2株地衣芽孢杆菌抗逆性及益生性的研究

对2株地衣芽孢杆菌(Bacillus clicheniformis)C10和C46进行耐酸性及耐胆盐等抗逆性试验,进而进行抑菌测定、产酸和产酶等益生性试验,对13种抗生素进行药敏性测定.结果表明,2株地衣芽孢杆菌C10和C46在pH 2.0、3.0和4.0的人工胃液中处理2和6 h,存活率均为94 %,0.03 %～0.3 %胆盐溶液里存活率均超过91 %,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K88和鸡白痢沙门菌均有明显的抑制作用,有机酸总量分别达到1 230.99和298.69 mg/L,蛋白酶活力分别为256和291 IU/mL,对10种抗生素有耐药性,对3种抗生素有药敏性.说明2株地衣芽孢杆菌具有很强的抗消化道生境及较好的益生功能.     

饲用地衣芽孢杆菌抗逆性与益生性的体外评价

为了探讨地衣芽孢杆菌的抗逆性与益生性,研究通过5个试验评定地衣芽孢杆菌的耐高温、耐酸性、耐胆盐、抑菌性和黏附性,于85℃水浴分别处理地衣芽孢杆菌2.5 min、5 min、7.5 min模拟制粒条件;利用pH值分别为2,3,4的人工胃液模拟胃液环境;用0.3%的胆盐模拟肠液环境;抑菌试验测定地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制能力;以蛋鸡肠道上皮细胞为模型测定地衣芽孢杆菌的黏附能力。结果表明:85℃处理地衣芽孢杆菌2.5 min后活菌数最高,与对照组相比提高了2.25%(P>0.05);用pH值为2,3,4的胃液分别处理,与对照组相比活菌数分别提高0.77%(P>0.05)、1.54%(P>0.05)、1.34%(P>0.05);地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分别为0和16.16 mm;在黏附性试验中,每100个蛋鸡肠道黏膜上皮细胞上平均可以黏附27个地衣芽孢杆菌。说明制粒过程、人工胃液、人工肠液不影响地衣芽孢杆菌的活菌数,地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌有显著抑制作用,使金黄色葡萄球菌基本不能在蛋鸡消化道内定植。     

6株猪源芽孢杆菌的分离鉴定及其益生性研究

本研究旨在通过高温处理和常规厌氧菌分离法从健康肥猪粪便中分离芽孢杆菌,并通过培养性状、生化试验、PCR、肠道耐受、抗菌活性和接种试验动物等方法鉴定筛选性状稳定、优良的益生性芽孢杆菌。结果显示,共分离到6株芽孢杆菌,其中1株巨大芽孢杆菌、1株死谷芽孢杆菌、2株解淀粉芽孢杆菌和2株枯草芽孢杆菌;分离菌对多黏菌素和青霉素耐药性较强,对其他12种常用药物较敏感,对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好;4种芽孢杆菌均可在酸性、高胆盐和高温条件下生存,特别是巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌耐受能力较强;分离的芽孢杆菌对小鼠均无致病性,其中巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌有较明显的促进试验动物生长的作用。结果提示,巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌可作为益生性芽孢杆菌的初步选择。     

功能性益生菌菌种的选育和益生性研究

本研究从新疆、内蒙古分离到30株乳酸杆菌和乳酸球菌,经过鉴定并选择发酵性能较好的菌种进行进一步的研究.经过对益生乳杆菌人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性、胆固醇降解能力等益生特性的研究,得出植物乳杆菌BN-3、BN-5、罗伊氏乳杆菌AL3、鼠李糖乳杆菌AL20具有较好的益生特性.     

益生性酵母菌的筛选与鉴定

采用YPD平板从青海牦牛瘤胃和西藏青稞酒糟中筛选酵母菌,并对其进行形态学、分子生物学特性、生理生化特性和益生特性鉴定.试验结果表明:从青海牦牛瘤胃中筛选到马克斯克鲁雏酵母菌3株,从西藏青稞酒糟中筛选到酿酒酵母菌4株,毕赤酵母菌2株,其中毕赤酵母菌JZ10起酵时间短,环境适应性强,有广泛的药物敏感性且对金黄色葡萄球菌和沙...     

