雏鸡心肌细胞分离及原代培养

为探讨雏鸡心肌细胞的分离、培养方法,采用胶原酶重复多次消化心肌组织,收集每次消化的上清液用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基终止消化,离心沉淀细胞后再加入培养基混悬细胞.采用差速贴壁法和化学法纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育,并对培养的心肌细胞进行免疫组化鉴定.结果显示,未贴壁时心肌细胞呈圆形,培养12～24 h心肌细胞开始贴壁生长,细胞伸出伪足呈梭形、多角形,3～4 d后形成细胞簇,5～7 d后细胞汇合成片.免疫组化结果表明α-SA抗原表达阳性,证明培养的细胞为心肌细胞,应用酶消化法可简便、快速地获得大量活力高的雏鸡心肌细胞.     

缺氧与肉鸡心肌细胞c-fos和c-myc基因表达的关系

利用细胞培养、原位杂交、免疫组化、图像分析等技术研究缺氧与肉鸡心肌细胞癌基因c-fos和c-myc表达的关系,进一步阐明缺氧与以右心肥大、衰竭为特征的肉鸡腹水综合征的关系。结果显示,缺氧显著引起心肌细胞内癌基因c-fos和c-mycmRNA的表达(c-fos mRNA:常氧149.6±22.4;缺氧205.4±57.6,P<0.01;c-myc mRNA:常氧155.2±25.7;缺氧197.4±26.2,P<0.01)。缺氧显著引起心肌细胞内癌基因c-fos和c-myc蛋白的表达(c-fos蛋白:常氧159.1±37.1,缺氧240.3±49.6;c-myc蛋白:常氧149.6±24.9,缺氧236.3±55.4;P<0.01)。结果表明缺氧显著诱发肉鸡心肌细胞内癌基因c-fos、c-myc的转录和表达,是启动心肌细胞肥大的重要原因。因此本研究进一步阐明缺氧是以右心肥大衰竭为特征的肉鸡腹水综合征的主要诱因。     

银杏叶提取物对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用研究

本试验旨在研究银杏叶提取物（Ginko biloba extract,GBE）对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用。取12日龄AA肉鸡心脏制备鸡原代心肌细胞,向原代心肌细胞培养板中分别加入0、5、10、50、100、150 mg/mL GBE,CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;将原代心肌细胞以1×10⁴个/孔接种于96孔板,培养48 h,分别加入0、5、10、50、100、200、500、1 000 μg/mL GBE,Hoechst 33258检测心肌细胞凋亡率,确定最适GBE浓度。42℃热应激处理（0、0.5、1、2和4 h）建立心肌细胞损伤模型,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、细胞丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量,以及超氧化物歧化酶（SOD）活性;Western blotting检测Hsp72蛋白表达。结果显示,高浓度GBE具有细胞毒性,50、100、150 mg/mL GBE能极显著抑制细胞生长（P<0.01）,50 μg/mL GBE能够极显著提高细胞增殖率（P<0.01）。热应激后细胞发生凋亡,细胞内MDA、LDH含量增加,SOD活性、GSH-Px含量减少,产生氧化损伤;GBE可以降低热应激时细胞LDH和MDA的含量,增加SOD活性和GSH-Px的含量,热应激2、4 h,GBE处理效果明显。此外,GBE可增加心肌细胞中Hsp72蛋白的表达。综上所述,GBE能降低热应激状态下心肌细胞的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及提高Hsp72的表达有关。     

鸡心肌细胞培养及免疫组化鉴定

心肌细胞是研究心脏肥大、心脏衰竭、心肌缺血再灌注损伤及自由基损伤等病理过程发生发展的主要环节。心肌细胞的培养有助于深入研究心脏疾病的病理机制。在人类医学中培养心肌细胞进行研究已成为心血管系统疾病研究的主要手段[1,5～ 7] 。随着对禽类心血管系统疾病研究的不断深入 ,以培养的心肌细胞为材料进行研究将占重要地位[2 ,3,8] 。鸡胚心肌细胞培养方法已经成熟 ,但有些禽类疾病如肉鸡腹水综合征 ,利用疾病高发日龄 ( 2 7～ 45天 )鸡的心肌细胞进行研究应该更能够准确地反映该病发生发展过程中心肌细胞的病理机制。因此 ,需要探索出…     

