棉花抗黄萎病育种中鉴定菌株的选择

通过１８个菌株对２３个不同抗、感品种的棉花苗斯接种试验,及１０个菌株对９个苏棉１２号Ｒ和１个南农１号耐黄萎病株行的苗期和吐絮期病指相关分析,明确了要培育出能在大多数病区都表现抗病的棉花品种,应以Ｖ２５、ＸＳ４这样的强致病力菌株作为病圃鉴定菌株。棉花抗黄萎病育种目标应以抗强致病力或落叶型菌系为主。     

内生菌73a防治棉花黄萎病机理

通过在棉株 4叶期针刺接种内生菌 73a ,测定其体内POD、SOD酶活性 ,结果显示 :棉株体内的POD、SOD酶活性较对照 (不接种 )明显上升 ,可见 ,内生菌 73a诱导了POD、SOD酶活性的提高。挑战接种 (先接内生菌再接棉花黄萎病菌 )结果 ,棉株体内的POD、SOD酶活性均增高 ,其中 ,接种落叶型黄萎病菌棉株体内酶活性高于接种非落叶型菌棉株 ;抗病品种“常抗棉”体内酶活性高于同期感病品种“泗棉 3号”。     

大丽轮枝菌致病力与寄主棉苗落叶的相关性

以棉花黄萎病菌强致病力菌株Vd084、Vd082和弱致病力菌株Vd001为供试菌株,以耐病品种中棉所35和感病品种冀棉11为鉴别寄主,采用蛭石沙土无底纸钵定量蘸菌液体法,首先明确棉花黄萎病菌致病力与落叶间的关系,然后采用大丽轮枝菌落叶型菌株特异引物D-1/D-2和非落叶型菌株特异引物ND-1/ND-2对供试菌株进行分子检测。结果表明,1×107 mL-1的常规接种量下,3个菌株均能导致棉苗出现落叶;与弱致病力菌株相比,强致病力菌株出现落叶的时间早3d,且落叶株率高。在接种量为1×105~1×107 mL-1,强致病力菌株的落叶株率显著高于弱致病力菌株,当接种量达到1×108 mL-1时,强致病力菌株和弱致病力菌株间差异不明显。3个菌株在耐病品种上的落叶株率(28.8%)显著低于感病品种(37.7%)。分子检测表明,2个强致病力菌株Vd084和Vd082为落叶型菌株,弱致病力菌株Vd001为非落叶型菌株。结果显示,该2对引物检测出的非落叶型菌株Vd001在温室苗期人工接种条件下仍能导致棉苗落叶。可见,对于落叶型棉花黄萎病菌的检测还需要建立更完善的方法,尤其是模拟大田间条件的检测方法更为重要。     

北疆棉区棉花黄萎病菌培养性状及致病力分化

【目的】 研究新疆北疆棉区棉花黄萎病菌的致病类型、培养特性及致病力分化。【方法】 从北疆主要植棉区采集棉花黄萎病病株,利用大丽轮枝菌特异引物VDS-F/VDS-R、落叶型菌系特异性引物D1/D2、非落叶型菌系特异性引物ND1/ND2对所有分离的菌株进行检测;根据落叶型和非落叶型菌株在单个条田中所占的比例对田间地块进行分析;选取18个代表菌株对其在PDA上的培养特性及对棉花的致病力分析。【结果】 从北疆棉田病株上分离到644个大丽轮枝菌菌株,67.5%的菌株为落叶型菌系,27.8%为非落叶型菌系,4.7%菌株不能归类,供试菌株的致病类型存在分化,其中以落叶型菌系为主要致病类型。对田间地块进行分析,单一落叶型菌株发生的地块最多,其次是落叶型和非落叶型菌株混合发生地块,田间以落叶型菌株为优势菌株的地块占70.1%,落叶型菌系为田间地块的主要致病类型。18个代表性菌株形成菌核型、菌丝型和中间型3种菌落类型,菌核型为主要的培养类型,并进一步分化形成3种不同的类型。对棉花感病品种的致病力进行测定,落叶型菌株引起的病指普遍高于非落叶型菌株引起的病指,非落叶型菌株中也有病指很高的菌株,北疆棉花黄萎病菌的致病力存在明显分化。【结论】 北疆棉田采集的棉花黄萎病菌,其致病类型、培养特性及致病力均存在明显分化。     

