抗酸染色法对隐孢子虫卵囊的检查

本试验主要是为探明抗酸染色法在隐孢子虫病诊断中的作用和特异性。为了证明改良抗酸染色对隐孢子虫卵囊的特异性和敏感性,用改良抗酸染色法对相似原虫进行染色。结果显示只有隐孢子虫卵囊和鞭虫卵染成红色,其他虫卵不着色。鞭虫卵外形和体积与隐孢子虫卵囊相差非常大,很容易区别。其他粪样材料呈现绿色,有些结构也可染成红色,从外形和大小上很容易与隐孢子虫卵囊相区别。     

隐孢子虫病诊断方法研究──组织内隐孢子虫虫体不同染色法效果比较

隐孢子虫病诊断方法研究──组织内隐孢子虫虫体不同染色法效果比较田纯见（华南农业大学兽医系）近十年来，为了检查粪便内隐孢子虫卵囊，人们曾试用了各种染色方法，如姬姆沙染色、番红－次甲基蓝染色、改良抗酸染色等。我们试图把这些方法应用到组织内虫体的染色，以观...     

应用PCR诊断隐孢子虫病

应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）建立了一种诊断人及牛等哺乳动物隐孢子虫病的方法。试验采用甘油漂浮 Ｇ３ 耐酸漏斗过滤法纯化隐孢子虫卵囊,以液氮冻融法制备模板 Ｄ Ｎ Ａ,根据隐孢子虫 １８ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 序列设计 Ｐ Ｃ Ｒ 引物建立其诊断方法。该方法特异性强,可检出鼠隐孢子虫（ Ｃｒｙｐｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｍ ｕｒｉｓ）和小球隐孢子虫（ Ｃ．ｐａｒｖｕｍ ）卵囊;敏感性高,每克粪便可检出 ４００ 个卵囊。初步应用结果表明,所建立的 Ｐ Ｃ Ｒ 方法适合于人、牛等哺乳动物隐孢子虫病的临床诊断和流行病学调查。     

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫的研究

应用巢式聚合酶链反应（Nested PCR）-限制片段长度多态性 （restriction fragment length polymorphism, RFLP）方法对微小隐孢子虫（C．parvum）、安氏隐孢子虫（C．andersoni）和火鸡隐孢子虫（C．meleagrides）的鉴别进行了研究。结果显示C．parvum BOCC2、C．andesoni BOCC2和C．meleagrides CHCC1扩增产物片段大小分别为830bp、828bp和828bp，扩增产物分别经VspI酶切后形成3种不同的RFLP图谱，根据RFLP图谱可鉴别C．parvum、C．andersoni和C．meleagrides。本研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。     

安徽省某鸡场鸡隐孢子虫感染情况调查

对安徽省某鸡场 2 0 0份粪样采用金胺 -酚改良抗酸染色法进行隐孢子虫感染情况调查 ,结果表明 ,肉鸡感染率为19.4 % (35 / 180 ) ,肉种鸡感染率为 2 0 .0 % (4/ 2 0 )。所获虫体经鉴定为火鸡隐孢子虫 (Cryptosporidium meleagridis)。经卡方检验 ,肉鸡和肉种鸡隐孢子虫感染率间差异不显著 (P>0 .0 5 )     

上海市闵行区犬隐孢子虫病流行病学调查

犬隐孢子虫(Cryptosporidium canis)和微小隐孢子虫(C.parvum)是人兽共患病——隐孢子虫病的重要致病虫种,伴侣动物感染后,不仅会出现腹泻和炎症等临床症状,还会传染给人类.为了了解上海市闵行区犬只的隐孢子虫感染情况,在农村犬养户、宠物医院、动物收容点和犬养殖场共采集338份犬粪便样品,利用巢式P...     

