口蹄疫病毒(FMDV)多重RT-PCR检测方法的建立

在大量比较国内外口蹄疫病毒（FMDV）流行毒株序列的基础上自行设计了检测FMDV通用型引物及FMDV AsiaⅠ型、O型口蹄疫病毒不同基因型即：中国型（Cathay）与泛亚株（PanAsia）的多重PCR引物。本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了多重RT-PCR反应体系和反应条件,并进行了相关病毒检测试验。结果表明,本试验建立了有效、特异、敏感的检测FMDV AsiaⅠ型及O型FMDV不同基因型中国型与泛亚株的多重RT-PCR检测方法,为口蹄疫的诊断防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础。     

西藏牦牛O型、AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫抗体效价分析

为调查口蹄疫疫苗对西藏牦牛的免疫保护情况,应用口蹄疫液相阻断ELISA方法对随机选取的西藏五区一市844头牦牛的血清进行O型、AsiaⅠ型口蹄疫抗体水平检测。结果显示,西藏地区牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型疫苗抗体具有50%以上保护力的比例分别为83.44%、71%,口蹄疫疫苗免疫状况良好,但西藏同一地区不同县、市的牦牛口蹄疫疫苗免疫情况存在较大差异。     

天峻县牛羊AsiaⅠ-O型口蹄疫免疫抗体检测

为了探讨口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活苗免疫接种牦牛、藏羊后产生抗体效价,项目对天峻县阳康乡的牦牛、藏羊开展AsiaⅠ-O型口蹄疫疫苗的抗体效价检测,试验结果表明,口蹄疫AsiaⅠ-O型二价灭活疫苗免疫效果依次为成年牦牛、成年藏羊、犊牛、羔羊;免疫后Ⅰ型抗体分析结果与O型免疫抗体的免疫效果一致,免疫合格率在80%以上,免疫牛羊产生的整体抗体水平能够符合国家规定的要求。     

O型和Asia1型口蹄疫病毒感染RT-PCR鉴别诊断方法的建立

根据GenBank中O型和Asia1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的vp3、vp1和2A基因序列,并与其它血清型FMDV的对应基因序列进行比较,设计用于扩增O型和Asia1型FMDV vp1基因的特异性引物,建立O型和Asia1型FMDV RT-PCR鉴别诊断方法。本方法首先用通用型引物进行RT-PCR,确定是否为FMDV感染,然后用特异性引物鉴别O型或Asia1型FMDV的感染。用vp1基因序列分析进行符合性试验,验证了该方法所具有的特异性和敏感性。本方法可用于O型和Asia1型FMD的快速诊断及流行病学调查。     

2013年度西藏及四川红原地区牛血清口蹄疫抗体水平监测

本试验采用口蹄疫液相阻断ELISA方法对西藏部分地区、四川红原地区随机采取的604份牛血清进行O型、A型、AsiaⅠ型口蹄疫抗体水平检测。结果显示,西藏部分地区牦牛口蹄疫O型、A型、AsiaⅠ型血清抗体效价在50%以上所占比例分别是82.89%、64.1%、73.25%;四川红原地区牦牛口蹄疫O型、A型、AsiaⅠ型血清抗体效价在50%以上所占比例分别是93.36%、87.11%、83.59%。西藏部分地区黄牛口蹄疫O型、A型、AsiaⅠ型血清抗体效价在50%以上所占比例分别是89.17%、61.4%、73.25%。数据表明,疾病防控效果相较往年有提高,但不同县市防控水平有很大差异,同一地点不同血清型的口蹄疫防控效果也有明显差异。     

用ELISA方法检测口蹄疫抗体消长规律和免疫效果

<正>口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是当今最为严重的家畜传染病之一。FMD的病原为口蹄疫病毒(FMDV),该病毒属小RNA病毒科口蹄疫病毒属,有A、O、C、SATⅠ、SATⅡ、SATⅢ及AsiaⅠ共7个血清型及65个以上的亚型,其中O型流行最广,国际上仍时有发生。口蹄疫一旦发生,不但会造成大批小猪死亡,还要采取扑杀封锁等措施,影响国内国际猪肉及其产品的贸易和人民群众的正常生活,给农牧业生产造成极大     

