猕猴桃溃疡病病原菌的分子鉴定和致病力测定

为明确猕猴桃细菌性溃疡病致病菌种类与特征,以从安徽岳西、陕西户县和重庆黔江等猕猴桃主产区收集到的溃疡病感染枝条和树皮为材料,采用平板划线、梯度稀释和BPA培养法分离病原物,采用烟草过敏性反应和猕猴桃健康叶片接种观察其致病性,结合特异引物扩增的16S-23SrDNA-ITS序列分析,对病原菌种类进行分子鉴定。结果表明:从收集的溃疡病感染枝条和树皮中,共分离纯化得到10株分离物;所有分离物均可使烟草叶片产生过敏反应,猕猴桃叶片接种显示同一菌株对不同品种及不同菌株对同一品种的致病力均存在差异。对特异扩增得到的280bp 16S-23SrDNA-ITS序列进行Blast比对分析,结果表明:10个菌株为同一致病菌,其DNA片段大小和序列均与丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidae)完全一致。据此可以确定,试验分离所得的菌株均为丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种。     

灰葡萄孢霉对不同葡萄品种致病力差异的检测和分析

为了探明适合中国葡萄灰霉病菌致病力检测的方法以及合适的待测葡萄品种,采用菌丝块接种法和改良的保湿培养法,分别测定3个不同致病力类型的灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)菌株SDXL7 1、SDLK1 1、LNXCetz6 1对红提、青提、巨峰、紫奶、玫瑰香5个葡萄品种的致病力,并进行差异分析。结果表明,供试菌株均可引起5种葡萄发病,但致病力不同的菌株所致的平均病斑面积有明显差异,同一菌株在不同葡萄品种上的平均病斑面积也有明显差异。其中,巨峰和青提对灰葡萄孢霉具有较强抗性,红提和玫瑰香对3个灰葡萄孢霉菌株普遍易感,紫奶对菌株LNXCetz6 1具有较强抗性,但对另外两个菌株易感。试验结果为系统和全面地研究中国灰葡萄孢霉菌株的致病力分化提供重要依据。     

桉树青枯病病原鉴定和致病力测定

桉树(Eucalyptus)青枯病于1983年和1986年分别在我国广西和广东发现。该病病原菌通过本试验鉴定为青枯假单胞杆菌(Pseudomonas solanacearum Smith),属生理小种1、生化型Ⅲ。桉树青枯菌与木麻黄、番茄及甘薯等青枯菌在形态特征、染色反应、培养特性、烟叶浸润反应、碳水化合物利用能力、硝酸盐还原等生化特性、酯酶同工酶某些主酶带、过氧化物酶同工酶谱和蛋白质氨基酸成分等方面基本相同。从不同桉树树种和地理种源分离到的青枯菌菌株的致病力基本相同。桉树青枯菌对桉树的致病力较强,木麻黄、番茄、甘薯及花生青枯菌对桉树的致病力较弱。经过比饺分析,发现桉树和木麻黄、番茄、甘薯青枯菌对某些寄主的致病力可能与其酯酶同工酶存在较密切的关系。     

瓜果腐霉除草活性成分的分离鉴定

 【目的】为了明确瓜果腐霉在液体培养基中所产生粗毒素的具有除草活性成分的组成及结构,本研究对具有除草活性毒素成分进行了分离纯化和结构鉴定。【方法】瓜果腐霉培养滤液分别用乙酸乙酯、石油醚、三氯甲烷等不同极性溶剂萃取制备粗毒素,用薄层层析法对粗毒素进行分离,再用高效液相色谱分离制备得到除草活性成分,通过核磁共振谱和红外光谱对其进行结构解析。【结果】用乙酸乙酯萃取得到的粗毒素活性最高;以Rf值为0.19的物质除草活性最强,对马唐的生长抑制作用达到5级;通过化学信息分析表明该成分为邻苯二甲酸二甲酯。【结论】邻苯二甲酸二甲酯是瓜果腐霉在液体培养过程中所产生的组分之一,具有除草活性。     