新疆陆地棉品种抗枯、黄萎病鉴定

通过对供试的20个新疆陆地棉品种在苗期、花蕾期、吐絮期和剖杆检查进行抗枯、黄萎病的鉴定。结果显示,在抗枯萎病鉴定中,没有发现对枯萎病免疫及高抗品种,其中抗病品种有1个,耐病品种有2个,感病品种有11个,特别高感的品种有6个;在非落叶型病圃抗黄萎病鉴定中,没有发现对黄萎病免疫材料,高抗品种有1个,抗病品种3个,耐病品种7个,特别高感的品种有9个;而在落叶型病圃鉴定中,也没有发现对黄萎病免疫和抗病的品种,其中耐病品种有2个,感病品种有8个,高感品种10个。     

棉花植株内黄萎病菌致病类型的快速检测

[目的]建立一种能从棉花植株中快速检测黄萎病菌致病类型的方法,为黄萎病菌致病类型的大面积普查打下基础.[方法]利用Dneasy Plant Mini Kit试剂盒对落叶型标准菌株592和非落叶型标准菌株511及病圃中显症前后不同时期棉花植株DNA进行提取,然后用落叶型引物DB19/DB22、DB19/espdef01和非落叶型引物NDf/ NDr、InND2f/InND2r对所提DNA进行巢式PCR扩增.[结果]使用落叶型引物只在592菌株和落叶型病圃的病株中检测到目标条带,使用非落叶型引物只在511菌株和非落叶型病圃的病株中检测到目标条带.[结论]该试剂盒可以有效地提取棉花植株中的DNA,供试的两套引物对检测植株中棉花黄萎病菌致病类型具有高度特异性,该法可直接检测棉花植株中黄萎病菌的致病类型.     

浙江棉花黄萎病菌致病型菌株的鉴定及高温抑制病害的表征分析

用大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)落叶和非落叶致病型菌株特异性引物扩增并结合微菌核特征观察,鉴定了浙江地区棉花黄萎病菌菌株的致病型,测定了温度对病原菌生长发育的影响,分析了浙江地区夏季高温对棉花黄萎病抑制现象的原因。特异性引物的聚合酶链式反应扩增结果表明,来自于浙江的5个代表性分离菌株(VD-h1、VD-h2、VD-h6、VD-h3和VD-h5)均属于落叶型菌株。对不同类型菌株产生微菌核的观察结果证实,落叶型和非落叶型的微菌核间形态及其长宽比存在差异。温度对病原菌发育的影响结果显示,来自浙江的2个菌株(VD-h1和VD-h6)和来自新疆的2个菌株(VD-101和VD-086)的最适生长温度分别在22~28℃和22~26℃之间;32℃高温显著抑制了菌丝生长和分生孢子产生,并延迟了分生孢子萌发的时间。不同温度试验的结果间接证实了,棉花黄萎病在浙江夏季高温条件下表现的隐退症状是因为高温抑制了病原菌的生长和繁殖,这为病害发生规律研究提供了重要的科学数据。     

土壤中落叶型棉花黄萎病菌的分子检测方法

为了建立快速、准确检测土壤中落叶型棉花黄萎病菌的方法,本试验将提取自落叶型棉花黄萎病菌菌株V991的DNA稀释成不同浓度,同时提取在灭菌土中接入不同数量的V991孢子后制成的人工病土中的DNA,并采用五点取样法提取自然土样中的DNA,选用落叶型黄萎病菌的特异性巢式PCR引物,对上述DNA样品进行检测.结果显示:采用巢式...     

江苏省棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)致病力的分化

自江苏省主要产棉区分离到棉花黄萎病菌(V.dahliae)17个菌株,在棉花苗期,用一定浓度的孢子悬浮液蘸根接种,接种后在23—25℃的温室内培养,观察发病的反应型.根据各菌株在海岛棉米努菲416、中棉江阴白籽、陆地棉陕西721、鲁棉1号及徐州142等不同抗性的棉花品种上的反应型,测定菌株致病力的强弱显然不同,可分为致病力强的Ⅰ型、致病力弱的Ⅲ型和致病力中等的Ⅱ型.致病力强的Ⅰ型引起落叶,亦称作落叶型菌株,目前只在我国局部地区发现。除棉花外,致病力强弱不同的菌株接种在大豆、豇豆等11种植物上的症状反应也有明显的盖异.     

抗虫棉新品种鲁棉研32号特征特性与栽培技术

鲁棉研32号属中早熟常规抗虫棉品种,在山东省抗虫棉区试和生产试验中,产量表现突出,皮棉和霜前皮棉分别比对照DP99B增产15%以上,纤维品质优良,抗枯萎耐黄萎病,抗棉铃虫性稳定.2008年3月通过山东省作物品种审定委员会审定.     