热应激对动物心肌细胞影响研究进展

热应激是动物饲养过程中经常遇到的难题,给畜牧业带来了较大的损失。由于心脏对热的敏感性较高,当动物机体遭受热应激损害时,首当其冲的器官往往是心脏。所以,如何提高心脏抵抗热应激的损伤,成为养殖业日益关注的焦点。论文从热应激对心脏的影响、心肌细胞在热应激作用下的组织形态学变化、热应激损伤心肌细胞的机制、热应激作用下心肌细胞的自我保护及如何提高心肌细胞对热应激的抵抗能力方面,结合近年来的研究做一综述。     

西洋参皂苷对新生鼠缺血-再灌注心肌细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨西洋参皂苷对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,及抑制心肌细胞凋亡的机制。方法:利用原代培养的乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注模型;采用MTT、TUNEL法检测心肌凋亡细胞;Western blot检测caspase-3,caspase-9蛋白的表达。结果:缺血再灌注组出现心肌凋亡细胞;caspase-3,caspase-9的表达缺血再灌注组较对照组明显增加(P0.05),PQS治疗组较缺血再灌注组明显下降(P0.05)。结论:心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,PQS治疗可以显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡。PQS通过抑制caspase-3;caspase-9,而抑制心肌细胞凋亡。     

心肌原代细胞培养概述

心肌细胞培养作为一种体外研究模型,可以更便捷的从细胞和分子水平对其生长、发育、生理、代谢、病理等进行研究,在许多研究领域有重要意义。笔者等对心肌细胞增殖特点、组成、分类和形态特点及原代心肌细胞培养方法进行综述。     

仔猪心肌细胞分离及培养方法研究

为探讨仔猪心肌细胞的分离及培养方法,采用胶原酶Ⅳ型和胰酶同时消化心肌组织,用10%胎牛血清终止消化,并用100目细胞筛过滤后,1200 r/min离心沉淀细胞,再加入培养液重悬细胞。采用差速贴壁法纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育。结果显示,未贴壁时心肌细胞呈圆形,培养12~24 h心肌细胞开始贴壁生长,细胞伸出伪足呈梭形、多角形,3~4 d后形成细胞簇,5~7 d后细胞汇合成片。因此,同时使用胶原酶Ⅳ型和胰酶消化仔猪心肌可简便、快速地获得高活力的心肌细胞。     

高能微波对体外培养乳鼠心肌细胞生长活力的影响

体外培养的心肌细胞可保持心肌结构及功能上的诸多特点 ,有自发性节律性搏动 ,且不受神经、体液等体内因素的影响 ,因而在实验研究上得到了广泛应用。目前 ,乳鼠心肌细胞的培养方法较多 [1 ] ,但由于心脏细胞成分复杂 ,心肌细胞培养过程较为繁琐 ,应根据实验目的摸索简便快捷的培养方法。随着微波技术的应用 ,微波污染也日益增多 ,并成为日常影响人畜身体健康的主要物理因素之一 [2 ]。本试验对乳鼠心肌细胞的培养方法作了改进 ,并观察了高能微波对乳鼠心肌细胞生长活力的影响。1　材料与方法1 .1　动物　生后 1～ 3d的 Wistar大鼠 (二级 )…     

钙信号转导与缺氧诱发肉鸡心肌细胞c-fos和c-myc基因表达的关系

利用细胞培养、免疫组化、原位杂交、图像分析技术研究钙信号与缺氧诱发心肌细胞癌基因c-fos、c-myc表达的关系,进一步阐明钙信号转导与以右心肥大衰竭为特征的肉鸡腹水综合征(AS)的关系。结果显示,钙通道拮抗剂异搏安(V)、硝苯吡啶(N)、环孢霉素A(C)显著抑制缺氧引起的癌基因c-fos和c-myc mRNA的表达(c-fosmR-NA:常氧149.6&#177;22.4;缺氧205.4&#177;57.6,缺氧+V151.3&#177;20.1,缺氧+N154.5&#177;25.2,缺氧+C 166.5&#177;22.1;c-myc mRNA:常氧155.2&#177;25.7;缺氧197.4&#177;26.2,缺氧+V 160.5&#177;19.4,缺氧+N 171.3&#177;25.4,缺氧+C158.9&#177;23.6)。同时显著抑制缺氧引起的癌基因c-fos和c-myc蛋白的表达(c-fos蛋白:常氧159.1&#177;37.1,缺氧240.3&#177;49.6,缺氧+V 165.2&#177;52.2,缺氧+N 166.5&#177;49.8,缺氧+C 190.8&#177;33.6;c-myc蛋白:常氧149.6&#177;24.9,缺氧236.3&#177;55.4,缺氧+V178.9&#177;42.1,缺氧+N174.4&#177;36.3,缺氧+C 16...     