2011—2013年广西地区口蹄疫免疫应激反应发生情况及分析

<正>口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)是属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属的一种单股正链RNA病毒,该病毒以复制能力高、潜伏期短并通过接触和气溶胶传播为特点[1]。在世界范围内共有7种不同的血清型流行,分别是A、O、C、亚洲Ⅰ型以及南非Ⅰ型、南非Ⅱ型、南非Ⅲ型[2]。口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由FMDV引起的一种对牛、     

多重荧光RT-PCR同时检测口蹄疫O A AsiaⅠ三种血清型

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是一种动物烈性传染病,被OIE列为A类家畜传染病之首。根据O、AsiaⅠ、A三种血清型FMDV的保守基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了检测O、AsiaⅠ、A三种血清型FMDV的多重荧光RT-PCR检测方法。结果表明,该方法有效、特异、敏感,对于口蹄疫病毒的诊断和疫苗的使用具有重要意义。     

天山牦牛口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC检测

为了掌握生活在天山深处牦牛口蹄疫病毒（FMDV）感染情况,采集牦牛血样149份,分离血清后进行口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC检测.结果表明：犊牦牛、青年牦牛以及成年牦牛平均阳性率达7.4％.     

AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFastBacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP 1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。     

AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统对Asia Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VPl基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白功能及建立Asia Ⅰ型FMDV血清学诊断方法奠定基础.采用PCR方法从pGEM-T-Easy-Asia Ⅰ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BaeHTA-VPl再转入DH10Bae感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Baemid-VPl,然后转染Sf9昆虫细胞.PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Baemid-VP1,SDS-PAGE和West-ern-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白.将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出Asia Ⅰ型口蹄疫病毒阳性血清.Asia Ⅰ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础.     

Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

为建立Asia1型口蹄疫(FMD)快速病原学诊断方法,本研究采用纯化的Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗Asia l型FMDV单克隆抗体(MAb)2E10。经间接免疫荧光试验特异性鉴定,2E10为FMDV型特异型MAb。其抗体亚类为Ig G1/资,杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价分别为1颐256和1颐104,相对亲和力常数为2.5 mol/L。在此基础上,以本实验室前期制备的MAb 2D8为包被抗体,以HRP标记的MAb 2E10为检测抗体建立了检测Asia1型FMDV抗原的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法针对FMDV细胞毒的最低检出量为103TCID50,对O型FMDV、A型FMDV、牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒及牛传染性鼻气管炎病毒检测结果均为阴性。本研究建立的Asia1型FMDV DAS-ELISA方法为Asia1型FMD病原学诊断试剂盒的研发奠定了基础。     

O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测方法的建立

为了建立针对流行于我国及周边国家主要口蹄疫病毒(FMDV)血清型的检测方法,本实验设计2对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时扩增O型、A型及Asia1型FMDV VP1全基因的套式RT-PCR (RT-nPCR)方法.该方法能特异性检测O型、A型和Asia1型FMDV,对其它相关动物病毒的检测结果均为阴性;比FMDV多重RT-PCR商品试剂盒敏感约1 000倍.利用该方法对10份FMDV样品进行扩增检测,结合扩增产物的克隆测序技术,对所检样品进行了准确定型.实验结果表明,该方法通用型强,可用于3个血清型FMDV的检测和分子流行病学调查.     

甘南牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗免疫效果分析

为了解口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗对甘南牦牛的免疫保护情况,试验应用ELISA方法对30头牦牛不同免疫阶段的血清进行了抗体监测。结果表明:除免疫前口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗产生的抗体水平较低外,在一免后30天和二免后30,90,150天均能达到群体免疫保护水平,且在二免30天时最高,持续2~3个月后有下降趋势,在免疫5个月后下降至70.00%左右,但仍具有保护力。说明用甘南牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗免疫牦牛产生的抗体水平符合国家规定的要求,且能维持较高水平,免疫效果良好。     