河南省商丘地区棉花枯萎病菌的分子鉴定与致病力

以河南省民权县花园镇棉花枯萎病病株为材料,采用连续稀释法和单孢分离法得到枯萎菌单孢菌株,对该菌株进行形态学和显微形态学分析。采用真菌通用引物对所分离的菌株r DNA内转录间隔区(ITS)PCR扩增得到544 bp大小的片段(Gen Bank登录号为FJ715505),BLASTn分析结果显示,该序列与其他枯萎菌的ITS序列具有很高的同源性,将该ITS序列与Gen Bank中搜索到的同源性序列构建系统进化树,确定商丘地区棉花枯萎菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),对该分离棉花枯萎菌菌株进一步进行致病力生物学鉴定。     

玉蜀黍赤霉致病力分化的研究

1984年从全国三个小麦赤霉病流行频率不同的地区采(征)集得77个病穗标样,经分离、鉴定,选取其中49个禾谷镰刀菌菌株(江苏省20个,黑龙江省19个,西北地区10个),在10个抗、感程度不同的冬小麦品种上进行致病力测定。结果表明:(1)各个地区内菌株间的致病力均存在显著差异,说明每个地区内的菌株均存在致病力分化;(2)茵株与品种间互作效应明显,但不宜划分为生理小种;(3)三个地区菌株的平均致病力以病害经常流行的江苏省菌株最强,少流行或不流行的黑龙江省和西北地区菌株为弱;(4)品种间抗病性存在显著差异。     

变黑轮枝菌种的鉴定及其致病力的测定

自江苏省棉区分离到三个轮枝苗菌株,其菌落为褐色,并形成褐色厚垣孢子。经形态、生长温度等方面的研究,并与CMI的Verticillium nigrescens菌株比较,鉴定为V.nigrescens Pethybr.。在温室条件下接种测定,该菌对棉花、花生、辣椒、茄子等植物的致病力极弱。     

烟草炭疽菌的分子鉴定与检测

克隆并测定烟草炭疽菌r DNA全序列,序列全长2870 bp。序列比对发现,烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌的rDNA序列相似性最高,达96.0%~96.2%;从构建的系统关系树也可以看出,烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌聚成一个单独的分支,说明烟草炭疽菌与胶孢炭疽菌的亲缘关系最近。因此,结合烟草炭疽菌的形态学特征,可以初步将从贵州烟草分离的烟草炭疽菌鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。根据所测烟草炭疽菌的rDNA序列设计特异性引物,不仅可以从8种不同的烟草病原真菌中鉴定出烟草炭疽菌,而且可以从7种炭疽菌中鉴定出烟草炭疽菌。用烟草炭疽菌接种普通烟,以接种发病的病组织总DNA为模板,利用该特异性引物进行PCR扩增,同样可以扩增出特异性条带,表明该方法可用于烟草炭疽菌的鉴定和快速检测。     

烟草疫霉的快速分子检测

 根据烟草疫霉与其他疫霉菌ITS序列的差异设计了1对寡聚核苷酸引物,用于烟草疫霉的PCR检测。结果表明,在优化的反应体系与扩增条件下,该对引物表现出强特异性,只在烟草疫霉为模板的扩增体系中具有1条660bp的条带。利用此特异性引物可稳定地从含有烟草疫霉的土壤及其发病组织中检测出病原菌。本实验提供并完善了一套快速检测烟草疫霉的方法和技术,特别对土传病害的准确诊断与快速检测在实践和理论上具有重要意义。     

宁夏腐霉种类及其对主要蔬菜致病性的研究

 本文报道了新近从宁夏土壤和植物病根上分离出的10种腐霉。并对其在宁夏各地的出现频率进行分析,明确了终极腐霉Pythium ultimum是宁夏农田腐霉的优势种;用其中的7种腐霉对13种蔬菜进行致病性测定;同时对终极腐霉和瓜果腐霉进行了致病差异研究。     