隐孢子虫病的诊断进展

本文对动物隐孢子虫病的诊断作了较全面的综述, 组织学诊断、粪便集卵诊断和染色法诊断仍不失为目前常规诊断的重要方法。免疫学诊断包括免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、免疫组织化学技术、免疫印迹技术和流式细胞术, 具有特异性强、灵敏度高、稳定性好和操作简单的优点。聚合酶链反应（ＰＣＲ） 技术为建立敏感性高、特异性强的隐孢子虫病诊断开辟了新的途径。     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查，并按大致10％的采样率采集了1087头乳牛的新鲜粪便，以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊，其中检出卵囊的阳性牛92头，阳性率为8．46％；有7个场检出隐孢子虫卵囊，场阳性率为70％。这7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是10．00％、7．19％、6．67％、9．80％、6．72％、12．76％和6．72％。调查发现，乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系，而且可能与气候有关；所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫(Crptosporidium muris)。     

隐孢子虫病诊断研究进展

本文对隐孢子虫病中几种常见的诊断方法进行了分类、总结;对其操作过程及应用情况做了简要的叙述;并对方法间优缺点进行了初步分析.     

PCR技术在检测隐孢子虫中的应用

隐孢子虫可造成多种动物的腹泻及其它症状，给畜牧业造成了巨大损失。作者就PCR在隐孢子虫的病原鉴别、活性确定、环境检测、药物筛选等方面的应用作一综述。     

检测实验动物弓形虫感染的两种PCR方法的建立和比较

为了建立敏感、稳定、特异的PCR检测体系，用于实验动物弓形虫感染的检测。采用B1基因设计引物，建立常规PCR，用P30基因设计引物，建立巢式PCR；用两种PCR方法检测实验感染弓形虫小鼠血液和腹腔波中的DNA动态变化；用巢式PCR检测自然状态下的普通级豚鼠、教学和科研用兔的弓形虫感染率，并和常规PCR检到结果比较。结果，巢式PCR可检测到1fgDNA含量，比常规PCR敏感lOO倍；对其他微生物DNA无交叉现象，特异性强；对同一样品重复检测3次，阴、阳性结果一致，稳定性好。小鼠感染弓形虫2d后，巢式PCR对小民腹腔液的阳性检出率为83．3％，对血液的阳性检出率为33．3％；感染3d后，腹腔液阳性检出率为100％；而常规PCR在小鼠感染3d和4d后才能在腹腔液和血液中检测到，检出率各为16．7％。受检普通级豚鼠没有感染弓形虫，教学和科研用兔的弓形虫总感染率为14．3％。结论认为，巢式PCR方法可用于实验动物弓形虫早期感染的检测，具有敏感性高、特务性强、稳定性好的特点。     

番鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用

通过比对分析GenBank上登录的多株番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus,MDPV）和鹅细小病毒（Goose parvovirus）全基因序列,选取两种病毒间相似性较低的区域设计合成了2对特异性引物,建立了能快速鉴别诊断MDPV的套式PCR方法。该法仅能特异地扩增MDPV,敏感性达到62copies／uL,比普通PCR高1000倍。运用该方法对分离的12份临床样品进行检测,结果检测出2份MDPV。本试验所建立的套式PCR方法可用于MDPV感染的临床诊断和流行病学调查。     

弓形虫两种保种方法的试验

目的寻求一个简便、适宜的弓形虫保种方法。方法采用不同温度的冷冻保存法和细胞培养保存法对弓形虫保存进行了试验研究,为深入研究弓形虫提供保证。结果弓形虫在液氮(-196℃)、-70℃能长期保存,4℃能保存14 d。通过细胞培养能获得大量的弓形虫滋养体,对培养细胞的选择性不强。结论两种保种方法保存后弓形虫毒力不变。     

动物性饲料中沙门氏菌快速检验的研究——协同凝集试验及HRP-SPA酶染色法的应用

本研究确定了适用于动物性饲料中沙门氏菌检验的增菌程序、协同凝集试验(COAG)及HRP—SPA染色法(酶染法)的最适实验条件。以这种条件进行增菌,并以COAG及酶染法进行检查,具有快度、敏感、特异性强的优点。应用COAG、酶染法及沙门氏菌常规分离鉴定法,对236份动物性饲料标本进行了检测。结果两种快速法与常规法有较好的符合率,酶染法在检出阳性标本上优于常规法.且可在16～18h内报告结果,比常规法的时间明显缩短。因此认为,COAG和酶染法适用于动物性饲料中沙门氏菌的快速检测。动物性饲料的沙门氏菌污染,依饲料的种类不同而异,其中鱼粉为31.5％、血粉25％骨粉10.3％,平均为17.4％,而且存在着多种血清型的沙门氏菌,其中以鼠伤寒沙门氏菌占优势。因此认为动物性饲料中的沙门氏菌污染在人畜沙门氏菌的流行病学上具有重要的作用。     

