2020年夏季昌黎县貉细小病毒病疫苗免疫效果分析

通过入户调查及抽检免疫貉血样检测细小病毒血凝-血凝抑制抗体的方法，了解昌黎县养殖场细小病毒性肠炎疫苗免疫情况及不同疫苗、不同免疫程序的免疫效果，以便指导貉细小病毒病防控及养殖生产。结果表明：7月份调查的昌黎县貉养殖户细小病毒性肠炎疫苗免疫率达100%,抗体均值为2^(7.03),合格率为89.5%;不同公司的疫苗效果为A公司最好，B公司次之，D公司稍差，C公司活疫苗效果最差；不同类型疫苗统计结果为灭活疫苗效果好于活疫苗；不同免疫程序统计结果为多次免疫好于单次免疫。     

猪细小病毒VP2蛋白的原核表达及其免疫原性评估

利用原核表达载体pET28a和pColdⅠ与猪细小病毒VP2基因分别构建重组表达质粒，并采用与伴侣蛋白共表达和低温诱导表达猪细小病毒VP2蛋白，并以电镜观察、血凝效价测定等进行鉴定。结果显示，2个表达载体均能对重组蛋白进行可溶性表达。冷休克载体组pColdⅠ-VP2蛋白在上清中表达效率更高且杂蛋白较少，诱导时不需要额外添加L-阿拉伯糖，表达过程工艺相对更简单。纯化后的pColdⅠ-VP2蛋白具有一定的免疫反应性，能在体外组装成病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs),且具有血凝活性，使用206佐剂混合乳化重组蛋白免疫豚鼠后，血清中能检测到高滴度血凝抑制抗体。上述结果为进一步研究新型安全高效的猪细小病毒疫苗提供了数据支持。     

番鸭细小病毒VP3基因和鸭IL-2基因真核融合表达载体的构建

将番鸭细小病毒(MDPV)主要结构蛋白VP3基因和免疫刺激基序(CpG)依次克隆至质粒pIRES-dIL2上,构建了重组质粒pIRES-dIL2-VP3-CpG。核酸疫苗重组质粒转染BHK-21细胞进行间接免疫荧光试验,可在细胞浆中检测到绿色荧光,表明重组质粒可以成功地在真核细胞内表达。     

共表达猪IFN-γ基因对PPV VP 2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究

将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2.用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况.将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒火活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平.试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48 h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达.pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体.结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫.     

貉细小病毒LN10-1株分离鉴定及其免疫原性研究

为研制貉细小病毒性肠炎疫苗,筛选出针对貉细小病毒性肠炎免疫原性好、安全高效的疫苗备选株,应用CRFK细胞从辽宁省发病貉的粪便中分离病毒,并通过形态学、血清学、分子生物学、动物回归及免疫接种等方法对分离株进行鉴定。鉴定结果表明成功分离出1株貉细小病毒,命名为LN10-1株。其VP2基因核苷酸序列与猕猴源猫泛白细胞综合征病毒株(BJ-22/2008/CHN株)相似性高达99.7%。VP2蛋白上决定宿主范围的2个氨基酸位点发生了突变。VP2基因种系发生分析显示,LN10-1株位于猫泛白细胞综合征病毒(Feline panleukopenia virus,FPLV)、蓝狐细小病毒(Blue fox parvovirus,BFPV)、水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)组成的食肉类动物细小病毒聚类分支与由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)组成的聚类分支。由LN10-1株制备的灭活疫苗免疫结果显示,接种28d细小病毒中和抗体滴度可达到1∶256以上。推测LN10-1株可能正处于FPLV与CPV进化的中间状态,或是CPV适应新宿主(貉)而形成的一种新病毒,可以作为针对貉细小病毒性肠炎灭活疫苗的候选株。     

猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及病毒拯救

用PCR法扩增猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)全长基因组。将全基因组插入到真核生物表达载体PcDNA3.1的多克隆位点中,获得单拷贝重组质粒P-PCV2和串连双拷贝重组质粒p-2PCV2,将所得质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经7次连续传代后,间接免疫荧光试验显示在细胞中含有病毒抗原。提取mRNA后经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录。免疫小鼠后,对免疫后不同天数小鼠的血清用ELISA检测,结果到免疫后35 d病毒几乎都能检测到衣壳蛋白特异性抗体,小鼠致死后在其体内也能检测到病毒DNA。结果表明,所构建的2种重组质粒均可表达并在体外组装出有感染性PCV2病毒粒子。为进行PCV2分子特性、疫苗免疫及致病机理研究打下了基础。     

猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2融合基因在重组杆状病毒中的表达

将猪细小病毒分离株LJL12 VP2基因和猪瘟病毒多肽基因E290克隆至真核表达载体pMel Ba-cA,将该重组质粒与Bac-N-Blue DNA共转染昆虫细胞,并对表达产物进行分析,构建了表达猪瘟病毒T细胞表位和猪细小病毒VP2融合蛋白的重组杆状病毒。结果显示,获得了含VP2基因和E290基因的重组质粒pM-VP2-E290,昆虫细胞sf9的表达产物经SDS-PAGE、Western-blot检测后确定所表达的蛋白质分子质量大小约为67 ku,且具有天然蛋白的抗原特性。免疫电镜观察可见表达产物形成的病毒样颗粒。证实,成功构建了同时含有PPV VP2基因和CSFV特异性T细胞表位基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中得到了高效表达。     

H5N1和H9N2禽流感病毒HA抗原性对比分析和基因免疫研究

根据H9N2和H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计合成全基因扩增引物．将RT—PCR扩增2个毒株的HA基因进行序列测定．对推导的氨基酸序列通过MIF Bioinformatics软件进行抗原表位分析和糖基化位点进行分析。构建2个基因的真核表达质粒．检测2个毒株的HA基因疫苗免疫后外周血中HA特异性抗体的效价．并比较HA2个亚型免疫应答特异性的差异。结果表明,2株毒株禽流感病毒血凝素抗原表位和糖基化位点存在较大差异,重组质粒免疫后成功地诱导了体液免疫反应。两种亚型禽流感的HA基因免疫诱导的对本亚型病毒的抗体应答水平明显高于另一亚型．     

含T细胞表位的猪细小病毒VP2基因核酸疫苗的构建及其在小鼠中的免疫原性分析

为研制猪细小病毒(PPV)主要保护性抗原VP2基因核酸疫苗,本研究将猪圆环病毒(PCV)编码T细胞表位P21多肽的序列连接于PPV VP2基因的5’端克隆于pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA-P21-VP2,并将其经磷酸钙介导转染HEK293T细胞中检测其表达情况。SDS-PAGE和western blot检测表明,P21-VP2重组蛋白获得了有效的表达,其分子量约为67 ku。将pcDNA-P21-VP2肌肉注射BALB/c小鼠后,采用ELISA方法检测其抗体,并采用MTT法检测小鼠免疫后脾脏淋巴细胞的增殖活性。试验结果表明,重组质粒能够有效诱导小鼠产生明显的抗体反应,并且对淋巴细胞的增殖反应有明显促进作用。该实验结果为研制有效的PPV核酸疫苗奠定了基础。     

貉犬瘟热的预防

<正>1预防注射貉子犬瘟热疫苗注射要提前,貉子的哺乳期一般为45d左右,多年来养殖场都是在仔貉分窝后2～3周(即出生后70d左右)才开始免疫注射犬瘟热疫苗、细小病毒、肠炎等单联苗或五联苗。实践证明,免疫效果不佳。因为在注射免疫前的2～3周内仔貉已感染病毒,处于疾病的潜伏期。而这期间,多数仔貉的母     

