香猪睾丸发育的形态学变化

为了解香猪睾丸发育过程中的形态学变化,外科手术取30、40、50、60、90、110日龄（每个年龄组n=3～4）香猪右侧睾丸经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,组织切片采用HE染色,40倍物镜下观察细胞数量变化,经显微照相后用Scion image软件测量生精小管、输出小管和附睾管的管壁面积。结果发现30～50日龄时睾丸生精...     

从江香猪生精上皮周期及睾丸发育的形态学分析

试验旨在探究初情期前后生精上皮周期差异及睾丸发育过程中的形态学变化。通过测定15、30、60和90 d睾丸相关指数，结合睾丸组织形态学特征，判断香猪初情期，划分从江香猪生精上皮周期。结果显示，30 d的睾丸指数较15 d极显著升高（P<0.01），睾丸重、长轴及短轴的增长率分别为298.05%、66.42%和65.45%，60和90 d两个阶段睾丸重增长率相对稳定。形态学观察表明，从江香猪30 d时生精小管出现游离精子，完成第一次生精并进入初情期；与15 d相比，30 d生精小管面积和生精上皮厚度极显著增加（P<0.01），增长率分别为136.12%和40.19%，在60和90 d均处于稳定增长状态。睾丸细胞数统计显示，日龄增加不影响支持细胞（setoli cells，SC）数量（P>0.05），而30 d生殖细胞数（germ cells，GC）较15 d极显著增加（P<0.01）。相关分析结果发现，生殖细胞数量增加与生精小管面积增大、生精上皮厚度变化之间呈明显正相关（r=0.994；0.96）。根据生殖细胞组合形式差异，将初情期前后生精上皮分为3和8个阶段。初情期前生殖细胞以第一次减数分裂前期为主，A、B型精原细胞、SC、初级精母细胞（primary spermatocyte，Ps）、前细线期（preleptotene，PI）、细线期（leptotene，L）等生殖细胞在初情期前后生精上皮中均存在，而圆形精子（round spermatids，R）、延伸精子（elongating spermatid，E）、精子细胞（spermatozoa，S）仅存在于初情期后的生精上皮。本研究结果表明，从江香猪30 d初情，睾丸发育以生殖细胞和生精小管面积的迅速增加为主，该结果对从江香猪早熟性状挖掘、种猪选育及开发利用等有重要的指导意义。     

贵州香猪不同发育阶段睾丸组织肥大细胞观察

为了解贵州香猪不同发育阶段睾丸肥大细胞(MC)数量的变化情况,试验采用外科手术法取出30,40,50,60,90,110日龄(每个日龄段3～4头)香猪右侧睾丸,卡洛氏液固定,石蜡包埋处理并作5μm厚连续切片,用改良甲苯胺蓝(MTB)染色法观察睾丸发育过程中MC的形态和数量变化。结果表明:90日龄前香猪睾丸MC数量随日龄增加而增多,到90日龄时MC数量达到最多,而110日龄时MC数量减少,极显著低于50,60,90日龄睾丸中MC数量(P<0.01)。说明性成熟(90日龄)前香猪睾丸MC数量增多,而性成熟后MC数量减少,这种变化规律有利于睾丸的发育和精子的生成,但其作用机制还需进一步研究。     

己烯雌酚对幼年香猪睾丸细胞的影响

为了认识己烯雌酚(DES)对幼年雄性香猪睾丸生殖细胞和支持细胞数的影响,将20只20～25日龄幼年雄性香猪分成4组,对照组只注射生理盐水,试验组连续9d(每天1次)经腹腔分别注射不同剂量(0.03、0.3、3mg·kg-1)己烯雌酚后,最后一次注射24h后取左侧睾丸,入40g·L-1多聚甲醛固定24h,常规制备5μm石蜡切片,用免疫组织化学方法对睾丸支持细胞特异性蛋白生长转录因子4(GATA4)进行检测。显微镜下分别计数支持细胞和生殖细胞数,并统计分析。结果发现:己烯雌酚用量为0.3和3mg·kg-1能促使睾丸生殖细胞数显著增多(P0.05);而使睾丸支持细胞数量显著减少(P0.05);首次发现DES能促进幼年香猪睾丸生殖细胞增殖而抑制其支持细胞增殖。DES的作用因细胞类型不同而有所不同,但其机制还需进一步研究。     

