布氏杆菌微滴数字PCR方法的建立

为建立一种布氏杆菌微滴数字PCR qPCR方法,对布氏杆菌病的定量诊断提供技术支持,在实时荧光PCR (qPCR)检测方法(T/CVMA 20-2020)的基础上,建立了布氏杆菌微滴数字PCR方法,并对方法的反应条件进行了优化,同时对其敏感性、特异性、重复性进行了评估.结果 显示:本方法的最低检测下限为2.6 copi...     

猪细环病毒数字PCR定量检测方法的建立

[目的]实现猪细环病毒(TTSuV)的准确定量检测。[方法 ]根据TTSuV的序列特点,设计特异性引物、探针,建立数字PCR检测技术。对数字PCR反应体系中的引物和探针浓度进行优化,分析方法的灵敏度、特异性,并初步应用于进行临床检测。[结果 ]最终确定TTSuV1a和TTSuV1b数字PCR反应体系中最佳引物浓度均为250 nmol/L,最佳探针浓度均为300 nmol/L,TTSuV1a型和TTSuV1b型灵敏度均可达到单个拷贝数;以猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,结果无交叉反应;批内和批间试验表明,该方法的重复性良好;本实验室留存的92份血清样本的检测结果与其背景信息一致。[结论 ]本研究建立的TTSuV数字PCR法具有特异性强、灵敏度高、检测限低等优点,可用于TTSuV的定量检测。     

非洲猪瘟病毒微滴数字PCR检测方法的建立

建立一种具有高灵敏度的检测非洲猪瘟病毒的微滴数字PCR方法,为非洲猪瘟的快速诊断和流行病学研究提供技术支持。在《OIE陆生动物诊断与疫苗手册》中提供的qPCR检测方法的基础上,建立了非洲猪瘟病毒微滴数字PCR方法,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了评估。结果显示,该方法的最低检测限可达0.8copies/μL,敏感性高于qPCR方法,不与猪常见的6种病毒发生交叉反应,而且重复性较好。采用建立的微滴数字PCR和OIE的qPCR方法分别对78份临床病料进行非洲猪瘟病毒的检测,结果显示2种方法的符合率为100%。本研究建立的微滴数字PCR方法具有理想的敏感性和特异性,适用于临床上非洲猪瘟病毒的检测。     

野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立

为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法,针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针,优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估。结果显示,优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好,对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测,特异性良好;重复性试验结果显示,变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为10² copies/μL。参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件,进行多重ddPCR检测方法的建立,并且对该方法进行评价。结果显示,ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好;特异性及重复性良好;最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵...     

荧光PCR技术应用的研究进展

主要从病原核酸检测、基因表达分析2个方面综述了荧光PCR的应用现状,并且分析了荧光PCR在其他方面的应用以及其应用前景。     

动物疫病荧光PCR检测中假阳性的原因分析与控制

近年来,实时荧光定量PCR技术已被广泛应用于动物病原学检测,但检测中存在因实验室污染而导致检测结果假阳性的问题,因此如何确保动物疫病荧光PCR检测结果的可靠性,一直是研发团队和检测人员需解决的问题。本文从实验室质量管理入手,分析了动物疫病荧光PCR检测中假阳性形成的常见原因,并提出了综合控制措施,以期为兽医实验室荧光PCR检测工作提供参考。     

猪嗜血支原体PCR及荧光定量PCR检测方法的建立和比较

为了解猪嗜血支原体(Mycoplasma haemosuis)对猪群的感染情况并建立该病的检测方法,本研究根据GenBank登录的M.haemosuis 16S rRNA基因序列(FJ263944)设计合成PCR引物以及荧光定量PCR(FQ-PCR)引物和探针.以含16S rRNA基因的重组质粒为模板,通过对PCR反应...     

锦鲤疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据锦鲤疱疹病毒(KHV)胸苷激酶(TK)基因的保守序列设计一对引物和相应的TaqMan探针,建立荧光定量PCR方法,用于锦鲤疱疹病毒快速、灵敏、可定量的检测手段。构建并制备实时荧光定量PCR的标准品,对反应体系进行优化,并做特异性,敏感性和重复性试验。结果表明,成功构建荧光定量PCR标准品,建立荧光定量标准曲线,标准曲线的相关系数为0.992,所建立的荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高,重复性好。     

小反刍兽疫病毒液滴式数字PCR检测方法的建立及应用

为实现小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的快速、准确、定量检测,以国内PPRV Clone 9疫苗株N基因为靶位点设计特异性引物及探针,建立了液滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法,并对其特异性、敏感性及重复性进行评价。将所建立的ddPCR方法与实时荧光定量PCR(Fluorescence quantitative PCR,qPCR)方法的灵敏度进行比较分析并应用于PPRV(Clone 9株)核糖核酸标准物质的定量。结果显示,所建立的ddPCR方法特异性好,仅PPRV检测结果为阳性,其他羊源病毒类生物制品及毒种检测结果均为阴性;敏感性高,基因拷贝数检出限度为4.33拷贝/μL,比qPCR方法的灵敏度(57.3拷贝/μL)高10倍;重复性好,重复性试验的变异系数为1.8%;定量准确,具有一定资质的9家单位各组测量数据组间变异系数小于5%。试验建立的ddPCR方法能够有效地对PPRV核酸进行快速检测,为PPRV的诊断及绝对定量提供了有效方法。     

基于Taq Man探针的猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的研究

通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF7为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线建立了PRRSV的荧光定量RT-PCR检测方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL;用该方法对6份不同的组织样品进行重复性检测.结果显示具有良好的重复性和重现性.对阳性组织病料的检测表明该方法与常规RT-PCR阳性符合率为100%.但检测灵敏度高出常规RT-PCR 100倍.     