免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白

本文应用免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白（Ｉｇ）。检测结果证明驴抗犬细小病毒所产生的Ｉｇ对犬细小病毒具有较强的特异性反应。因此认为,第四军医大学动物保健品研制中心所制备的免疫球蛋白对犬细小病毒性肠炎和心肌炎具有良好的治疗和预防作用。     

犬细小病毒病的流行现状调查

对犬细小病毒病流行现状进行调查,为本病的预防、诊断和治疗提供依据。 用犬细小病毒抗原检测试剂盒对2008年门诊的具有腹泻、呕吐、粪便带血等体征的189只患犬作病原检测,对犬细小病毒阳性病例兼有发热、咳嗽体征的16例病犬同时作犬瘟热病毒抗原检测。结果犬细小病毒阳性病例共137只,发病年龄从1个月～15岁各年龄段均有分布,以6月龄以下幼龄动物发病较多,占65.7%。流行季节差异不大,以春季病例略多,占27.0%。犬细小病毒与犬瘟热病毒混合感染的有12例,占8.8%。对在疫苗接种免疫保护期内的4只患犬进行检测,3只犬细小病毒阳性。结论：①免疫力尚未建立是幼犬发病的主要原因;②不按规定的免疫程序对动物进行加强免疫是成年犬发病的主要原因;③在部分发病幼犬中存在犬细小病毒与犬瘟热病毒的混合感染;④老龄动物对免疫的应答能力下降可导致免疫失败。     

中西结合治疗216例犬细小病毒病疗效观察

通过临床症状、流行病学特点和犬细小病毒抗原试剂盒对疑似细小病毒感染的216例病犬进行确诊,并对确诊为细小病毒感染的部分病例进行抗体水平检测,以判断其预后,采用中西结合的综合措施治疗发病犬,治愈率达到70%,提出了有效的预防措施。     

Pathogenesis of canine parvovirus enteritis: sequential virus distribution and passive immunization studies

After oral inoculation, the sequential distribution of canine parvovirus was studied in 14 nine-week-old seronegative beagle dogs. Two or three dogs were necropsied on days 1 through 6 after inoculation. Tissues were collected for virus isolation, immunofluorescence testing, and light microscopy. Virus was isolated from, and fluorescent cells were seen in the tonsil, retropharyngeal and mesenteric lymph nodes one and two days after inoculation. Virus infection of systemic and intestinal lymphoid tissues occurred as early as three days after inoculation and was associated with viremia. Intestinal epithelial infection was first seen four days after oral inoculation. All dogs were viremic before intestinal epithelial infection was found. Fecal virus excretion first occurred four days after oral virus inoculation. Intestinal virus infection and lesions became progressively more severe between four and six days after inoculation. The severity of intestinal lesions was variable and related to the severity of systemic lymphoid tissue lesions and the magnitude and duration of viremia. Four littermates of virus-infected dogs were passively immunized against canine parvovirus with convalescent canine serum 24 hours after oral virus inoculation. Neither clinical signs, lymphopenia, nor fecal virus excretion occurred in passively immunized dogs. Intestinal epithelial infection was not demonstrable by immunofluorescence testing when passively immunized dogs were necropsied four, five, and six days after virus inoculation.     

An electron microscopic study of viruses associated with canine gastroenteritis

An electron microscopic study was carried out on specimens of feces and intestinal contents from cases of canine gastroenteritis submitted to the Diagnostic Laboratory, New York State College of Veterinary Medicine, during 1979-1981. The majority of samples came from New York State and the Northeast with no marked shift in distribution over the three year period. Canine parvovirus was the major virus identified. In August and September 1980 there was an epidemic of canine gastroenteritis, with 247 samples received during this two month period alone, of which 48 percent were positive for canine parvovirus. Almost half of the total number of specimens examined were from dogs less than 6 months of age and well over 50 percent of these were parvovirus positive. In addition to canine parvovirus, three cases of coronavirus, two cases of rota-like virus and one case of astro-like virus were detected. Three dual infections with canine parvovirus and rota or astro-like virus were also confirmed. An unidentified virus-like particle with cubic symmetry was found in two specimens. The adoption of immunoelectron microscopy for the detection of canine parvovirus in March 1980 facilitated identification of this virus and greatly increased the sensitivity of the technique.     

