含量的变化,将6只盘羊杂交羊和6只巴什拜羊人工感染MO,在感染前后采集静脉血,分离血清,用ELISA方法检测IL-5、IL-9、IL-12及IL-13含量。结果显示:2组羊在感染后IL-5浓度均升高,第7(P0.05)、14(P0.01)和21天(P0.01)盘羊杂交羊IL-5含量显著和极显著高于巴什拜羊;感染后第7(P0.01)、14(P0.01)和21天(P0.05)盘羊杂交羊的IL-9浓度极显著和显著地高于巴什拜羊;在感染后的第7(P0.05)、14(P0.01)和第21天(P0.01),盘羊杂交羊的IL-12浓度显著和极显著地高于巴什拜羊;在感染后的第5(P0.05)、7(P0.05)、14(P0.01)和21天(P0.01),IL-13浓度巴什拜羊显著和极显著低于盘羊杂交羊。结果表明:绵羊感染MO前后血清中IL-5、IL-9、IL-12及IL-13的浓度有明显变化,巴什拜羊和盘羊杂交羊的上述细胞因子变化也有显著差异,这对研究支原体肺炎发病机理及临床诊断有指导意义。     

甘肃地区绵羊支原体病原菌的分离培养

在甘肃省5个地区采集了100份绵羊血清样本,并对100份样品进行了血清学及病原菌分离培养试验。血清学检测初步鉴定为14份阳性,其中11份来自于同一地区。然后对两例疑似患病羊做病原分离鉴定以及微生物学诊断和PCR鉴定,并对病原菌进行革兰氏染色。本研究成功地从病羊身体中分离出细小、纤细的呈球形、双球形、线状、螺旋状、半月状和短杆状等形态的绵羊肺炎支原体。     

Changes in peripheral blood leucocytes of sheep experimentally infected with Mycoplasma agalactiae

Contagious agalactia is a serious disease of small ruminants affecting mainly mammary glands, joints and eyes. In sheep, the main aetiological agent is Mycoplasma agalactiae (Ma) whose abilities to persist in the target organs are known. Since there is no information on the effect of acute and chronic Ma infection on circulating leucocytes, the present study was designed to monitor granulocytes, monocytes, T and B lymphocytes, by flow cytometry, in female lactating sheep nasally infected with Ma. A profound depletion of leucocytes was observed from day 5 to day 34 post infection (p.i.). In particular, while the granulocytes returned to baseline levels by day 12 p.i., the monocytes remained significantly low until day 20 p.i. The infection caused a prolonged depletion of peripheral T lymphocytes (both CD4⁺ and CD8⁺) while B lymphocytes remained unaltered throughout the study. Mycoplasma agalactiae was detected by real-time PCR in several anatomical sites (ear, nose and milk) from day 2–5 p.i. until the end of the study (i.e., day 50 p.i.) while a transient bacteraemia was observed from day 5 to day 12 p.i. The leucopenia observed following intranasal Ma infection is likely due to leucocyte infiltration within the target organs.     

感染绵羊肺炎支原体后绵羊SPLUNC1 mRNA表达水平监测

为检测绵羊感染绵羊肺炎支原体(MO)前后的短腭、肺及鼻咽上皮克隆基因1(SPLUNC1)表达水平变化,对6只巴什拜羊和6只盘羊杂交羊分别人工感染MO,在感染前(第0天)和感染后第5、14、21天,采集口腔喉咽部的上腭组织,用Real-time PCR方法检测SPLUNC1mRNA的表达水平。结果:感染后两组羊SPLUNC1 mRNA的相对表达水平均升高,在感染后第14~21天,巴什拜羊SPLUNC1 mRNA水平均极显著高于盘羊杂交羊(P001)。该结果说明在临床上表现为抗MO感染的巴什拜羊,体内可表达高水平的SPLUNC1 mRNA,这为巴什拜羊抗MO感染的机理研究提供一定的参考依据。     

人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊甘露聚糖结合凝集素变化及组织病理学

为探讨绵羊甘露聚糖结合凝集素(Mannose-binding lectin,MBL)对绵羊肺炎支原体抗性的研究,选取17只2月龄健康的中国美利奴羊,14只为试验组,3只为对照组。相同饲养条件下人工感染绵羊肺炎支原体,于攻毒前1周、攻毒后3周观察临床症状,并通过ELISA检测羔羊血清MBL水平,结果显示,试验组攻毒后不同个体MBL含量水平整体下降。宰杀后进行组织病理学评分,重度、中度、轻度病理变化的评分分别为18分以上、12分左右、9分左右,该评分结果与临床观察结果一致,可知攻毒前血清MBL水平越高评分越低。表明MBL对绵羊肺炎支原体有抗性。