弗氏链霉菌tylF基因的克隆及其生物信息学分析

[目的]研究弗氏链霉菌tylF基因的克隆及其生物信息学分析。[方法]利用RT-PCR技术、巢式PCR技术和RACE技术从弗氏链霉菌B-62169菌株中克隆获得tyl F基因的全长c DNA序列,并对其生物信息学进行分析。[结果]经Vector NTI 11.0软件拼接获得tyl F基因全长c DNA序列长度为1 245 bp,并带有19 bp长的Poly(A)尾巴,包含927 bp的开放读码框(ORF),编码一个含309个氨基酸残基的蛋白质。生物信息学分析结果表明,tyl F基因编码的酶是大菌素-O-甲基转移酶,参与分子功能中甲基转移酶活性和生物学途径中甲基化过程。对tyl F基因全长c DNA序列进行蛋白质结构域分析,证实该基因编码Tyl F蛋白,并具有223个氨基酸蛋白结构域。[结论]该研究为阐明泰乐菌素生物合成过程中甲基化反应机理,更进一步研究大环内酯类抗生素生物合成代谢途径提供生物信息学数据支持。     

—株分解羽毛角蛋白的弗氏链霉菌变种的初步鉴定

自土壤中分离到链霉菌Ｓ－２２１菌株，该菌株对羽毛角蛋白有较强的分解利用能力。通过对该菌的培养特征、形态特征和生理生化特性测定，结果与已知的弗氏链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉ－ａｅ）形态特征和生理生化特性上基本相似，但在培养特征和分解利用羽毛角蛋白的特性方面有较大的差异。因此Ｓ－２２１菌株初步鉴定为弗氏链霉菌的一个变种，定名为弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉａｅｖａｒ．Ｓ－２２１Ｔｕ，１９９３）。     

1株抑制镰刀菌生长及产生伏马菌素链霉菌的分离和鉴定

【目的】从采自深圳近海红树林泥土中分离筛选到抑制再育镰刀菌生长和产生伏马菌素B1(FB1)的菌株,并对其进行鉴定,为控制食品中真菌毒素污染提供新途径。【方法】采用镰刀菌产毒素试验及生长对峙法,从采自红树林泥土中分离筛选目标菌株;根据菌株形态和培养特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析,对目标菌株进行鉴定。【结果】从红树林泥土中分离到1株可抑制再育镰刀菌产生FB1和生长的菌株SZ1-6,初步确定该菌株属于卡伍尔链霉菌。菌株SZ1-6发酵液可显著抑制再育镰刀菌产生FB1,产毒抑制率达67%以上;菌株对再育镰刀菌生长也具有一定的抑制效果。【结论】筛选到1株对再育镰刀菌产FB1和生长均有抑制效果的链霉菌菌株SZ1-6,说明从海洋资源中寻找产抗生素的天然放线菌是可行的。     

弗氏链霉菌变种S-221所产生物活性物质对细菌、霉菌及酵母类抑菌效果的初步研究

弗氏链霉菌变种S-221的摇瓶发酵液用无水乙醇提取,制备成弗氏链霉菌变种S-221生物防腐剂200倍稀释液,分别在牛肉膏蛋白胨培养基平板上测定了5种不同的细菌,在马铃薯葡萄糖培养基平板上测定了5种霉菌和3种酵母菌。除大肠杆菌的抑菌效果为94.2%和金黄色葡萄球菌的抑菌效果为98%以外,其余菌的抑菌效果达到100%;对制备好的平板暴露在空气中自然接种微生物的抑菌效果也达到100%。     

生防菌弗氏链霉菌S-221所产抗菌物质的抗菌活性测定

对弗氏链霉菌S-221所产抗菌物质的抗菌活性进行研究,通过弗氏链霉菌S-221所产抗菌物质对7种细菌和10种植物病原真菌的抗菌活性测定,抗菌活性物质对被检测的大肠杆菌7种细菌最低抑菌质量浓度为:O.098～3.130 mg/L;抗菌活性物质分别对水稻纹枯病等供试10种病原真菌的EC50为0.39～4.83 mg/L和E...     

生防菌弗氏链霉菌K-7所产抑菌物质的稳定性研究

为探明生防菌弗氏链霉菌K-7发酵液上清中抑菌物质的成分及其在功能性肥料中添加使用的可能性,对生防菌弗氏链霉菌K-7所产抑菌物质分别通过60和80℃高温处理4h和100g·L~(-1)的高浓度KH_2PO_3处理48h后,采用菌丝生长速率法测定发酵液上清抑菌物质的抑菌效果来研究K-7所产抑菌物质的稳定性。结果表明:生防菌弗氏链霉菌K-7所产抑菌物质经过60和80℃高温处理4h抑菌活性无明显变化,说明所产抑菌物质对高温稳定;和100g·L~(-1)的高浓度KH_2PO_3复配后抑菌活性显著优于单独发酵液上清,显著优于单独的亚磷酸二氢钾溶液,说明所产抑菌物质在高盐条件下稳定。为所产抑菌物质的纯化、成分分析及在功能性肥料中添加使用提供了一定的理论基础,具有较广的应用前景。     

