腺苷对猪血小板膜上磷脂酰肌醇激酶和磷脂酰肌醇-4-磷酸激酶的抑制作用

用差速离心法分离猪血小板膜，在适当条件下，用［ γ－３２ Ｐ） ＡＴＰ与其保温，观察３２Ｐ掺入磷脂情况。结果表明：（１）无外源性磷脂酰肌醇－４－磷酸（ＰＩＰ）时，３２Ｐ主要掺入ＰＩＰ；补充外源性ＰＩＰ后，３２Ｐ也可掺入磷脂酰肌醇－ ４， ５－二磷酸（ ＰＩＰ２） ９（ ２）腺苷及类似物 ５’－氧－ ５’－脱氧腺苷对３２ Ｐ掺入这两种磷脂均有强烈的抑制作用；（３）这种抑制作用呈剂量—效应关系（ＩＣ５０分别为８０μｍｏｌ／Ｌ和７０μｍｏｌ／ Ｌ），并与ＡＴＰ里竞争性。提示腺苷及类似物５’－氯－５’－脱氧腺苷这种抑制作用可能与其抑制血小板聚集作用有关。     

腺苷及类似物对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

猪血小板膜与不同浓度的腺苷或100μmol/L的腺苷类似物及γ—~(32)P—ATP37℃反应5min.被标记的磷脂酰肌醇—4—单磷酸通过薄层层析法分离、放射自显影定位、液体闪烁计数定量的结果表明:腺苷可强烈抑制猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化,半数抑制率为14μmol/L;腺苷类似物cAMP、5′—氯—5′—脱氧腺苷、腺嘌呤、α′—脱氧腺苷、AMP、阿糖腺苷、cGMP在浓度为100μmol/L时对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用。     

某些抗血小板药和精胺对猪血小板膜中肌醇磷脂转换和蛋白质磷酸化的影响

本文用〔γ—P〕ATP与血小板膜保温进行磷酸化实验,用酸化的氯仿/甲醇抽提磷脂,硅胶板薄层层析分离肌醇磷脂,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,经放射自显影后,经液体闪烁计数法测定放射性大小。     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

在Mg~(2+)存在下,用(γ-~(32)P)ATP与猪红细胞膜保温(30℃)3min,观察一些药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。用氯仿:甲醇中止反应。用酸性氯仿:甲醇混合液抽提磷脂及硅胶板TLC分离磷脂。经放射自显影及液体闪烁计数测定生成的(~(32)P)-磷脂酰肌醇-4-磷酸。结果表明①肝素和新霉素对磷脂酰肌醇磷酸化有抑制作用;②六氯环己烷对磷脂酰肌醇磷酸化有促进作用;③Li_2SO_4(10mmol/L)、EGTA(100μmol/L)、茶硷(100μmol/L)作用不明显;④二甲亚矾在低浓度时有促进作用,而在较高浓度时则有抑制作用。结果提示上述作用可能与这些药物的作用机理有关。     

Wortmannin对凝血酶诱导的人血小板聚集和3┐磷酸化肌醇磷脂累积的影响

Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ是能引起动物出血的真菌代谢产物,它是肌醇磷脂－３－激酶的不可逆抑制剂。Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ对血小板的多种抑制作用已被广泛研究。用比浊法分析血小板聚集;用［γ－３２Ｐ］标记磷酸化肌醇磷脂;用氯仿和甲醇抽提磷酸化肌醇磷脂;用ＴＬＣ和放...     

精胺对猪血小板膜中磷酸肌醇和47K蛋白质磷酸化的影响

在Mg~(2+)和外源性磷脂酰肌醇—4—磷酸存在下,用猪血小板膜与〔γ—~(32)P〕ATP在30℃下保温3min,测     

EGF对人鼻咽癌细胞体外生长和膜蛋白磷酸化与肌醇磷脂磷酸化的影响

本文观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）与人低分化鼻咽癌上皮细胞系 　ＣＮＥ－２ Ｚ在软琼脂培养基上集落形成能力及膜蛋白、膜肌醇磷脂磷酸化的关系。 结果表明：（１）ＥＧＦ经受体介导，低浓度时（０．０１～０．１７ｎｍｏｌ／Ｌ）促进细胞生 长，高浓度时（≥１．６７ｎｍｏｌ／Ｌ）抑制细胞生长；（２） ＥＧＦ促进膜蛋白磷酸化反 应；（３） ＥＧＦ促进膜肌醇磷脂转换。提示了ＥＧＦ对ＣＮＥ－ ２ Ｚ细胞体外生长的影 响与其促进膜蛋白磷酸化和膜肌醇磷脂转换有关。本文根据实验结果探讨了ＥＧＦ 与人鼻咽癌的关系。     