COMPARISON OF TWO PALPATION, FOUR RADIOGRAPHIC AND THREE ULTRASOUND METHODS FOR EARLY DETECTION OF MILD TO MODERATE CANINE HIP DYSPLASIA

Hip joint laxity was evaluated in Golden Retriever (n = 60), Labrador Retriever (n = 23), and Labrador/Golden Retriever mix (n = 24) puppies. Ortolani and Bardens maneuvers, four radiographic measurement indices and three dynamic ultrasonographic measurements were used. Each puppy was evaluated twice; at 6.5 to 9 and 43 to 79 weeks of age. These nine methods were compared for accuracy in predicting the development of canine hip dysplasia with or without degenerative joint disease by a median age of 16 months. The Bardens maneuver was a significant predictor of canine hip dysplasia/+/-degenerative joint disease for Golden Retriever puppies, however, it was not a reliable predictor for the other two breeds. Norberg angle measurements taken with femurs in a neutral position with hips distracted (PennHip position) was a significant predictor of degenerative joint disease in two breeds, but not in Golden Retriever puppies. Ultrasound measurement was a reliable predictor of hip canine hip dysplasia/+/-degenerative joint disease for Labrador/Golden Retriever mix puppies, but was not reliable for the other two breeds. Palpation, radiographic, and ultrasonographic methods of evaluating hip joint laxity in puppies at 6.5 to 9 weeks of age were not consistently reliable for all three breeds in predicting hip dysplasia with or without degenerative joint disease at one year of age. A strong association was found between Norberg angle and degenerative joint disease occurrence, as well as between distraction index (PennHip) and degenerative joint disease occurrence when measured at 52 to 79 weeks of age, but not when measured at 6.5 to 9 weeks of age in these breeds. These results emphasize the difficulty of early detection of mild hip dysplasia in the dog.     

动物弓形虫检测方法研究进展

弓形虫病(Toxoplasmosis)是由弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的一种人兽共患寄生虫病,危害严重且分布广泛,目前尚未有理想的防治药物。因此,及时准确的检测对于防治弓形虫病尤为重要。就弓形虫的病原学检测、血清学检测及分子生物学检测等方法进行了综述,介绍了动物弓形虫检测中各类方法的研究现状及应用情况,分析了各种技术的优点与局限性,以期为动物弓形虫检测方法的发展和研究提供参考。     

奶牛隐孢子虫Nested PCR—RFLP方法的建立及初步应用

为快速检测并准确鉴别奶牛隐孢子虫种,以隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域为基础,设计内、外引物,并根据软件分析确定相应的内切酶EcoT141,采用Nested PCR-RFLP方法进行虫种种型鉴别分析。在Nested PCR两次PCR反应中,以微小隐孢子虫（Cryptos poridium parvum,C．p）和安氏隐孢子虫（Cryptosporidium andersoni,C．an）卵囊提取的DNA为模板,均能扩增出长约800bp和500bp的明亮条带,且特异性强,其他虫种不能扩增出条带,该方法最低可检测到5个卵囊／g粪便;对于由内引物扩增出的500bp的条带,C.an的PCR产物能被内切酶EcoT141酶切,酶切后的片段分别为416bp和92bp,C.p的PCR产物不能被此酶酶切。用所建立的Nested PCR-RFLP法对上海奶牛389头和进口奶牛200头的共计589份粪样进行检测,Nested PCR的结果表明上海奶牛和进口奶牛的隐孢子虫阳性率分别为19．02％和3．5％,RFLP的结果表明上海奶牛感染的主要是Cp和C．an,进口奶牛感染的主要是C．p。研究结果表明,本研究建立的检测奶牛粪便中的隐孢子虫的NestedPCR-RFLP法,可用于奶牛隐孢子虫流行病学调查并有效鉴别奶牛隐孢子虫种。     

应用HRP—SPA间接免疫酶染色检测弓形虫病血清抗体

以弓形虫直接涂片,应用HRP—SPA间接免疫酶染色,检测兔实验性弓形虫病血清抗体,检出率达100％。本法操作简便,不需要复杂的仪器设备,便于普及推广。