基于PLC控制的检漏仪系统的设计

基于PLC控制的检漏仪系统主要控制零件夹具的机械动作以及和检漏仪、人机界面之间的交互。该系统使用三菱FX系列PLC,GT系列人机界面,使用步进指令进行编程,根据控制要求完成PLC程序的设计与调试。人机界面可视化气缸动作,显示了检测结果,具有直观性和可操作性。     

基于GIS的数字校园地理信息系统的设计与实现

数字校园地理信息系统是GIS技术在校园空间的综合应用,是高校进行教学管理、决策和提供生活服务的先进工具。本文从当前数字校园的需求出发,首先介绍了高校校园GIS发展的必要性,然后以山东协和学院遥墙校区为例介绍了数字校园地理信息系统的方案设计,研究了数字校园地理信息系统的构建思路、设计目标以及系统的实现,最后对高校数字校园系统GIS应用进行了展望。     

空气粉尘浓度检测器电路设计与软件编程

本设计以ATmega382p单片机为控制中心,由GP2Y1010AU0F光学空气质量传感器测量空气粉尘浓度,通过单片机内置的10位A/D转换将模拟的电压信号转换成数字信号,得到粉尘浓度值,并由LCD1602显示屏显示出来。同时,设置浓度预警值并同测量值一起显示在显示屏上。当测量浓度超过预警值时,仪器就会报警。     

基于组合测试模型的系统测试工具设计与实现

核电国产化正在持续进行,核电软件作为核电生产的执行和管理体系上的一个重要组成部分。而核电软件测试作为高可信计算的重要验证和保障手段,在整个软件生命周期中占据着相当大的比重。在进行此类软件的系统测试时,不仅要求对照设计说明书进行常规非渐增式系统测试,还要求对输入卡值进行必要的参数替换和用例演化。整个用例演化与执行多依赖于人工,导致系统测试过程中存在工作量大、资源消耗大、效率低等问题。常见的系统测试工具难以满足此类多参数、多可选参数值、多状态的系统测试工作需求,基于这种现状,笔者提出了基于组合测试模型的系统测试工具,以试图解决测试过程中所面临的问题。     

管理软件及应用辅助教学系统设计及实现

管理软件及应用辅助教学系统力求提供完备的教学管理功能,成为一套功能齐全的管理信息系统,实现真正意义的教学相长。管理软件及应用辅助教学系统是对课堂教学起到辅助作用,为师生之间的沟通提供课堂以外的互动平台。文中介绍了基于网络环境的管理软件及应用辅助教学系统的设计与实现,包括系统需求分析和系统功能设计、数据库设计与连接以及主要的ASP文件的设计与编写。重点阐述了用户登录模块、题库管理模块、科目管理模块、试卷管理模块、选择测试模块和成绩查询模块的分析与设计思路。     

基于地理探测器模型的川西北家畜空间分布差异影响因素分析

川西北放牧家畜分布具有空间尺度分异的特征,以乡镇为单位的基础数据,在研究自然和人为因素对家畜空间分布的影响方面,有助于得出更细致、更客观的结果,将为川西北地区畜群结构的优化提供科学依据.试验以气象、地形、植被类型、植被覆盖度、土地利用类型、人口、出栏管理等方面的数据为基础,利用GIS空间分析和地理探测器模型相结合的方法...     

基于SPOC的混合式大学英语听力教学模式设计

大学英语听力一直在大学英语教学中占有重要地位。但是,由于教学学时有限,听力教学不可能占据太多的课时,这导致学生的英语听力难以提高。基于SPOC的英语听力教学模式是利用网络技术,设计一种线上线下相结合的混合式教学模式,旨在增加学生听力练习机会,高效利用课堂时间,提高学生英语听力水平。     

基于Android的新闻资讯软件设计与实现

随着移动通信技术和无线互联网技术的飞速发展,传统媒体行业也受到了互联网技术的冲击,通过报刊杂志等纸质媒体向用户提供新闻资讯的方式已呈现出诸多问题,例如携带不便,更新购买花销大等问题,已经无法满足日益增长的用户需求。本文基于Android平台设计实现了一个新闻资讯软件。该软件具有查看文字新闻、视频新闻和图片新闻的功能。该系统界面友好、操作简单、可维护性和可扩展性强,可在不改变原有代码的基础上加入新的功能模块。     

基于AVR单片机的无线遥控飞机航模的设计与实现

本文设计了一种基于AVR单片机的无线遥控飞机航模。该航模分为机身部分、遥控部分和接收控制部分,其中遥控部分通过单片机与CC1101无线模块通过SPI协议完成数据的交换和发送,而接收控制部分将接收到的信号同样通过SPI协议传输到单片机,然后通过快速PWM模式处理输出一定占空比PWM脉冲信号后与舵机电压信号比较,控制舵机的转动,进而控制飞机的飞行状态。航模结构简单,功能齐全,具有低成本、低功耗、可靠性高等特点。     

基于MATLAB GUI坐标转换软件设计与实现

MATLAB软件是以矩阵为单位进行数据的运算与处理,MATLAB的程序设计过程中,对象的句柄是非常重要的一个概念。每个对象都有自己独立的句柄,通过操作句柄,来实现对象的控制和修改。GPS测量的成果是基于WGS84椭球的纬、经度坐标和大地高,而我们实际应用中需要用到的是北京54或西安80的高斯投影平面坐标或者是地方坐标,因此就存在一个坐标转换的问题。本文介绍两种坐标转换方法:空间三维七参数坐标转换方法和平面二维四参数转换方法,利用这两种方法通过MATLAB设计界面并编写程序实现对Excel中的坐标数据进行坐标转换。