冰温贮藏对羊肉中蛋白质磷酸化水平的影响

【目的】通过测定冰温贮藏及冷藏过程中肌肉肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平,分析冰温贮藏对蛋白质磷酸化水平的影响,为肉类冰温贮藏品质调控提供理论依据。【方法】选取大尾寒羊与小尾寒羊杂交公羊的背最长肌于冷藏和冰温条件下成熟,分别在0.5 h、12 h、24 h、3 d、5 d、9 d取样测定蛋白激酶活性、肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平。采用蛋白激酶活性测定试剂盒、运用酶联免疫的方法检测各处理组蛋白激酶的活性随贮藏时间的变化;通过SDS-PAGE电泳、荧光染色的方法得到全蛋白染色与磷酸化染色的肌浆蛋白与肌原纤维蛋白条带,运用Quantity One软件分析各处理组各处理时间的肌浆蛋白及肌原纤维蛋白的磷酸化水平。【结果】贮藏初期(0.5—12 h),冰温组蛋白激酶活性显著升高(P0.05),冷藏组蛋白激酶活性则显著降低(P0.05),贮藏12 h—9 d过程中,冰温组蛋白激酶活性均显著高于冷藏组(P0.05)。两处理组蛋白激酶活性均随贮藏时间的延长而逐渐降低,且冰温组蛋白激酶活性均显著高于冷藏组(P0.05)。对肌浆蛋白染色效果图中分布于15—250 k Da的17个蛋白条带逐一进行分析,结果表明贮藏温度极显著影响肌浆蛋白各蛋白条带的磷酸化水平(P0.001)。冷藏组肌浆蛋白整体磷酸化水平先升高后降低,贮藏第3天达到最大值,冰温组肌浆蛋白整体磷酸化水平先降低后升高,最小值出现在贮藏第24天,贮藏第12天至3天时,冷藏组肌浆蛋白整体磷酸化水平高于冰温组(P0.05),贮藏第9天时,冰温组肌浆蛋白整体磷酸化水平高于冷藏组(P0.05)。对肌原纤维蛋白染色效果图中分布于15—250 k Da的20个蛋白条带逐一进行分析,结果表明不同贮藏温度对所有肌原纤维蛋白条带的磷酸化水平均产生极显著影响作用(P0.001)。两处理组肌原纤维蛋白整体磷酸化水平均随贮藏时间的延长呈现先升高后降低的趋势,冷藏组与冰温组最大值分别出现在24 h和12 h,贮藏初期(0.5—12 h),两处理组间肌原纤维蛋白整体磷酸化水平无显著差异(P0.05),贮藏24 h至贮藏期结束,冷藏组肌原纤维蛋白整体磷酸化水平始终高于冰温组(P0.05)。【结论】冰温贮藏通过影响蛋白激酶的活性来调控蛋白质的磷酸化水平,进而通过影响糖酵解途径、肌肉收缩及骨架蛋白降解来间接调控肉品质。     

当归对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

观察当归与肌醇脂质信号系统的关系,以探讨活血化瘀药的可能作用机理。其过程与结果如下:猪血小板膜与20μmol/Lγ—~(32)P—ATP及不同含量     

川芎嗪对血小板中肌醇磷脂和20K蛋白质磷酸化的抑制作用

在Mg~(2+)存在下,用血小板膜与(γ—~(32)P)ATP保温,以观察川芎嗪对~(32)P掺入磷脂和蛋白质的影响,结果     

温度胁迫对甘蓝蛋白质磷酸化的影响

用SDS-PAGE放射自显影技术以及液闪测定技术研究了2种温度胁迫条件下甘蓝体外蛋白激酶活性变化及其对Ca2+的依赖情况,并进行了温度胁迫磷酸化蛋白的分离.结果表明:甘蓝受到高温(35℃)或低温(5℃)胁迫时,体内蛋白激酶活性在3 min内迅速升高,随着温度胁迫时间的进一步延长而迅速降低,发现温度胁迫下,蛋白激酶对Ca2+具有明显的依赖性.从放射自显影结果来看,2种温度胁迫都会发生分子量为22.9 kD的特异蛋白质体外磷酸化;在逆境温度处理10 min内,磷酸化蛋白质含量较高,随着低温处理时间的延长,磷酸化蛋白质含量迅速下降.     

温度胁迫对甘蓝蛋白质磷酸化的影响

用SDS-PAGE放射自显影技术以及液闪测定技术研究了2种温度胁迫条件下甘蓝体外蛋白激酶活性变化及其对Ca^2 的依赖情况,并进行了温度胁迫磷酸化蛋白的分离。结果表明：甘蓝受到高温(35℃)或低温(5℃)胁迫时,体内蛋白激酶活性在3min内迅速升高,随着温度胁迫时间的进一步延长而迅速降低,发现温度胁迫下,蛋白激酶对Ca^2 具有明显的依赖性。从放射自显影结果来看,2种温度胁迫都会发生分子量为22．9kD的特异蛋白质体外磷酸化;在逆境温度处理10min内,磷酸化蛋白质含量较高,随着低温处理时间的延长,磷酸化蛋白质含量迅速下降。     