海南腐霉新记录种Pythium splendens的鉴定及其对油棕苗的致病性测定

 华丽腐霉Pythium splendens是我国对外植物检疫对象油棕苗疫病的病原菌,从海南坝王岭自然保护区长臂猿原始林区采集的土样中分离出1株腐霉菌HB0401,经形态特征和核糖体rDNA ITS1序列分析鉴定为华丽腐霉（Pythium splendens Braun）。将该菌株接到健康的油棕苗植株上,能引起典型的油棕苗疫病症状。这是第1次在海南分离到华丽腐霉（Py. splendens）并证实其为油棕苗的致病菌。     

云南烤烟腐霉菌种类、分布及致病性研究

 1994～1995年分别从云南省楚雄市、玉溪市、昭通市、晋宁县、永胜县等11个主要烟区,采集根茎病害标样226份,土壤标样60份,分离纯化到42个菌株,鉴定了其中的35个菌株,得到Pythium ap hanidermatum,P.debaryanum,P.ultimum,P.irregulare 4种腐霉菌;其中,P.aphanidermatum出现频率达48.6%,是优势种群。4种腐霉菌在不同烟区,不同类型烟田,不同生育期烤烟和烟田不同位置土壤中的种类和数量分布有一定差异;在水肥条件好的烟区及烤烟苗床和烤烟的根际土壤中腐霉菌的出现频率高,种类多。致病性测定表明,4种腐霉菌都能侵染烤烟,是腐霉致病种;其中P.aphanidermatum发病率最高,达28%,且出现猝倒现象,是对烤烟致病力最强的种。     

烟田瓜果腐霉的分离鉴定及其拮抗木霉菌株的筛选

采用诱捕法从烟田土壤中分离到1株腐霉(Pythium spp.),鉴定为瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum).接种试验结果表明该菌对烟草、黄瓜、辣椒具有致病性.采用对峙培养试验测定木霉菌(Trichodermaspp.)对瓜果腐霉的抑制作用,筛选出拮抗瓜果腐霉哈茨木霉(T.harzianum)菌株TGY040604,该菌株对瓜果腐霉的生长抑制率达到80%以上,其次生代谢产物对病原菌也具有一定的抑制效果.盆栽试验结果表明,该木霉菌菌株对烟草猝倒病的防效达65%,优于甲霜灵锰锌.     

茄子褐纹病菌的分离鉴定及产孢条件的优化

【目的】由茄褐纹拟茎点霉（Phomopsis vexans Harter）引起的褐纹病是当前茄子产业的重要病害,孢子富集是深入研究褐纹病菌孢子萌发及其致病机理的基础。进一步简化当前复杂的产孢过程,提高产孢效率。【方法】采用组织分离法开展病原菌的分离纯化,利用形态学特征观察及 rDNA-ITS 序列分析对病原菌进行鉴定;使用液体培养的方式,对茄子褐纹病菌的产孢条件进行优化。【结果】分离获得的病原菌 rDNA-ITS 序列经NCBI 序列比对,与茄子褐纹病菌遗传关系最近,同源性达 99%;相同培养条件下培养 1 d 后,液体培养基中的菌丝生长量较大;28 ℃培养 1 d 24 ℃培养 3 d 后的产孢量为 1.2×1010 个 /mL,大于 24 ℃培养 4 d 的产孢量（6×107个 /mL）;不同培养温度产孢量分别为 2.5×107（20 ℃）、1.2×1010（22 ℃）、9.4×109（24 ℃）、8.5×108（26 ℃）个 /mL;相同培养条件下,25% 葡萄糖马铃薯液体（PDB）培养基产孢量最高（1.2×1010 个 /mL）。【结论】分离并鉴定了茄褐纹病病原菌,优化了褐纹病菌产孢条件。优化后的产孢条件为：在 150 r/min 摇床中,使用 25%葡萄糖 PDB 培养基 28℃培养 1 d 后 24℃培养 3 d。     