新生Wistar大鼠心肌细胞的分离培养与鉴定

本试验取新生24 h内的Wistar大鼠心肌组织,无菌剪碎后采用胰酶消化法分离细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,逐日在倒置相差显微镜下观察。结果于培养后48 h即可观察到部分细胞搏动;72 h后,细胞逐渐展开,搏动频率在60~70次/min,从而初步确立培养的细胞为心肌细胞;进一步采用心肌细胞特异性蛋白(cTnT)抗体和α肌动蛋白(α-actin)单克隆抗体分别对培养的心肌细胞进行免疫荧光及免疫组织化学鉴定,结果均呈阳性。     

心脏常见疾病归类

心肌是横纹肌和不随意肌,是巨大的网状合胞体.心肌纤维由横纹润盘、心肌细胞、动静脉、肌原纤维参与收缩.心肌纤维与肌原纤维之间形成间质,由结缔组织构成.     

盐霉素对鸡原代心肌细胞的毒性作用及其机制的初步研究

初步探讨盐霉素对鸡原代心肌细胞的毒性作用及其毒性机制。采用差速贴壁法结合化学纯化法分离鸡原代心肌细胞,应用免疫荧光法鉴定心肌细胞纯度,给予1、5、10、20、50μg·mL-1盐霉素处理后,观察心肌细胞形态,采用MTT法测定盐霉素对心肌细胞活性的影响;比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放、肌酸激酶(CK)活性;流式细胞术分析盐霉素对心肌细胞凋亡及线粒体膜电位的影响;电子显微镜观察盐霉素对心肌细胞超微结构的影响;荧光显微镜观察盐霉素对心肌细胞氧化应激的影响;比色法测定盐霉素对心肌细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白酶活性的影响;qRT-PCR检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)、Bax及Bcl-2mRNA的转录水平。结果表明:分离所得鸡原代心肌细胞形态良好,纯度大于90%;盐霉素以显著的浓度-时间依赖性方式抑制心肌细胞生长并诱导细胞死亡;盐霉素导致心肌细胞LDH释放极显著增加(P0.01),细胞内CK酶活性增强,呈浓度依赖性(P0.01);盐霉素导致心肌细胞凋亡率极显著升高(P0.01),线粒体膜电位(ΔΨm)明显下降(P0.01);电子显微镜观察显示盐霉素导致心肌细胞线粒体严重肿胀、空泡化,嵴溶解甚至消失;盐霉素导致心肌细胞内活性氧(ROS)显著升高;细胞质Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白酶活性均极显著升高(P0.01);qRT-PCR结果表明凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Cyt-C及Bax mRNA转录上调,Bcl-2mRNA转录下调(P0.01)。盐霉素可以通过细胞凋亡引起鸡心肌细胞死亡,线粒体途径和死亡受体途径可能共同参与了盐霉素诱导的鸡心肌细胞凋亡。     

维拉帕米对肉鸡腹水综合征患鸡心肌细胞c-fos和c-jun表达的影响

右心肥大衰竭是导致腹水综合征(ascites syndrome,AS)患鸡发病的重要因素.作者通过免疫组化和原位杂交技术初步探讨c-fos和c-jun在AS肉鸡右心肥大和衰竭过程中的变化及维拉帕米对其表达的影响.结果发现:在22、29、36、43和50日龄时,与对照组肉鸡相比,低温组肉鸡右心室心肌细胞c-fos/c-jun蛋白和mRNA的平均光密度值显著或极显著(P<0.05;P<0.01)升高,其mRNA的阳性面积百分比也极显著升高(P<0.01),与低温组肉鸡相比,维拉帕米组肉鸡右心室心肌细胞c-fos/c-jun蛋白和mRNA的平均光密度值显著或极显著(P<0.05;P<0.01)降低,其mRNA的阳性面积百分比也极显著降低(P<0.01).结果表明c-fos和c-jun癌基因在右心肥大和衰竭中起着重要作用.维拉帕米可有效抑制c-os和c-jun癌基因的表达,有利于防止右心肥大和功能性衰竭.     