腺苷对大鼠心肌钙蛋白 I 及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度梯度离心法从大白鼠心肌细胞分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ—~(32)P]ATP 保温以观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷和腺苷类似物对磷酸化的影响。结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要参入肌钙蛋白 I(Troponin1,29000Da);在质膜组分,~(32)P 主要参入磷脂酰肌醇-4-一磷酸(Ptd Ins4P),亦即 TAP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对 Ptd Ins 磷酸化的抑制最强烈。cAMP 对肌钙蛋白 I 的磷酸化有剌激作用,这与文献报道相符。作者认为,腺苷和 cAMP 对肌钙蛋白 I 磷酸化的拮抗作用与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现,肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用可能有重要的生物学意义。     

腺苷对大鼠心肌原蛋白I及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度离心法从大白鼠心肌细胞中分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ-~(32)P]ATP 保温,观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷或腺苷类似物对磷酸化的影响.结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要掺入肌原蛋白Ⅰ(TroponinⅠ,29000Da);在质膜组分、~(32)P主要掺入磷脂酰肌醇-4-—磷酸(PtdIns-4-P);也就是 ATP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对PtdIns 的磷酸化抑制作用最强。cAMP 对肌原蛋白Ⅰ的磷酸化有刺激作用,这与文献报道相符.作者认为腺苷和 cAMP 对肌原蛋白Ⅰ磷酸化的拮抗作用,与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起有重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用,可能具有重要的生物学意义。     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

用~(32)P标记法研究肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响,结果表明:肝素和新霉素对磷脂     

蛋白质磷酸化调控羊肉肌原纤维蛋白的功能

【目的】通过激活蛋白激酶的活性提高羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平,分析磷酸化水平的提高对羊肉肌原纤维蛋白降解程度、收缩功能的影响,进一步揭示蛋白质磷酸化对羊肉肌肉嫩化的作用机理。【方法】通过添加蛋白激酶A激活剂Forskolin、蛋白激酶C激活剂佛波酯（PMA）,提高蛋白激酶的活性,改变羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平。比较激活剂处理组与空白对照组肌原纤维小片化指数（MFI）、条带降解程度、肌节长度等指标的差异,确定蛋白质磷酸化水平对羊肉肌肉收缩和肌肉降解的影响。【结果】将羊肉样品在蛋白激酶溶液中培养24 h,在培养结束后1、2和4 h,PMA处理组（PKC激活组）的蛋白激酶活性显著高于空白对照组（P＜0.05）,而在培养后1和4 h,Forskolin处理组（PKA激活组）的蛋白激酶活性显著高于空白对照组（P＜0.05）。PMA处理组和Forskolin处理组的最高蛋白激酶活性出现在培养后1 h。Forskolin和PMA通过提高激酶活性显著提高肌联蛋白（Titin）、肌球蛋白结合蛋白C（Myosin binding protein C）、原肌球蛋白（Tropomyosin）、肌球蛋白轻链2（Myosin light chain 2）等蛋白质的磷酸化水平,肌球蛋白重链、肌动蛋白质的磷酸化水平没有显著变化,Forskolin组和PMA组的蛋白质降解程度及肌节长度均低于对照组。【结论】肌原纤维蛋白磷酸化水平提高不利于羊肉肌原纤维蛋白的降解。另一方面,磷酸化水平可能通过对肌球蛋白轻链2的作用增强羊肉肌肉的收缩作用力,通过促进相邻原肌球蛋白的相互作用促进肌细丝收缩,影响肉的僵直进程和嫩化进程。     

腺苷对猪血小板膜上磷脂酰肌醇激酶和磷脂酰肌醇—4—磷酸激酶的抑制作用

用差速离心法分离猪血小板膜,在适当条件下,用〔γ—~(32)P〕ATP与其保温,观察P掺入磷脂情况。结果表     

腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

本文研究腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响,结果表明:(1)腺苷对磷脂酰肌醇磷     

猪血小板中蛋白激酶CK2的天然底物

目的：寻找猪血小板中蛋白激酶ＣＫ２可能的天然底物。方法：以［γ－＾３２Ｐ］ＧＴＰ为磷酸供体,用精胺激活蛋白激酶ＣＫ２和用肝素抑制蛋白激酶ＣＫ２活性,然后用放射自显影的方法检测底物蛋白磷酸化。结果：精胺可增加１７．４ｋＤ蛋白磷酸化;肝素能完全抑制４３ｋＤ和６６ｋＤ底物蛋白磷酸化,肝素还增加３９．４ｋＤ底物磷酸化。结果：猪血小板中１７．４ｋＤ、４３ｋＤ和６６ｋＤ的蛋白质可能是蛋白激酶ＣＫ２的天然底物。     

亚精胺对牡丹花膜脂过氧化的影响

在牡丹花绿蕾期全株喷洒0.2、0.5和0.8 mmol·L-1的亚精胺(Spd)水溶液,其中0.2和0.5 mmol·L-1的Spd溶液使花辩中超氧化物歧化酶(SOD)的活性提高,超氧阴离子(O2-)产生速率、丙二醛(MDA)含量和花瓣外渗液的相对电导率下降,以0.2 mmol·L-1Spd的处理效果较好;而0.8 mmol·L-1Spd溶液处理降低了花瓣SOD活性,并使O2-产生速率、MDA含量和花瓣外渗液的相对电导率略有升高.