抑制茶饼病菌放线菌及细菌的筛选与鉴定

为筛选出用于生产上防治茶饼病的生防菌,克服化学农药防治造成的农药残留问题,采用平板稀释和喷雾法,从茶树根际土壤中筛选抑制茶饼病菌的拮抗放线菌和细菌,结合形态学特征与ITS序列测定的方法对拮抗菌进行鉴定。结果表明:从采集土样中共分离到59株放线菌和19株细菌,从中各筛选出1株对茶饼病菌具有拮抗作用的放线菌(C6)和细菌(B-9),平均抑菌圈直径分别为27.00mm和32.00mm;经鉴定,C6为酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies),B-9为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

1株灭蚊真菌-贵阳腐霉的田间生态安全性评价

在田间作随机区组设计,以植物株高和鲜重或发病率为观察指标,无菌水作对照,通过土壤接种法,在低温、高湿的田间条件下分别观察贵阳腐霉Pythium guiyangense对黄瓜Cucumis sativus、番茄Lycopersicomesculentum、辣椒Capsicum annuum、烟草Nicotiana tabacum、油菜Brassica campestris和水稻Oryza sativa6种易患腐霉病植物的致病性。从试验组患病植物组织中分离致病真菌进行纯化培养、鉴定。结果表明,在自然条件下,贵阳腐霉不影响植物的生长势,很难侵染植物使其感病。     

一株和缓艾美耳球虫的致病性和免疫原性

笔者对新分离到的和缓艾美耳球虫进行了致病性和免疫原性的研究。结果表明雏鸡感染1 000和5 000孢子化卵囊表现正常,肠道没有肉眼可见的病理变化。20 000个卵囊感染引起轻微病变。100 000个卵囊和500 000 个卵囊感染则产生较为明显的致病作用,与不感染对照组相比增重分别为70．3％和56．8％,肠道外观也产生明显可见的病变,根据0-4分肠道计分标准,分别为1．43和2．37。所有实验鸡都没有出现死亡。该虫株免疫原性较强,一次免疫5 000个卵囊/只,就能够对200 000个卵囊/只感染产生坚强的保护作用。     

一株鹅副粘病毒分离株的增殖最佳条件及其致病性研究

为了探讨鹅副粘病毒在鸡胚中增殖的最佳条件及其致病性,将不同血凝滴度的鹅副粘病毒分别接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,收获孵化36、48、60、72和84 h的鸡胚尿囊液,测定血凝滴度。结果表明将血凝价为1∶64的鹅副粘病毒稀释50倍后,接种9日龄鸡胚,37℃培养48～72 h获得的尿囊液血凝价可达1∶256～1∶512,平均尿囊液量可达9.4 mL/胚。动物试验表明增殖获得的鸡胚尿囊液具有较强的致病性,将该尿囊液接种10日龄鸡胚和颈部皮下注射21日龄非免疫雏鹅,结果接种后鸡胚于30～48 h全部死亡。雏鹅平均死亡时间为62.6 h。特征性剖检病变为脾脏肿大,有灰白色坏死点;胰脏出血,有灰白色坏死点;肠道出血,溃疡;病料分离培养的病毒液HA价高达28,能凝集鸡红细胞,并出现解凝现象。     

许昌烟草根腐病的分子鉴定及致病性分析

为筛选出引起许昌烟草根腐病的病原菌,以具有典型根腐病症状的烟草病株及其根际土壤作为材料,采用组织块分离法、梯度稀释法和划线分离法筛选病原菌,通过菌株形态特征及rDNA-ITS分子生物学方法对病原菌进行鉴定,病原菌对烟草的致病性采用灌根接种法进行验证。结果表明,从烟草病株和根际土壤中筛选出38株疑似病原菌,其中菌株YG-1、W2G-2、XG-1、YJ-6、XJ-2、W1J-22与尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的相似性达到99.52%以上,而且对烟草幼苗具有致病性。因此,将引起许昌烟草根腐病的病原菌鉴定为尖孢镰刀菌,为烟草根腐病诊断、防控与防治提供一定的指导意义。