降解霉菌毒素乳酸菌的筛选及鉴定

本试验旨在获得可高效降解霉菌毒素和具有益生特性的乳酸菌,为后期其作为饲料添加剂在饲料中应用奠定基础。试验通过对分离自青海牦牛和藏羊瘤胃中的169株乳酸菌进行霉菌毒素降解能力比较,以及形态学、生理生化特性、分子生物学、益生性和安全性的综合评定,最终获得4株可以同时降解饲料原料中4种真菌毒素的菌株（菌株C2、E28、C16和A16）。在本研究中,初筛获得的15株乳酸菌对黄曲霉毒B1(AFB1)、呕吐毒素（DON）、玉米赤霉烯酮（ZEA）和硫代葡萄糖苷（GLUS）的降解率最高分别为70.95%、60.11%、64.00%和59.18%;复筛获得的4株乳酸菌对AFB1、DON、ZEA和GLUS的降解率分别为33.53%、60.18%、51.45%和43.41%。16S rRNA测序结果表明：菌株C2和E28为乳酸片球菌,菌株A16为戊糖片球菌,菌株C16为乳肠球菌;这4株乳酸菌起酵时间短,产酸能力强（pH<4.5）,能在pH 3.5和胆盐浓度为0.1%的环境中正常生长,且有良好的自凝集力和疏水性。通过安全性试验得知,4株乳酸菌均不溶血,其中乳肠球菌C16和戊糖片球菌A16对红霉素和青霉素...     

南宁地区种猪源非解乳糖链球菌的分离鉴定及其益生性研究

研究旨在从健康种猪新鲜粪便分离鉴定非解乳糖链球菌,并研究其益生特性,为该菌种的应用提供依据.通过16 S rRNA的方法鉴定出非解乳糖链球菌,用平板打孔法研究其抑菌性能,以IPEC-J2为细胞模型研究非解乳糖链球菌的粘附性,并利用酸性培养基、胆盐培养基和模拟胃肠液来研究其抗逆能力.结果表明,从26份种猪粪便样品中分离鉴...     

羊瘤胃乳酸菌的分离鉴定及抗逆性筛选

为开发羊源乳酸菌菌种资源,从健康成年散养山羊瘤胃内容物中分离乳酸菌,经生化试验、基因测序以及同源性分析、构建遗传进化树等方法对分离出的乳酸菌进行鉴定,并通过耐酸和耐胆盐试验筛选抗逆性良好的乳酸菌.结果表明:从散养山羊瘤胃内容物中分离出11株乳酸菌,将其编号为R1～R9、R11和R12;其中R1、R2为杜氏肠球菌,R3、...     

一株强抗逆性猪源乳酸菌的筛选及生物学特性研究

本试验从健康仔猪粪便样品中分离纯化得到5株乳酸菌,并应用16S rRNA基因进化分析对其进行种属鉴定。通过对此5株菌进行耐热、耐酸、耐胆盐、耐贮藏性能和抗生素抗性选育,与伤寒沙门氏菌、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌进行混合培养,探究其对大肠杆菌、鸡白痢沙门等病原菌的抑菌效果,最终筛选出一株具有强抗逆性和优良益生特性的屎肠球菌,并进一步对其生长性能和生理生化特性进行了系统研究,为菌株的开发与应用提供理论参考。 [关键词] 仔猪粪便|屎肠球菌|筛选|抗逆性|益生特性     

一株新饲用乳杆菌的分离鉴定及益生性研究

从猪粪便中分离得到一株新饲用乳杆菌,对其16S rDNA基因进行了测序,该段基因序列已提交GenBank,登录号为HQ641209。将该菌株16S rDNA基因序列进行在线BLAST比对并与其他乳杆菌属菌株的16S rDNA序列建立系统发育树,结果显示该菌16S rDNA序列与NCBI公布的约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii (AB295648)的同源性为99.7%,因此该菌鉴定为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),将其命名为"Lactobacillus johnsonii Sun001"。经测试,该菌株对E.coli K88、K99菌株的生长有抑制作用,在pH为2.5的模拟胃液中处理3 h存活率为68.8%,在0.3%胆盐浓度的模拟肠液中处理3 h存活率为21.4%。     

猪源乳酸杆菌的安全性及抗逆性评价

对本实验室自行分离自猪肠道的3株乳酸杆菌进行安全性和抗逆性检测,采用体外法对分离自不同生理阶段猪(仔猪、生长肥育猪、母猪)肠黏膜和食糜的罗伊乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LA5、植物乳杆菌(L.plantarum)L47和约氏乳杆菌(Ljohnsonii)L63进行生长特性、溶血性、有害代谢产物、...     

