H9N2亚型AIV HA基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

[研究目的]利用杆状病毒表达系统表达AIV H9N2亚型HA基因以获得可以利用的HA蛋白;[方法]应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H9N2亚型HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的HA基因,通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点将H9HA基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9HA并将其转化DH10 Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9HA,再将其转染昆虫细胞High Five,进行PCR鉴定、SDS-PAGE和Westem Blot检测;[结果]HA基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,HA基因在High Five细胞中得到了表达,H9HA大小约为67 KD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性;[结论]HA基因在昆虫细胞获得表达,为进一步生产检测H9N2亚型流感病毒的检测试剂或者构建亚单位疫苗奠定了基础.     

H5N1亚型禽流感病毒HA基因DNA疫苗的构建和活体电击免疫试验初报

将高致病力禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的HA基因克隆到质粒pcDNA4/His鄄Max和pRc/CMV上得到真核表达质粒pC4H5和pCMVH5。将pC4H5和pCMVH5经活体电击和肌肉注射接种于3周龄SPF鸡的右腿内侧,并设空白质粒对照。二次免疫后第二周用104.2ELD50的同源病毒进行攻击。结果pC4H5和pCMVH5活体电击免疫SPF鸡能诱导产生持续表达的高水平特异性抗体,可产生100%的保护率,并能有效地阻止H5N1病毒攻击后病毒在泄殖腔的排出,而肌肉注射组和空白对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明活体电击免疫是一条可以与基因枪免疫相媲美甚至优于基因枪免疫的有效免疫途径。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF5序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃LZH株的ORF5基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBacHTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBacHTA-ORF5,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBacHTA-ORF5转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF5;并成功构建了PRRSV LZH株ORF5基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础.     

具有荧光标签的猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒表达系统中的表达

为了获得具有标记的猪瘟病毒Erns蛋白,通过基因工程操作,使猪瘟病毒Erns基因与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合,用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了ErnsGFP融合蛋白,经Western Blot和荧光显微镜观察证实,表达产物分子量正确,且发出易于检测的绿色荧光,具有标记的Erns蛋白的获得...     

近年来新疆第二产业内部结构的时空变化特征分析——基于分行业就业人口分布的实证研究

新疆地域广阔,受各地州市自然基础、资源禀赋、历史文化等条件差异的影响,第二产业内部各行业地区差异较大,就业人口分布也不均衡。本文利用2000-2011年新疆分行业就业人口统计数据、行政区划面积和行政区划图等资料,采用地统计学、时间序列分析方法,结合GIS、Geoda空间分析工具,对新疆第二产业内部的空间结构特征和时序变化特征进行了分析,结果表明：①新疆第二产业内部各行业具有独特的形态分布。2011年新疆第二产业内部采矿业,制造业,电力、热力、燃气及水生产和供应业,建筑业分别呈现出两个独立中心-外围结构、两个“C” 型结构、“一轴两翼”结构、和“一”字型结构;②2011年新疆第二产业内部存在空间集聚现象,行业和地域分布不同。阿克苏地区、喀什地区是采矿业、制造业显著聚集的区域,阿克苏地区是电力行业显著聚集的地区。③2000-2011年期间新疆第二产业内部不同行业之间比重有较大的差别,采矿业和电力行业对第二产业内部结构的变动起着重要的作用。     

发展低碳农业的碳市场机制初探

文章综合分析了国际碳市场成因、机制、体系和标准,以及国内碳市场最新动态,文章认为：国际碳市场是国际碳补偿机制、碳排放权交易制度、以及交易平台的总和,是发达国家为实现低成本减排应对全球气候变暖而创置的一种崭新的市场机制;国际碳市场中有很多涉及到低碳农业的碳补偿项目标准,且标准日趋成熟,善加利用将会推动我国造林、再造林、森林保护、农林混合作业、生物工程、可再生能源、绿色农产品、有机农产品、废弃物综合利用等农业碳汇产业,和低碳排放农业技术进步。文章提出：在当前经济贸易全球化和社会主义市场经济体制背景下,充分发挥市场机制,遵照国际碳补偿项目标准、利用好国际、国内两个碳市场,是我国充分利用外资和国内社会资本发展低碳农业,实施工业反哺农业、城乡一体化发展战略的有效途径。     