木鳖子提取物对Asia Ⅰ-O型口蹄疫双价灭活苗的免疫佐剂作用

分别将2 500、500、100、20μg的木鳖子提取物(ECMS)或100 μg皂树皂甙(QA)和Asia Ⅰ-O型口蹄疫(FMD)双价灭活苗混合免疫豚鼠,以不另加佐剂的疫苗为对照组,于二免后3、6、10、14周采血并分离血清,观测血清中抗O型FMDV的抗体滴度、抗O型FMDV VP1结构蛋白抗体水平和抗Asia Ⅰ型FMDV的抗体水平.结果显示,当ECMS剂量等于或少于500 μg时,ECMS和FMD双价灭活苗混合免疫豚鼠,未见不良反应;疫苗中加入ECMS和QA后,则诱导更高的抗O型FMDV抗体滴度、抗O型FMDV VP1结构蛋白抗体和抗Asia Ⅰ型FMDV抗体水平,尤其ECMS100 μg组和QA 100 μg组(P＜0.01)或(P＜0.05);且ECMS 100 μg组抗体水平高于QA 100 μg组.本研究结果提示ECMS可作为FMD灭活疫苗的候选佐剂.     

北京市密云地区牛猪羊O型亚洲 I型口蹄疫免疫抗体监测

口蹄疫病毒有7个血清型,其中O型、亚洲Ⅰ型(AsiaⅠ)影响最为严重.为了有效的防控该病的发生,做好口蹄疫疫苗的免疫,加强疫苗的免疫监测工作尤为重要.通过我们对密云地区的偶蹄动物免疫和监测,摸索出奶牛、猪、羊O型与AsiaⅠ型口蹄疫免疫抗体消长规律,找出科学的免疫方案.     

关于对某公司生产的口蹄疫疫苗进行区域免疫试验的报告

口蹄疫(FMD)是口蹄疫病毒(FMDV)引起的人兽共患的急性、热性、高度接触性传染病。该病感染率高,传播速度快,广泛流行于世界各地,主要侵害偶蹄兽(猪、牛、羊),并且会传染给人。口蹄疫病毒有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3、Asia1型,每个型又可以进一步分为亚型,7个不同的血清型没有交叉免     

猪口蹄疫与猪水泡病的诊断区别

1病原区别口蹄疫病毒(FMDV)属于小核糖核酸病毒科,口蹄疫病毒属,病毒无囊膜。PH值6.7～10.5,表现稳定。有7个血清型,A型;O型;C型;南非(SAT)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型;亚洲Ⅰ型。多变种或亚型存在于每个血清型里。水泡病病毒(SVDV)属于小核糖核酸病毒科,肠道病毒属,病毒无囊膜。PH值3～5,表现稳定,对环境抵抗力较强,50℃、30分钟仍不失感染力。2流行病学区别     

大庆地区奶牛A型口蹄疫免疫程序的建立

<正>口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)所致的急性、热性、高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物,以发热、口腔黏膜及蹄部和乳房皮肤发生水泡和溃烂为特征,传染性强,流行迅速,国际兽医局(OIE)将其规定为A类传染病,我国规定其为一类传染病。目前已知口蹄疫病毒有7个主型,分别是A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲Ⅰ型。在亚洲地区,以前主要流行O型和亚洲Ⅰ型,近年又发生了A型口蹄疫疫情,而且     

口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的研究

对O型口蹄疫病毒OHM/02株和亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒AsiaⅠ-KZ/03株进行了部分生物学特性分析,结果表明它们对牛的毒力较强,传代后毒力稳定,OHM/02株半数感染量(ID50)在107.5～108.25/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株半数感染量(ID50)在106.75～107.5/0.2mL之间,适合做检验用毒;同时该2株毒易感染乳鼠,适应BHK21细胞,对乳鼠毒的半数致死量(LD50)OHM/02株毒在107.0～109.0/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株毒在107.0～108.5/0.2mL;通过攻毒保护试验证实,病毒的免疫原性良好,制备的细胞毒灭活疫苗均达到3个以上的PD50。通过病毒大规模生产工艺的探索(转瓶培养和悬浮培养)、疫苗佐剂的研究、免疫持续期的监测和安全性等试验,成功研制了口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗,获农业部新兽药注册证书。