辽宁棉区黄萎病病菌分离鉴定及致病力分析

在辽宁省主要棉区采集黄萎病病株进行分离,得到SY-1、SY-2、SY-3等3个黄萎病病菌菌株。用强致病力菌种V991作对照,进行菌落形态观察试验、产孢特征试验、致病力鉴定试验等。结果表明,分离出的菌种为典型的大丽轮枝菌,菌落形态和产孢特性与对照基本一致,但致病力较弱。提出育种中应当注意从2个方面开展工作:一是在计划推广地区开展中高世代的选育,二是在相应地区收集典型菌株,建立和改造棉花黄萎病病圃,才能提高育种的成功率。     

陆地棉VR018抗黄萎病QTL定位

黄萎病是棉花生产中的主要病害。由于陆地棉中严重缺乏高抗黄萎病的品种,棉花抗黄萎病育种研究进展缓慢。本研究室从泗棉3号与中植棉2号杂交后代中选育获得1个黄萎病抗性显著提高的新品系苏VR018,利用3 100对SSR引物对泗棉3号和苏VR018进行多态性分析,获得具有多态性的标记32个;以苏VR018为母本,泗棉3号为父本,杂交构建包含312个单株的F2群体,构建包含17个位点和6个连锁群的连锁图谱。F2∶3家系接种落叶型黄萎病菌V991,调查抗病性,通过复合区间作图法共检测到4个与棉花抗黄萎病相关的QTL,分别位于染色体A5、染色体D5、染色体D5和染色体D6染色体上,表型贡献率分别为6. 41%、3. 78%、4. 61%和5. 78%。单标记分析检测到与黄萎病抗性显著关联的位点5个,分别为NAU3212、MGHES40、DPL209、CIR181和NAU5204,解释表型变异分别为6. 38%、1. 50%、2. 80%、2. 10%和2. 20%。本研究为深入解析中植棉2号的抗黄萎病遗传机制奠定了理论基础。     

江苏省大丰市棉花黄萎病菌培养特性及致病力分化

对2008年至2009年采自江苏省大丰市植棉区的22个棉花黄萎病菌菌株进行了培养特性及致病力分化方面的研究.依据在PDA培养基上生长时形成微菌核的数量,将菌株分为3种培养类型,其中菌核型占86.4％,菌丝型占9.1％,中间型占4.5％.采用已报道的落叶型与非落叶型的特异性引物对上述菌株进行致病类型的检测发现,落叶型菌株占81.8％,非落叶型菌株仅占18.2％.苗期致病力测定表明大丰市植棉区的棉花黄萎病菌存在明显的致病力分化,甚至在同一田块所分离的菌株也存在致病力的差异分化.     

棉花播种时应注意的几个问题

一、科学选用合适的优良品种: (1)肥水条件好的棉田安排春棉或春套种植,最好选用单株生产能力大的抗虫杂交棉品种,如纳米技术处理过的鲁棉研15、鲁棉研20.(2)肥水条件较好但用种量较多,要选用出苗特性好,生长势强,丰产性高的品种,如纳米技术处理过鲁棉研21、鲁棉研22、丰抗棉六号、鲁棉研16等.(3)黄萎病发生重,多年连作的老棉田,选用纳米技术处理过的鲁棉研22、中棉研45、鲁棉研18,DP99B等.(4)土质沙性较大,后期容易早衰的棉田选用纳米技术处理过的中棉研45、鲁棉研22等.     

江苏省棉花黄萎病菌培养特性与致病力的相关性研究

在2002年从江苏省各地分离的棉花黄萎病菌可分为3种培养类型，菌丝型菌株占45．5％。江苏省早期分离鉴定出的落叶型菌株V151和VD8属于菌丝型，用于棉花品种抗病性病圃鉴定的菌株BP：属于中间型菌株。液体培养时，菌丝型菌株培养液的颜色呈淡黄色或黄绿色。苗期致病力测定结果表明，菌丝型菌株与中间型菌株BP2相比，表现出发病早的特点。     

棉花品种对黄萎病抗性的苗期鉴定

1982—1983年对征集的134个棉花品种(品系)进行苗期抗病性测定。结果是棉花品种对黄萎病菌的反应因菌株的致病力强弱而不同。对于致病力中等的Ⅱ型菌株VD-2~[2],高抗品种与抗病品种占绝大多数,分别为测定品种数的32.1％及27.6％,只有26.9％的品种表现感病;相反,对于致病力强的Ⅰ型(落叶型)茵株VD-8~[2],高抗与抗病品种只占少数,依次为5.3％及8.8％,绝大多数品种(77.9％)表现感病。在测定的品种中两年表现一致或基本一致的占所测定品种的73.9％。通过测定,筛选出对菌株VD-2高抗的品种19个,抗病品种13个,耐病品种8个。其中632-174和陕西所3215对菌株VD-8表现高抗,陕西5245、岱字55、Rch713、陕西68-420及河南7913等5个品种对菌株VD-8表现耐病。     