脑活素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

用结扎颈动脉和缺氧的方法建立一侧缺氧缺血性脑损伤(HIE)动物模型,观察脑活素对HIE大鼠脑组织损伤的治疗作用。结果发现,缺氧缺血后新生大鼠脑组织血栓素B2(TXB2)和6酮--前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量、细胞凋亡数及对侧脑组织含水量均显著升高,表明新生大鼠缺氧缺血性脑损伤与脑血流改变、脑细胞凋亡及脑组织含水量的变化密切相关;缺氧缺血大鼠应用脑活素治疗后,其脑组织TXB2和6-keto-PGF1α含量、细胞凋亡数及脑组织含水量均下降,表明脑活素通过改善脑血流、降低脑细胞凋亡及脑水肿程度来减轻缺氧缺血造成的损伤,对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤发挥有效的治疗作用。     

五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导心肌肥大损伤的cT-I、cT-T、ET-1调控作用的影响

培养大鼠源H9C2心肌细胞进行试验,共分为6组,对照组(加入细胞培养液);模型组(10~(-6)mol/L去甲肾上腺干预48 h);卡托普利组与模型组同样处理后,加入卡托普利5 mg/L;五味子醇甲低、中、高剂量组与模型组同样处理后,分别加入五味子醇甲5,10,20 mg/L,作用48 h。通过观察HE染色细胞的形态变化,图像分析系统测定心肌细胞表面积,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342染色法检测心肌细胞的凋亡率,JC-1法测定线粒体膜电位,Western blot检测CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达。结果显示,五味子醇甲可降低心肌细胞凋亡率和提高心肌细胞存活率,对心肌细胞的形态具有改善作用,并下调了CT-1、CT-T、ET-1蛋白表达。结果表明,五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,可能通过下调CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达,降低炎性反应,减少对心肌细胞的损伤凋亡。     

昆明小白鼠胚胎干细胞分离培养的影响因素

为了研究影响胚胎干细胞(ESC)体外分离克隆的因素,试验采用3~5日龄大鼠心肌细胞制成心肌细胞条件培养基(RH-CM),比较了4种培养体系对小鼠胚胎干细胞体外培养的影响,并分析比较了不同饲养层对胚胎干细胞分离克隆造成的影响。结果表明:添加重组鼠白血病抑制因子和心肌细胞条件培养基在胚胎贴壁率、内细胞团(ICM)形成率和原代胚胎干细胞集落形成率以及抑制分化的过程中起到的作用显著优于未添加任何诱导成分的培养基;作为饲养层,小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离培养胚胎干细胞的效果优于小鼠睾丸支持细胞(MS)。     

采用原位杂交检测PQS对体外模拟大鼠缺血-再灌注心肌细胞caspase-3和caspase-9mRNA表达的影响

为了探讨西洋参总皂苷(PQS)对缺血-再灌注(I/R)心肌细胞凋亡的抑制机制,试验采用原代培养乳鼠心肌细胞,模拟心肌缺血-再灌注损伤模型,并给予PQS干预,应用原位杂交检测试剂盒检测PQS对体外模拟大鼠缺血-再灌注心肌细胞caspase-3和caspase-9 mRNA表达的影响。结果表明:溶剂对照组与正常对照组比较,caspase-3和caspase-9 mRNA表达明显增加;PQS处理组与溶剂对照组比较,caspase-3和caspase-9 mRNA表达降低。说明PQS可下调心肌细胞caspase-3和caspase-9 mRNA的表达,从而抑制心肌细胞凋亡。     

大鼠心肌细胞分离纯化方法的改良

心肌细胞原代培养是心血管相关研究方面、以及细胞生理方面广泛应用的研究工具,目前已是多门学科研究的热点。心肌细胞培养的相关报道方法很多,由于各实验室所解决的问题、实验室具体条件的不同,所采用的培养方法也不尽相同。如何建立一种比较简单、快速,并且尽可能地获得较高的细胞存活率、较高的细胞活力,仍是心肌细胞培养模型制作中的关键问题。本研究借鉴前人的经验,采用比较完善的方法培养出纯度较高、活力较强的新生SD大鼠的原代心肌细胞,足以满足相关科研的要求。     

HSP在热应激条件下调控鸡心肌细胞损伤的功能分析

心肌对热敏感,心脏成为热应激损伤的重要器官之一,严重时会引发猝死.热休克蛋白(HPS)是机体在遭受热应激刺激时激活的重要内源性保护机制.为了观察热应激条件下对蛋鸡心肌组织的病理性损伤,以及心肌细胞启动热休克蛋白的变化规律,选用40只300日龄海兰褐蛋鸡构建热应激试验动物模型,通过对血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶...