鱼类禽类哺乳类动物精子的冷冻保存和受精力（下）

公牛的精液稀释液和冷冻保护剂稀释液和冷冻保护液是冷冻保存技术的重要组成部分。Darii等(1979)进行了66种含单糖的稀释液与Laichiphos液(一种法国的商业稀释液)及乳糖-卵黄稀释液受胎率比较,在一次受胎率测定时,含有70％乳糖或蔗糖、20％果糖、10％蜜三糖、12mmMgSO_4加甘油和卵黄的冷冻稀释液受胎率达66.4％,而Lai-chiphos缓冲液的受胎率为(?)1.6％,Foulkes等(1980)给母鸡饲喂高浓度葵花油和牛、羊脂肪的仔鸡日粮,试图提高稀释液中卵黄的冷冻保护性能。虽然这样做卵黄的脂质成分发生     

哺乳动物精子干燥冷冻保存技术研究进展

文章阐述了哺乳动物精子干燥冷冻保存技术的原理及研究意义,回顾了近期国内外哺乳动物精子干燥冷冻保存的重要研究成果,分析了精子来源、冷冻液、干燥压强与速率、保存温度与时间等因素对哺乳动物精子干燥冷冻效果的影响。文章还总结了评价精子干燥冷冻保存效果的若干指标,如用干燥冷冻的精子进行胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)、染色体完整率、卵母细胞激活率、囊胚形成率和移植后产仔率,展望了哺乳动物精子干燥冷冻保存技术应用前景,并指出了该技术存在的问题。     

哺乳类动物精子的获能和顶体反应

介绍了在生殖过程中的2个重要的生理变化--获能和顶体反应,并综述了最近几年来在生殖生物学领域关于获能与顶体反应机制方面的最新成果.结果显示,cAMP、Ca2+、咖啡因等因素对精子获能有促进作用,ZP3、Ca2+、cAMP、肝素等因素对顶体反应有促进作用.所有研究成果表明,精子的荻能和顶体反应与精子膜的生理变化有着密切关系.     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。     

哺乳动物精子冷冻工艺中防冻剂的研究进展

精子冷冻是一种简单、经济、高效的生物遗传资源保存方法,目前已经应用到许多领域,并成为治疗人类不育、牲畜繁殖和生物资源多样性保护的重要手段。在精子冷冻保存过程中的适当阶段加入防冻剂,能够有效的避免或减少精子的冷冻损伤和寒害,从而提高冷冻—解冻精子的活力。作者就防冻剂的种类、防冻剂的选择及加入与去除的方式对冷冻—解冻哺乳动物精子活力的影响作一简要综述。     

冷冻保存绵羊精子质膜完整性检测的研究

为了探讨冷冻保存对绵羊精子质膜完整性的影响,研究采用低渗肿胀—伊红拒染(HOS-EY)法检测冷冻保存前后绵羊精子质膜的完整性。实验设计了5个HOS-EY低渗染液浓度梯度组合(110、130、1501、70、190mOsm),按精子尾部肿胀与否和头部着色与否区分为4种类型进行统计。结果表明:绵羊冻融精子头膜尾膜均完整的Ⅳ型精子率(22.36%)和头膜尾膜均损伤的Ⅰ型精子率(47.4%)与鲜精比较分别极显著减少(58.64%)和增多(20.94%)(P<0.01),表明冷冻-解冻过程对精子膜造成严重损伤;头膜损伤-尾膜完整的Ⅱ型精子率(28.82%)在冷冻过程中极显著增多(16.72%)(P<0.01),头膜完整-尾膜损伤的Ⅲ型精子在冷冻组发生率(1.72%)显著减少(2.58%)(P<0.05),表明精子头膜或尾膜的损伤是独立发生的,且头膜损伤易于尾膜,5种HOS-EY低渗染液中150 mOsm组对精子尾部肿胀的检测效果最好。     

调节精子功能的外源性物质及其作用机理

在人工授精及体外受精过程中,需要对精液进行稀释等处理,处理过程中外源性物质的添加会从不同的方面影响精液的质量和精子的受精力。本文阐述了氨基多糖、甲基黄嘌呤、无机离子、生殖激素、细胞因子、维生素、蛋白质等外源性物质对精子生理功能的调节及其作用机理。     

稀释液中添加PCS对冷冻保存过程中山羊精子质量的影响

笔者以绒山羊为试验动物,在卵黄稀释液中添加胆固醇硫酸脂(PCS),研究了在冷冻过程中PCS对精子质量的影响.添加PCS共设计了0.15,0.10,0.50 g/100 mL的添加量,总体分析以0.10 g/100 mL添加量为最佳,EY试验组显著好于EY对照组.其中,EY组解冻后精子活率、膜完整率、顶体完整率分别是34.94%、39.17%、75.24%;EY对照组分别是28.74%、30.70%、64.70%.     

动物种质资源冷冻保存研究和展望

动物种质资源冷冻保存是动物种质资源保护的重要组成部分,在防止动物种质资源的濒危、灭绝、丢失以及增加活体保种的遗传多样性、防止群体近交衰退等方面具有重要作用。论文介绍了我国动物种质资源的特点以及相关动物种质资源保护理论,在此基础上详细综述了国内外精子冷冻、卵母细胞冷冻、胚胎冷冻以及体细胞冷冻技术的发展和研究进展,结合动物种质资源保护应用中的实际,提出了未来冷冻保存在动物种质资源保护利用中需要解决的科学问题和技术问题。论文对于我国目前开展的动物种质资源保护和研究具有重要的参考价值。     

野生梅花鹿附睾尾精子冷冻保存的初步试验

以北海道野生梅花鹿(Cervus nippon yesoensis)的附睾为材料,初步探讨不同降温处理方法,即急速降温处理法(降温速度为4.20℃/min)与缓慢降温处理法(降温速度为0.21℃/min)对附睾尾部精子冷冻保存的影响。结果表明:两种降温处理方法对附睾尾精子降温、平衡及冷冻解冻后的精子活率、畸形率和顶体完整率等指标的影响无明显的差异(P>0.05)。     

冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响

研究冷冻保存前平衡温度对精子结构的影响,为提高猪精子冷冻效果提供参考。新鲜猪精液(Ⅰ组)稀释后于17℃过夜保存(Ⅱ组),然后于冷冻Ⅰ液中4℃平衡1.5h(Ⅲ组),再加入预冷的冷冻Ⅱ液于4℃平衡45min(Ⅳ组)。通过精子形态正常率及活力检测,吖啶橙(AO)染色检测精子DNA完整性,碘化丙啶(PI)染色检测精子头部质膜完整性,低渗肿胀试验(HOS)检测精子尾部质膜完整性,异硫氰荧光素标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色检测精子顶体完整性,并用扫描电镜(SEM)观察精子结构,评价冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响。结果表明,与新鲜精液相比,Ⅱ组精液的精子DNA完整性、质膜完整性、顶体完整性等精子结构检测指标所受影响无统计学意义(P0.05);Ⅲ组和Ⅳ组的精子结构检测指标明显受到影响(P0.05),但Ⅲ组和Ⅳ组间无显著差异(P0.05)。扫描电镜检测结果表明,17℃过夜保存精子未见异常,头、颈、尾结构完整,顶体完整、光滑;Ⅲ组精子头部质膜及头颈结合部有轻微损伤;Ⅳ组精子尾部和头颈结合部有不同程度的断裂。冷冻前从17℃降低至4℃及4℃平衡对猪精子结构有一定程度的损伤。     

谷胱甘肽对杜洛克猪精子冷冻保存效果的影响

为了探讨冷冻保存Ⅰ液中添加不同浓度谷胱甘肽(GSH)对杜洛克公猪精子冷冻保存效果的影响,试验将冷冻-解冻处理的精液分为6组,分别为对照组(冷冻保存Ⅰ液)和试验组(分别在冷冻保存Ⅰ液中添加1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mmol/L的GSH),在液氮中保存,然后检测精子活力、运动参数、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性,活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)和ATP含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以此来评价解冻后的精液品质。结果表明：与对照组相比,除GSH添加浓度为3.0 mmol/L时精子活力降低外,其他添加浓度精子活力均提高,其中添加浓度为2.5 mmol/L时提高最显著(P<0.05)。与对照组相比,GSH添加浓度为2.5 mmol/L时猪精子在解冻后各项运动参数均显著提高(P<0.05),添加浓度为2.0,3.0 mmol/L时对猪精子部分运动参数也有一定提高,而添加浓度为1.0 mmol/L时各项运动参数降低。与对照组相比,添加不同浓度GSH时精子质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性均提高,其中...     