湖北省棉花黄萎病菌致病力分化和遗传多样性分析

测定了源于湖北省棉区的15个棉黄萎病菌单孢菌株（简称湖北菌株）和2个落叶型棉黄萎病菌菌株T9和V991对4个棉花品种上的致病力。采用随机引物聚合酶链反应（RAPD）技术分析了这些菌株的遗传多样性。结果表明：供试的17个棉黄萎病菌之间的致病力存在显著差异（P〈0．05）。在各个棉花品种上,15个湖北菌株中都有致病力与T9或V991的致病力差异不显著的菌株。综合分析表明：菌株T9的致病力最强,6个湖北菌株的致病力相当或强于菌株V991,7个湖北菌株的致病力中等,2个湖北菌株的致病力较弱。4个供试棉花品种中中棉12较耐黄萎病。RAPD分析表明供试的27个随机引物（10碱基）中10个可以从17个菌株的基因组DNA中稳定地扩增出多态性DNA片段。对扩增片段统计结果表明,供试菌株间遗传相似系数变化幅度为0．37～1．00。聚类分析表明,在阈值0．68处,17个黄萎病菌菌株可划分为2个RAPD群（RAPD group,简称RG）,湖北省的9个菌株和V991属于RG1,另外6个菌株和T9属于RG2。综合以上结果可以看出湖北省的棉黄萎病菌种群存在着明显的致病力分化和丰富的遗传多样性。     

双价转基因抗虫低酚棉的抗病虫特性研究

研究了2个转Bt+CPTI双价基因抗虫低酚棉"C020"和"C022"的抗虫性及抗病性,室内棉叶鉴定结果显示,2个抗虫低酚棉对棉铃虫的抗性表现为低抗,其抗性虽略高于常规有酚棉"泗棉3号",但明显不如抗虫有酚棉"SGKz9";而田间罩笼接蛾鉴定结果显示,2个抗虫低酚棉的抗性综合评价均表现高抗,其抗性等级与抗虫有酚棉"SGKz9"一致,明显优于有酚常规棉"泗棉3号"。但抗虫低酚棉的抗病性表现一般,其中"C020"高抗枯萎病、感黄萎病;"C022"耐枯萎病、感黄萎病。     

新疆棉花黄萎病菌营养体亲和性的量化评估及其营养体亲和群体研究

从 16个采自新疆不同棉区的棉花黄萎病菌 (Verticilliumdahliae)菌株和 3个落叶型与非落叶型对照菌株上共获得 2 2 5个不能利用硝酸盐的营养体突变株 (nitmutants)。经不同氮源利用的鉴定 ,89 33%属于nitA ,9 33%属于nitB ,1 33%属于nitC ,其中nitC在以NaNO2 作为唯一氮源的MO2 培养基上被完全抑制致死。nitA配nitB的营养体亲和性测定结果 ,16个新疆菌株均与非落叶型对照菌株亲和———属于同一营养体亲和群 (VCG) ,未发现新疆有与落叶型对照菌株亲和的棉花黄萎病菌。以互补指数作为营养体亲和性量化评估指标 ,反映出不同突变类型间亲和性差异较大 ;同一VCG内不同菌株间互补指数也有差异 ,但无明显规律     

吉林省大丽轮枝菌培养性状与遗传特性及致病性分析

茄子黄萎病发生在门茄坐果后,是危害茄子生产的重要病害.茄子黄萎病由大丽轮枝菌引起,为深入研究吉林省大丽轮枝菌的群体遗传变异,对分离自吉林省的36株大丽轮枝菌进行培养性状观察、遗传特性分析和致病性鉴定.大丽轮枝菌菌株在PDA培养基上培养14 d后形成菌核型、中间型2种菌落形态,其中83.3％的为菌核型,16.7％为中间型,未分离得到菌丝型菌株.利用PCR技术检测大丽轮枝菌的Ave1无毒基因、致病类型、交配型.结果表明,36株大丽轮枝菌均不含Ave1无毒基因,致病类型均为非落叶型,交配型均为MAT1-2.选取6株大丽轮枝菌进行致病性鉴定,结果表明,6株大丽轮枝菌均可不同程度引起茄子黄萎病,其中2号大丽轮枝菌菌株致病力最强,4号菌株致病力最弱.研究结果可为茄子抗黄萎病育种和针对性制定茄子黄萎病防控方法提供技术支持.