对流免疫电泳检测犬细小病毒免疫复合物中抗体的研究

通过对流免疫电泳的条件优选,实现了解离后犬细小病毒复合物中抗原抗体的分,达到了检测免疫复合物中抗体的目的。在应用检测试验中,通过与酶档ＳＰＡ染色法、血凝抑制试验及常规对流免疫电泳法比较,证实了该种检测方法的可靠性、敏感性和实用价值。     

Fatal outbreaks in dogs associated with pantropic canine coronavirus in France and Belgium

Infection with pantropic canine coronavirus was detected during outbreaks in France and Belgium. This was concurrent in most cases with canine parvovirus 2c. One outbreak was a deadly acute systemic disease with a single pantropic canine coronavirus infection. This is the first report of a fatality associated with pantropic canine coronavirus alone outside Italy.     

一株新分离犬细小病毒灭活疫苗的制备及免疫效果研究

JL0911株犬细小病毒是由军事兽医研究所流行病与病毒病防控技术实验室分离得到的一株新型犬细小病毒,其主要抗原位点上的氨基酸序列较国内先前分离到的其他株有较大差异,不能被归入目前已有的CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c三个类型。本研究旨在利用JL0911株犬细小病毒研制灭活疫苗,并评价其免疫原性。试验采用10^5.5 TCID₅₀/mL的犬细小病毒JL0911,以甲醛灭活后,加入1/4体积的纳米佐剂,制备了犬细小病毒灭活疫苗。取1.5 mL上述疫苗,通过肌肉注射免疫普通家犬,免疫前后不同时间均采集血清,在F81细胞系上测定犬细小病毒的中和抗体。结果显示,免疫后14 d,试验犬血中细小病毒中和抗体效价较免疫前有显著提高,最高可由0提高至2⁹,表明本试验分离的JL0911株犬细小病毒具有生产犬细小病毒灭活疫苗的潜在价值。     

犬细小病毒病发病情况调查与流行分析

对吉林市2009—2010年犬细小病毒病的发病情况进行了调查和分析。收集9个动物医院2年接诊的5684例疑似犬细小病毒病犬,通过临床检查及实验室诊断,确诊4124例患犬发生不同类型的犬细小病毒病。研究表明,本病发生多以肠炎型为主,占总发病数的49.64%;犬品种影响犬细小病毒病的发生,纯种犬的发病率最高,占62.85%,土种犬发病率最低,占11.99%;1~3月龄的幼犬多发,占发病数的65.11%;一年四季均有发病,多发于气温骤变的11~12月和2~3月;免疫次数也影响了犬细小病毒病的发生,每年2次免疫可以显著降低犬细小病毒病的发生。因此,选择高质量的疫苗,增加免疫次数,选择合理的饲养环境,加强多发季节和多发年龄段对犬的保护是减少本病发生的关键。     

环介导等温扩增技术快速检测犬细小病毒方法的建立

旨在建立一种利用环介导等温扩增技术(LAMP)检测犬细小病毒感染的新方法。根据Gen-Bank中犬细小病毒(CPV)VP2基因序列,设计4条LAMP特异性引物,对反应条件、特异性、敏感性、可视化效果和应用效果进行研究。结果显示,在65℃等温条件下、1h内可完成LAMP扩增过程;病毒的最低检出限量为10-2个TCID50/mL;特异性和可视效果良好;对36份临床标本进行检测,阳性检出率为80.5%(29/36),检出率高于普通PCR 72.2%(26/36)。建立的LAMP检测方法,显示了较高的特异性和敏感性,而且兼具高效、快捷、可视化的优势,为临床检测犬细小病毒感染提供了一种快速简便的新方法。