香猪睾丸间质细胞TAS1R3基因干扰后对自噬相关因子的影响

旨在探究TAS1R3基因通过mTOR对从江香猪自噬相关基因表达的影响。本试验选择30日龄健康雄性从江香猪3头，采集睾丸组织并培养出睾丸间质细胞。将构建成功的干扰载体和空载体转染至细胞中，利用qRT-PCR检测其对TAS1R3基因表达影响，运用qRT-PCR和Western blot检测TAS1R3基因干扰后对味觉受体第一家族一号受体(TAS1R1)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、BECN1和微管相关蛋白1轻链3β(MAP1LC3B)表达的影响。结果表明，当TAS1R3基因被干扰后，相较于shRNA-NC对照组，TAS1R1、ERK1、ERK2、mTOR基因mRNA表达量均极显著降低(P<0.01),自噬因子BECN1和MAP1LC3B表达量极显著升高(P<0.01)。Western blot结果表明当TAS1R3基因被干扰后，与shRNA-NC对照组相比，蛋白T1R3、T1R1、p-mTOR、p-S6K1、p-ERK12均极显著降低(P<0.01),而自噬蛋白Beclin 1表达量极显著升高(P<...     

贵州香猪睾丸发育中支持细胞和生精细胞数量变化观察

为了解香猪睾丸发育过程中生殖细胞和支持细胞数变化规律,用手术取出30,40,50,70,90和110日龄(每个年龄组n=3～4)香猪右侧睾丸,经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,组织切片采用免疫组化SP法,用单克隆抗体GATA-4检测睾丸支持细胞的特异生长转录因子-4,经DAB显色、苏木素复染。光镜下核呈棕色者为支持细胞,核呈蓝色者则为生殖细胞;经显微照相并用Scion image软件测量生精小管及管壁面积。结果:30～110日龄睾丸支持细胞数维持在稳定水平(P>0.05),而生殖细胞数随日龄增加而增多,70日龄生殖细胞数快速增多(P<0.05),持续到110日龄。同样,从70日龄开始睾丸生精小管和管壁面积显著性增大(P<0.05)。香猪睾丸支持细胞快速增殖发生在30日龄前,而生殖细胞数随着日龄的增长而增多。     

中国香猪简介

香猪是小型猪,因其沉脂力强、边长边肥、早熟易肥、肉质优异、双月断奶仔猪宰食无乳腥味、肥猪开膛后腹腔内不臭,被誉名为香猪。在我国地方猪种分类中,属华南型猪种。根据香猪产地及毛、皮颜色不同,已通过鉴定的香猪分为从江香猪、巫不香猪、环江香猪、剑自香猪、贵州白香猪、久仰香猪和巴马香猪等7种类型。香猪也称“珍珠猪”,苗族称“别玉”,壮族叫“牡汗”。     

从江香猪不同组织脂蛋白脂酶mRNA的表达及其酶活性研究

为进一步探究脂蛋白脂酶(LPL)基因的功能,揭示其对从江香猪肉质性状的影响,本研究采用荧光定量RT-PCR技术结合酶活性检测方法分析了从江香猪不同组织LPL基因表达水平及活性规律。结果显示,LPL基因在从江香猪大脑、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、大肠、背肌、子宫和卵巢10种组织内均有表达;其中,背肌和心脏组织中表达量较高,子宫和肺组织中表达量较低,且背肌中LPL mRNA表达量显著高于其他各组织(P0.05)。从江香猪4种组织LPL活性分析结果表明,背肌组织中的LPL活性显著高于子宫和心脏组织(P0.05),说明背肌中脂肪沉积能力高于子宫和心脏组织,研究结果将为今后分析该基因对从江香猪肉质性能的影响奠定基础。     