弗氏链霉菌变种S-221所产生物活性物质抑菌活性的初步研究

利用无水乙醇分别从弗氏链霉菌变种S-221摇瓶发酵液的上清液和菌丝体中提取生物活性物质,分别对不同细菌、酵母菌和霉菌进行抑菌活性的测定。结果表明,上清液和菌丝体的乙醇提取液对蜡质芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、啤酒酵母、木霉、毛霉、黑曲霉均有较强的抑菌活性。     

链霉菌分解角蛋白的生化机制研究：Ⅱ角蛋白分解过程中含硫化？…

弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种在分解利用羽毛角蛋白过程中产生角蛋白酶,使角蛋白不断地降低解成多肽或游离氨基酸的同时,角蛋白中的硫也随之转移成巯基化合物,Ｈ２Ｓ和硫酸盐３种含硫化合物形式存在于分解产物中,并对３种含硫化合物形成过程进行了初步探讨。     

乙酰异戊酰泰乐菌素的合成

以泰乐菌素为原料,经过乙酰化、异戊酰化、醇解反应,合成乙酰异戊酰泰乐菌素(Acetylisovaleryltylosin),反应总收率为21%,含量为98%(HPLC,面积归一法).     

链霉菌分解角蛋白的生化机制研究

对弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种分解角蛋白的生化机制进行了初步研究。该菌在角蛋白底物作用下诱导产生胞外角蛋白酶。它是一种复合蛋白酶,含有二硫键还原酶和多肽水解酶等多种酶活性组分,其中,二硫键还原酶是分解角蛋白的关键酶,二硫键还原酶首先作用于角蛋白中的二硫键,使角蛋白高级结构解体形成变性角蛋白,然后变性角蛋白在多肽水解酶的共同作用下逐步水解成多肽,寡肽和游离氨基酸,使角蛋白彻底分解。在角蛋白分解过程中,角蛋白中的硫也随之转化成巯基化合物,Ｈ２Ｓ和硫酸盐３种含硫化合物存在于分解产物中。     

链霉菌分解角蛋白的生化机制研究 Ⅱ角蛋白分解过程中含硫化合物变化规律的初步探讨

弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种在分解利用羽毛角蛋白过程中产生角蛋白酶,使角蛋白不断地降解成多肽或游离氨基酸的同时,角蛋白中的硫也随之转化成巯基化合物、Ｈ２Ｓ和硫酸盐３种含硫化合物形式存在于分解产物中,并对３种含硫化合物形成过程进行了初步探讨。     

链霉菌SH-62中肠菌素生物合成基因簇的克隆及异源表达

通过生物信息学分析,在链霉菌SH-62的基因组中发现一个Ⅱ型聚酮合酶基因簇(ents),与已报道的来源于Streptomyces maritimus的肠菌素生物合成基因簇具有高度的相似性。通过构建和筛选链霉菌SH-62的基因组细菌人工染色体(BAC)文库,克隆得到完整的ents基因簇。将ents基因簇导入白色链霉菌中进行异源表达,HPLC和LC-MS分析结果表明该基因簇负责肠菌素的生物合成,从而证实了ents基因簇的生物学功能。     

复方泰乐菌素注射液的药代动力学研究

以反相高效液相色谱法为定量手段,研究复方泰乐菌素（商品名为泰乐松）给鸡单剂量用药后的药动学规律。血药由甲醇－氯仿混合液提取,采用ＯＤＳ柱,以甲醇－乙腈－醋酸钠溶液为流动相,可变波长检测,复方泰乐菌素三组分主要的药动学参数为：氯霉素：Ｔ１／２Ｋ＝２０．７９±１．００４ｈＴｍａｘ＝１．３１６±０．２４１ｈＣｍａｘ＝１２．４９±０．７３５μｇ／ｍＬＡＵＣ＝３９１．３５２±５．０３６μｇ／（ｍＬ·ｈ）泰乐菌素：Ｔ１／２Ｋ＝９．９５３±４．３０６ｈＴｍａｘ＝１．８９５±０．９５１ｈＣｍａｘ＝１．６１４±０．２０２μｇ／ｍＬＡＵＣ＝２６．２８２±６．０３３μｇ／（ｍＬ·ｈ）泼尼松：Ｔ１／２Ｋ＝１．６２７±０．２０２ｈＴｍａｘ＝１．６７５±０．０９６ｈＣｍａｘ＝０．２６１±０．０８５μｇ／ｍＬＡＵＣ＝１．２５３±０．３３μｇ／（ｍＬ·ｈ）     