降解黄曲霉毒素枯草芽孢杆菌的解毒性、抗菌性及抗逆性研究

试验对筛选得到的高效降解黄曲霉毒素B1、G1和M1的枯草芽孢杆菌(霉立解060菌)进行解毒活性、抗菌活性及抗逆性研究。将枯草芽孢杆菌发酵液分成上清液、菌悬液和胞内液组分,验证各组分对黄曲霉毒素的解毒效率。试验结果表明,枯草芽孢杆菌发酵后的上清液对AFB1、AFG1和AFM1的降解活性最高,确定发酵后的上清液中存在解毒活性组分;对解毒活性物质进行加热和蛋白酶K变性处理后,解毒活性显著降低,表明起解毒作用的活性物质是其分泌的一种胞外酶;试验进一步证明枯草芽孢杆菌具有显著抑制大肠杆菌、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌,抵抗胃酸、胆盐、高温等不利环境的特性,具有很强的抗菌性和抗逆性。     

健康仔猪肠道内抗逆性乳酸菌的选育

仔猪腹泻在兽医临床上十分普遍,它严重的影响和制约着仔猪的存活率及养殖者的经济收入.市场上治疗仔猪腹泻的药物很多,但存在药物残留问题.研究开发无毒、无副作用和无残留的益生菌制剂已成为热点课题.1998年美国动物饲粮管理协会(AAFC0)年鉴公布了43种可用作益生素的菌种,其中半数以上是乳酸菌(lactic acid bacite-ria)[1].因此,乳酸菌在益生菌制剂的研究和生产中扮演着重要的角色.本试验的目的是从健康仔猪的新鲜粪便中分离、选育出抗逆性(耐酸、耐胆盐)强的乳酸菌菌株,用于防治仔猪肠道疾病.     

猪源乳酸菌抑制致病性大肠埃希菌研究

为筛选能够抑制猪源致病性大肠埃希菌的优势乳酸菌,采集不同日龄的健康仔猪新鲜粪便,分离纯化得到35株疑似乳酸菌。应用牛津杯法对3株致病大肠埃希菌抑制作用进行研究,筛选出2株有抑菌作用的疑似乳酸菌(11号和14号)。利用生化鉴定和16SrDNA序列同源性分析,该两株菌被鉴定为乳杆菌属唾液乳杆菌;综合牛津杯法和生长曲线、pH的测定结果,筛选出产酸性能和抑菌效果好的14号菌株,为研制仔猪用微生态制剂奠定了基础。     

鸡源卷曲乳杆菌Y68的分离鉴定及其体外益生特性评估

本试验旨在筛选研制畜禽微生态制剂——乳酸菌,探究卷曲乳杆菌Y68的益生特性。通过抑菌能力筛查、生长曲线测定、产酸性能、药敏试验、体外模拟胃肠道条件耐受试验、自凝集试验以及疏水性试验,评估了其益生特性。结果表明：卷曲乳杆菌Y68对鸡白痢沙门氏菌ATCC19945、金黄色葡萄球菌USA300均有较强的抑制作用,抑菌圈直径分别为（21.64±0.31） mm、（15.13±0.23） mm;卷曲乳杆菌Y68对数生长期为6～24 h;经培养48 h后菌液pH稳定在3.89;卷曲乳杆菌Y68对红霉素、青霉素、头孢菌素、氯霉素、万古霉素、克林霉素较为敏感,对诺氟沙星、氧氟沙星、四环素、庆大霉素、呋喃唑酮表现出耐药;卷曲乳杆菌Y68在pH 2.0环境下孵育3 h存活率为52.61%,在人工胃液环境下3 h存活率为65.92%,在人工肠液环境下10 h时存活率仍为86.23%,能够耐受0.3%的胆盐环境;卷曲乳杆菌Y68自聚集率在2、24 h时分别为（29.71±0.40）%、（97.23±0.76）%,疏水率为（89.59±0.63）%。综上所述,卷曲乳杆菌Y68具有较强的产酸能力、抑菌能力,对模拟...     