促进从江香猪生产发展的技术措施及对策

香猪是我县的特色地方品种,它以其“体型矮小,肉质细嫩,基因纯合,纯净无污染”等特点而闻名全国,自1998年以来,为了发挥香猪品种资源优势,县委、县政府结合县情实际,把发展香猪生产作为农村脱贫致富的一项支柱产业来抓,在国家、省、地县的关心和重视下,先后投入600多万元,建成面积达600m2,年屠宰50万头猪的现代化加工生产线和贮存200t的冷库一座,组建香猪开发公司,研制出腊香猪、烤香猪、香猪香肠、香猪火腿,香猪腊肉、美味心肝等系列风味食品,在香猪     

从江香猪细小病毒血清学调查

为了解从江香猪细小病毒病感染情况,2014年9月至2015年8月分别从江县和榕江县采集香猪血清共640份.用ELISA的方法对全部样品进行检测,结果显示,抗体阳性总数为244份,阳性率为38.13%.表明在从江县和榕江县香猪存在不同程度的细小病毒病感染,因此,采取必要的防控措施,对香猪资源的保护与发展具有重要意义.     

贵州剑河白香猪的生长发育测定

香猪是祖国猪种资源的无价之宝,是国家二级稀有动物,继１９７８年西南区猪种资源普查发现贵州从江香猪后,徐文超先生对贵州从江香猪的种质进行了系统测定,在《中国猪种地方猪种质特性研究》中,许振英先生向全世界宣布,贵州香猪是世界最小的侏儒猪。以后陆续报道了贵...     

从江香猪气喘病血清学调查

为了解从江香猪气喘病(支原体)感染情况,2014年9月至2015年8月分别从江县和榕江县采集香猪血清共640份.用ELISA的方法对全部样品进行检测,结果显示,抗体阳性总数为526份,阳性率为82.19%.表明在从江县和榕江县香猪普遍存在猪支原体感染,因此,采取相应的防控措施,保证从江香猪的健康发展.     

香猪生长发育性能的研究

本文测定了香猪2-5月龄生长发育情况和6月龄部分内脏器官重量。试验表明,香猪2、3、4、5月龄的体重分别为5.12±0.75 kg、7.24±1.67 kg、13.41±2.29 kg、18.82±5.24kg,2-5月龄全期平均日增重为152.22±25.17g/d;香猪体重、体高、体长和胸围随着月龄的增加而增加,体重和体高在4月龄左右出现拐点,体长增长速度随月龄的增加而加快,而胸围随月龄的增加速度减缓。香猪6月龄的胃、小肠、大肠、心脏、肝脏、肺、肾脏分别占体重的1.67±0.32%、2.02±0.11%、3.21±0.32%、0.52±0.02%、1.65±0.26%、1.31±0.05%和0.38±0.02%。     

从江香猪附睾发育中凋亡相关因子Caspase-3的表达模式

细胞凋亡可及时清除机体内多余和受损伤的细胞，以维持组织器官的稳定性。为探讨凋亡过程在公猪附睾发育过程中发挥的潜在作用，本实验以从江香猪为研究对象，利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)、免疫组织化学（IHC）和WesternBlot技术分析了附睾15d（初情前期）、30d（初情期）、60d（初情后期）和180 d（性成熟期）4个时期凋亡相关因子Caspase-3、Bax和Bcl-2的差异表达模式。qRTPCR结果显示：Casp3和Bax基因mRNA在从江香猪60d表达量最高，Casp3在15d表达量最低，15d和180 d差异不显著；Bax在180 d表达量最低，且15 d、60 d和180 d差异不显著；Bcl-2在60 d表达量最低，在15 d表达量最高，4个日龄段差异显著。免疫组化结果显示：Caspase-3蛋白在30 d主要表达在附睾管腔的微绒毛，而在180 d主要表达在管腔中的精子上。Western Blot结果显示：Caspase-3蛋白表达丰度依次为60 d>30 d>15 d>180 d，且各日龄段差异显著。综上，本实验发现不同日龄从江香猪附睾凋亡相关...     