H5N1亚型禽流感病毒核衣壳蛋白(NP)基因的进化及原核表达

参考GenBank上H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计引物,PCR扩增NP基因,对其进行序列分析并构建分子进化树。将克隆的NP基因插入原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中进行诱导表达,对诱导表达的NP重组蛋白进行纯化、Western-Blot鉴定及免疫原性分析。结果表明,克隆的NP基因与GenBank上发表的另外2个河南AIV毒株亲缘关系较近,诱导表达的NP重组蛋白主要以可溶性形式存在,分子量约为70 kDa,并且能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。     

共表达O型口蹄疫病毒P12A+3C基因的重组杆状病毒的构建

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表达。结果表明,表达产物能被O型FMDV阳性血清识别,具有一定的反应原性,表明重组杆状病毒构建成功,该研究为O型FMDV空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究提供了前期材料。     

鸡新城疫病毒La Sota株F基因克隆及原核表达

参照NDVLa Sota株核酸序列(AF077761)设计1对引物,利用RT-PCR扩增F基因并得到了长为1 700 bp的片段,将其克隆到pGEM-T easy vector中,经酶切鉴定和测序后克隆进原核表达载体pET-32a,将重组表达质粒转化BL21(DE3),在IPTG诱导下表达约83 kd的融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western blotting检测证实该基因片段获得高效表达且表达产物具有免疫学活性。     

鸡贫血病毒VP1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据鸡贫血病毒Cux_1株基因组序列设计了一对引物,通过PCR扩增出VP1基因。将扩增出的片段克隆到pGM_T载体上,通过测序分析证实该片段与鸡贫血病毒Cux_1株的VP1基因序列一致。然后将克隆化VP1基因亚克隆到PET_32a( )载体上并进行原核表达。SDS_PAGE和Western Blot分析表明,一个分子质量为70.4 kDa的重组蛋白获得了成功表达,并且鸡贫血病毒阳性血清能和重组蛋白发生反应。     

Grey Markov Forecasting Model

This paper presents objectives of study of grey system and the GM(1,1)grey forecast model is introduced.A new forecasting method was introduced which combined merits of both grey GM(1,1)forecast and Markov forecast overcome their shortcomings and increased precision of forecast.Finaly, an example for application was given.     

Forecasting Method of the Slope Displacement Based on the ANFIS Model

The forecasting model of ANFIS(Adaptive Neuro-Fuzzy Inference System) is applied to forecast the displacement values at observation point of the slope at the Shilong garden of Chongqing Shizitan Hydroelectric Power Plant.The forecast results show that the errors between the forecast values and the observation values are very little.It shows that this model may be well applied for the forecast of the displacement in the deformation of the slopes.     

基于SWAT的猫跳河流域径流及土壤侵蚀模拟研究

为了了解猫跳河流域水文水资源状况,预测水文物理过程、合理利用水资源,对其采取有效的水土保持措施,在GIS支持下,构建SWAT模型所需的空间数据库、气象数据库、土地利用数据库、土壤属性等数据库,考虑西南岩溶地区水文特点,对模型中的岩溶水功能模块进行改进,成功构建了猫跳河流域SWAT模型,模拟分析了流域的径流和土壤侵蚀过程,并对SWAT在该地区的适应性进行探讨。结果表明,SWAT模型很好地概化了研究区的参数,模拟效果较好,在整个流域内具有良好的适用性。通过计算27个子流域内的侵蚀模数,对流域内的土壤侵蚀强度进行了分级,结果显示流域下游的土壤侵蚀较为严重,是水土流失防治及治理的重点区域。     

秀山县暴雨成因分析及预报模式

为了分析研究秀山县暴雨发生的气候规律及其成因,通过对秀山1971—2010年间173个暴雨个例的年季变化特点、本地气象要素的变化、高空环流形势的演变进行统计分析,找出秀山县暴雨发生时的气候背景、环流形势。结果表明：秀山县暴雨开始前常常伴随气温回升,水汽压上升,气压下降的情况,当高空环流形势满足中高纬度两槽一脊型、东北低槽型、切断低压型和台风倒槽型其中一种形势时,秀山县未来24~48h内将出现1次区域性暴雨天气过程。统计得出了秀山县暴雨预报模式,为秀山县暴雨预报服务提供参考依据。     

基于SWAT模型的梁滩河流域非点源污染负荷评价

为掌握梁滩河流域氮磷污染物的时空分布特征,基于空间和气象数据构建流域SWAT氮磷负荷模型,并利用监测数据对模型进行率定和验证,借助投影寻踪法综合评价各子流域的主要非点源污染来源。结果表明：模型在研究区具有较好适用性,流域氮磷排放主要集中在丰水期（5—9月）且占全年的76%,氮磷负荷主要来自于农药化肥且以总氮排放为主。从空间上看,流域中部地区以地表径流污染为主,而西部地区水土流失较为严重,且污染负荷与泥沙排放量密切相关。     