猪源乳酸菌分子生物学鉴定及黏附性特征

采用16S rDNA序列分析法对实验室分离得到的3株乳酸菌(标号分别为H菌、031菌和HN菌)进行分类鉴定.结果显示H菌、031菌和HN菌16S rDNA序列相似性为99％的对应菌株分别是唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii);以永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02作为体外模型,通过革兰氏染色法观察,结果表明:H菌在4h、8h、12h、16h、20h、24h和28h对猪小肠上皮细胞的黏附性不同,其中以孵育16h和20h的菌黏附性最好,处于该菌生长稳定期,单个细胞黏附细菌个数分别达到14.61±7.23和15.20±4.18个.     

猪源乳酸菌对致病性大肠杆菌的体外抑制作用

对从健康仔猪肠道分离的12株乳酸菌菌株进行耐酸试验和耐胆盐试验,筛选出4株有效菌株。分别将这4株乳酸菌单独、混合与K88共培养;取4种乳酸菌单独和混合培养的菌液、发酵滤液和菌体用牛津杯做K88抑制试验;分别将培养滤液经过乳酸脱氢酶和碱处理做K88抑制试验。结果表明:4种乳酸菌皆具有抑菌功能,但相互之间有差异;用乳酸脱氢酶或碱处理后抑菌能力明显下降,说明乳酸菌是通过产生有机酸尤其是乳酸对K88进行有效抑制。4种菌混合培养的抑菌能力强于单独培养。     

猪源益生性芽孢杆菌的筛选与鉴定

选用革兰染色和芽孢染色的方法,从健康仔猪的新鲜粪便中筛选出37株芽孢杆菌,其中有11株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强抑制效果,并对这11株菌进行猪胆盐、人工胃液、人工肠液和硫酸铜的耐受力试验及分泌淀粉酶、蛋白酶和纤维酶的能力进行测定。试验结果显示:猪肠源性芽孢杆菌对胆盐和人工消化液有较好的耐受性;微量元素铜离子对芽孢杆菌的增殖有抑制作用;芽孢杆菌都能产生淀粉酶,但是产纤维素酶和蛋白酶都不明显。从中挑选出各种特性较好的1株YB5进行生理生化及16S r DNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌。     

犊牛源乳酸菌的筛选及抑菌性能研究

从15日龄健康犊牛的肠道黏膜和食糜分离得到31株革兰氏阳性、无芽孢乳酸菌。通过耐消化道环境筛选得到4株乳酸菌M5、M7、SB1和Z4,在pH=2条件下处理2h后的存活率分别为39.24%、28.08%、44.20%、23.28%,有较强的耐牛胆盐能力,经人工胃液处理后各菌的存活率均可达到30%以上,且活菌数超过108CFU/mL。能抵御体外模拟的胃肠道逆环境的影响,且对大肠杆菌的抑制作用明显,抑菌圈直径为16～21mm。     

2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究

研究了分离自仔猪肠道的乳酸菌L5和L7对低pH值、胆盐的耐受性。结果表明，pH值在2．5、3．5和4．5时，L5菌株处理150min对其无显著影响，在pH1．5时经30min处理，L5仍可维持较高的存活率；L7菌株在pH3．5和4．5条件下经150min处理后可保持较高的存活率，而在pH1．5和2．5条件下经处理30min后菌株数量显著下降。胆盐对L5和L7菌株的生长有一定影响，但低浓度短时间内影响较小。在同一胆盐浓度下，随培养时间的增长，活菌数下降。当胆盐浓度高于0．2％时，L5和L7菌株的生长极差。热稳定性试验结果表明，L5菌株在50℃下可成活，且呈正常生长趋势，但其对80℃及以上的耐热能力显著降低。