利用miRNA芯片筛选不同月龄香猪肝脏中差异表达的miRNA

为研究miRNA在香猪发育时期的调控功能,试验对3和7月龄香猪肝脏组织中存在表达差异的miRNA进行了筛选。提取3和7月龄香猪肝脏组织总RNA,通过与miRNA芯片杂交,经统计学分析,以变化倍数≥2倍（P<0.05）为阈值,筛选3和7月龄香猪肝脏中表达丰度差异的miRNA,并运用实时荧光定量PCR进行验证。结果发现,与3月龄相比,7月龄香猪肝脏中有11条miRNA表达下调和9条miRNA表达上调,下调倍数最多的是miR-27b,上调倍数最多的是miR-155。对选取的4条差异表达的miRNA进行实时荧光定量PCR反应,结果显示,4条miRNA表达变化趋势与芯片结果一致。本研究结果表明,不同月龄香猪肝脏中的miRNA表达丰度有差异,其中一些可能参与了机体生长发育时期肝细胞的脂肪代谢过程。     

从江香猪圆环病毒Ⅱ型血清学调查

为了解从江香猪圆环病毒病Ⅱ型感染情况,2014年9月至2015年8月分别采集从江县和榕江县非免疫香猪血清318份,用ELISA方法对全部样品进行检测。结果:抗体阳性率为66.04%(210/318)。表明在从江县和榕江县香猪主产区存在不同程度的圆环病毒Ⅱ型感染,且规模场的香猪感染率明显低于散养户。     

从江香猪和大白猪不同组织中GYS1、GYS2基因表达水平的研究

旨在研究糖原合成酶(GS)基因mRNA在从江香猪和大白猪表达情况,探究肌肉类型糖原合成酶(GYS1)和肝脏类型糖原合成酶(GYS2)基因表达规律。以大白猪和从江香猪为试验动物,分别提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、大肠、小肠、背最长肌、脂肪10个组织的总RNA,设计各自实时荧光定量引物,以猪GAPDH基因作为内参基因,应用实时定量PCR技术检测GYS1和GYS2基因不同组织中mRNA的相对表达量。结果发现:GYS1基因在大白猪和从江香猪所检测的组织中均有表达,在背最长肌中的表达量最高,且在大白猪背最长肌中表达量显著高于从江香猪(P0.05);GYS2基因在肝脏中表达量最高,其他组织中几乎不表达,具有肝脏组织特异性,且发现在从江香猪肝脏中表达量显著低于大白猪(P0.05)。本研究为GYS1和GYS2基因后续真核表达的研究提供了理论依据。     

从江香猪基因组中2个拷贝数变异区的多态性研究

为了研究从江香猪生长和繁殖差异与拷贝数变异拷贝数变异(copy number variation,CVN)之间的关系,采用实时荧光定量PCR方法,对从江香猪和大白猪基因组中的CNVR100与CNVR373的拷贝数进行了测定,并分析了从江香猪拷贝数与生长繁育性状之间的相关性。结果表明,从江香猪和大白猪基因组中都检测到CNVR100和CNVR373;与大白猪相比,从江香猪的CNVR100拷贝数较低,CNVR373拷贝数较高;相关性分析结果显示,从江香猪2个CNVRs与其体长和胸围有一定的负相关关系,表明这2个CNVRs的多态性可能对从江香猪的生长有一定的影响。     

来曲唑对香猪睾丸波形蛋白表达的影响

为探讨来曲唑对香猪睾丸细胞波形蛋白表达及分布的影响,试验将14日龄、体重3 kg的12头雄性香猪随机分为3组,对照组不做任何处理,试验组分别经口投喂0.1、0.2 mg/kg来曲唑,每3 d投喂1次,连续投喂15次,最后一次投喂7 d后取左侧睾丸,应用免疫组织化学方法检测波形蛋白在香猪睾丸细胞中的表达与分布.结果表明:...