Short-Term Electric Load Forecasting Based Trends Combination Model

In short term load forecasting based on ANN,weather is one of the important factors which impacts on load greatly. In order to capture the effect of weather on load, this paper presents a novel thought based on ANN and trends combination short term load forecasting. Decompose the underlying relationships between load and weather variables into three main trends of weekly, daily and hourly. Three separated ANNs capture each trend. Another ANN to arrive at the final forecast combines the forecasts yielded by individual ANNs. The performances of the proposed model and the traditional model are compared on the basis of one week ahead hourly forecasts. Results indicate that the proposed ANN based model can achieve greater forecasting accuracy than the traditional ANN based model.     

东北地区杨树烂皮病气象预报模型研究

为了研究东北地区杨树烂皮病气象预报预警技术,以2002-2008年东北地区杨树烂皮病发生程度为研究对象,利用相应气象资料,在相关分析、逐步回归和逐步判别分析方法的基础上,构建东北地区杨树烂皮病气象适宜度预报模型,并将气象适宜度指数划分为非常适宜、适宜、基本适宜、不适宜4个级别,以反映气象条件对杨树烂皮病发生发展的适宜程度。结果表明：东北地区杨树烂皮病发病面积与冬季气温日较差≥15℃的天数、春季和初夏平均气温呈正相关,冬季气温日较差越大、春季和初夏气温越高,越有利于杨树烂皮病发生发展;入冬冻害、春季温湿条件对东北地区杨树烂皮病发生发展起主导作用,气温、空气湿度与杨树烂皮病发生程度关系最为密切;影响东北地区杨树烂皮病发生发展的关键气象因子分别是3月下旬风速、3月空气相对湿度、4月温湿系数、3月和5月及4月上下旬气温、上年11-12月气温日较差≥15℃的天数。预报模型对2002-2008年的历史拟合和重发生年2009年预报取得了较好的效果,分级和分省外延预报平均准确率均在75%以上,3省预报准确率顺序为：黑龙江>吉林>辽宁。     

An Aggregate Demand Forecasting Model on the Residence of Chongqing Main City Zone

Developing of real estate industry is one of the important ways to optimize Chongqing's industry structure and develop Chongqing's economy based on the relative theory. This paper brings forward an aggregate demand forecasting model on the residence of Chongqing main city zone according as data of the level of residence and relative factors in a certain period of Chongqing main city zone,by the way of gradually regressing and compounding forecasting. The model indicates that, according with the characteristic of residence,the aggregate demand of the residence is positive correlation to the polulation of Chongqing main city zone.     

加工番茄产量组合预测模型研究

为了实现加工番茄产量的精准预测,通过采用方差倒数法来确定权重,将一元线性回归模型、灰色预测模型和指数平滑模型加以组合,根据2001—2009年新疆某加工番茄种植及产量数据,建立了加工番茄产量组合预测模型。以预测2010年和2011年番茄产量为例,结果表明此组合预测模型与单一预测模型相比更加准确可靠。该研究为加工番茄产业决策支持系统的建立奠定了理论基础。     

日光温室小气候要素预报模型研究

了解日光温室小气候要素变化规律,建立小气候要素预报模型,可以对日光温室资源合理开发,为日光温室小气候调控提供依据。应用辽宁省沈阳市东陵区日光温室暖棚内农田小气候观测仪采集的逐小时气温、相对湿度数据,将冬季、春季、秋季和晴天、多云、阴天几种情况进行组合,计算棚内日最高气温、日最低气温、日平均相对湿度,分析其变化规律,并利用自动气象观测站数据,建立基于逐步回归方法的预报模型。分析结果表明,日光温室内日最高气温和日最低气温呈现春季、秋季温度值接近,冬季明显低于春秋两季的特征;而冬季日平均相对湿度高于春秋两季。日最高气温具有显著的从晴天至多云至阴天减少的变化特征,日最低气温特征不如日最高气温明显;日平均相对湿度为从晴天至多云至阴天增加的变化特征。所建立的日光温室小气候要素逐步回归预报模型,均通过了显著性检验,相关系数为0.608~0.933,相对误差范围为0.1%~19.0%,相对误差平均值为2.7%~9.9%。