链霉菌分解角蛋白的生化机制研究：Ⅲ含硫化合物对角蛋白酶作用 …

硫酸钠,亚硫酸钠和巯基乙醇对角蛋白酶具有强烈的激活作用,使角蛋白酶活力分别依次提高了４,７和２０多倍,其主要表现作用于角蛋白酶中的二硫键还原酶。亚硫酶钠在０．０１ｍｏｌ／Ｌ浓度下不仅作用于二硫键还原酶,而且还作用于多肽水解酶。     

中生菌素产生菌的紫外诱变育种

以中生菌素产生菌C5为出发菌株,经过紫外诱变处理,获得突变株UV-69,其摇瓶发酵效价比出发菌株提高30.2%。传代试验表明,该突变株的高产性能遗传特性较稳定。在15t发酵罐上连续5批验证,平均发酵效价比原生产水平提高47.8%。     

娄彻氏链霉菌ZZ-9菌株发酵液对小麦幼苗的促生作用

娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)ZZ-9菌株(专利保存号:CGMCC No.15245)是一株稳定性较强、对多种真菌病害病菌具有很好抑制效果的生防菌株。为了明确其对小麦的促生作用,通过室内盆栽试验研究不同稀释倍数的生防菌ZZ-9发酵液对小麦幼苗生长的影响,测定ZZ-9菌液灌根处理后小麦体内丙二醛(MDA)、叶绿素质量浓度和多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的变化。结果表明:生防菌ZZ-9不同剂量的发酵液对小麦幼苗均有一定的促生作用,其中以发酵液原液促生效果最明显,第2次灌根处理10d后,小麦幼苗株高和根长增幅最大,分别为43.60%(P0.05)和49.80%(P0.05);PPO和PAL活性显著增强,增幅分别为106.67%(P0.05)和58.70%(P0.05);叶绿素质量浓度较对照增加56.53%(P0.05);MDA质量摩尔浓度较对照降低了53.62%(P0.05)。可见,娄彻氏链霉菌生防菌株ZZ-9对小麦幼苗生长具有明显的促生作用,有望为新型多功能生物制剂的开发提供优良的菌种资源。     

阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物治疗猪链球菌病的研究

为研究阿莫西林钠-酒石酸泰复方药物乐菌素治疗猪链球菌病的药效学,选用60只15g左右的昆明鼠,以多重耐药的临床分离猪链球菌为病原,以腹腔注射为感染途径,对猪链球菌的病理模型进行了复制,按照Reed-Munch法计算LD50为9.61×108cfu·mL-1。在此基础上,选用80只昆明鼠,接种LD50菌液,分别口服阿莫西林钠,酒石酸泰乐菌素及阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物。结果表明,阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物组的作用效果明显优于单药组,小鼠存活率为80%,阿莫西林钠组的小鼠存活率为70%,酒石酸泰乐菌素组为60%。     

链霉菌分解角蛋白的生化机制研究 Ⅲ含硫化合物对角蛋白酶作用机理和角蛋白降解的生化机制初步研究

硫酸钠、亚硫酸钠和巯基乙醇对角蛋白酶具有强烈的激活作用,使角蛋白酶活力分别依次提高了４,７和２０多倍,其主要表现作用于角蛋白酶中的二硫键还原酶。亚硫酸钠在０．０１ｍｏｌ／Ｌ浓度下不仅作用于二硫键还原酶,而且还作用于多肽水解酶。硫代硫酸钠对二硫键还原酶有强烈的抑制作用。角蛋白酶降解羽毛角蛋白首先是角蛋白酶中的二硫键还原酶使角蛋白中二硫键裂解产生变性角蛋白,然后在多肽水解酶的共同作用下,将变性角蛋白逐渐分解成多肽、寡肽和游离氨基酸,使角蛋白彻底分解。角蛋白酶中的二硫键还原酶是降解角蛋白的关键酶。     

乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳的制备及其体外抑菌活性和急性毒性测定

【目的】制备乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳,并对其理化性质、体外药效和安全性进行评价。【方法】利用伪三元相图法,优选配方,制备乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳,用透射电镜、激光粒度分析仪对其形态和粒径分别进行考察;通过高速离心、留样观察试验检验其稳定性;通过抑菌试验考察其体外药效;通过急性毒性试验考察其安全性。【结果】乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳配方中各组分的质量分数为：吐温80 25%、无水乙醇15%、乙酸乙酯4.4%、乙酰异戊酰泰乐菌素1%、蒸馏水54.6%。制备的纳米乳为橘黄色澄清透明液体,流动性良好,在透射电镜下其形态为规则的圆球形,平均粒径为11.1 nm,分散性好;稳定性试验结果显示,其未有分层、絮凝、沉淀等现象发生,稳定性好。体外抑菌试验结果表明,乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳对畜禽常见病原菌致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、无乳链球菌的最小抑菌质量浓度分别为16,2,8,4,8 μg/mL;该纳米乳的半数致死量（LD₅₀）为2 425 mg/kg,属于低毒药物,安全性好。【结论】成功研制了乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳,其稳定性好,体外药效明显增强,且低毒,有望应用于兽医临床。