辅酶Q10对杜洛克猪精子冷冻保存效果的影响

本研究旨在探讨添加辅酶Q₁₀对杜洛克公猪精液冷冻保存过程中精液品质的影响,试验分为6个组,分别为空白对照组(基础冷冻液)、阴性对照组(基础冷冻液+0.1%氯仿)和试验组(分别在基础冷冻液中添加50、150、250、350μg/mL的辅酶Q₁₀),检测冷冻-解冻后精子运动参数、质膜完整率(MI)、顶体完整率(AI)、线粒体膜电位(MA)、DNA完整率、ROS水平、MDA和ATP含量以及SOD、CAT、GSH-Px活性,并且对精子冷冻-解冻后的超微结构进行观察以及测定各凋亡因子的表达量。结果表明:添加150μg/mL辅酶Q₁₀试验组运动参数、SOD、CAT、GSH-Px活性、ATP、ROS含量、MI、AI、DFI以及线粒体膜电位较空白对照组提高(P<0.01),而MDA含量降低(P<0.05);Bcl-2基因在添加50μg/mL和150μg/mL辅酶Q₁₀组中的表达量高于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase3基因的表达量较空白对照组均降低(P<0.05);扫描电镜观...     

前列腺素PGF2α对冷冻保存的大熊猫精子受精能力的影响

以Ham′s F-10为基础液,添加了不同浓度的前列腺素PGF2α与大熊猫冷冻保存后解冻的精子在37℃水浴中孵育不同时间,通过检测精子的活力、存活时间、精子质膜完整性、顶体反应率和异种穿卵率来评估其对大熊猫冷冻精子体外受精能力的影响,结果显示：PGF2α能影响大熊猫冷冻精子体外受精能力。50μg/LPGF2α对大熊猫冷冻精子体外功能没有较大影响,较高浓度的PGF2α则会造成精子活力的损伤和精子顶体反应率降低,导致精子受精能力下降。     

虾青素和平衡时间对猪精子冷冻保存效果的影响

试验旨在研究虾青素和平衡不同时间对猪精子冷冻保存效果的影响。试验分为6组,空白对照组（冷冻保存I液）和试验组（冷冻保存I液中添加0.5 mmol/L虾青素,降温平衡时间分别为2、4、6、8、12 h）。结果表明：与空白对照组相比,平衡6 h的猪精子在解冻后各项运动参数均显著提高;平衡4、6、8 h组的精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、DNA完整率显著提高,活性氧含量显著降低;平衡2、4、6 h组的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶3种抗氧化酶活性显著提高,ATP含量显著提高;平衡6 h组的丙二醛水平降低4.74%(P<0.05)。综上,冷冻保存I液中添加0.5 mmol/L虾青素对猪精子冷冻保存具有一定的改善作用,其中以平衡6 h的效果最佳,能够显著提高猪精子冷冻保存效果。     

卵黄和十二烷基硫酸钠添加量对犬精子冻后活率的影响

本试验以Tris-葡萄糖稀释液为基础稀释液,就卵黄(20%、25%、30%)和十二烷基硫酸钠(SDS)的添加量(0.725 mg/ml、1.000 mg/ml、1.500 mg/ml)对犬精子冻后活率的影响进行了研究.试验结果表明,(1)20%的卵黄添加量组犬精子的冻后活率最高.25%卵黄添加量组和30%卵黄添加量组比较则没有明显差异(F﹤F0.05).(2)添加SDS与对照组比较,添加SDS组的精子冻后活率都较高.三种SDS添加量中,1.000 mg/ml的添加量效果最好,冻后精子活率极显著(F﹥F0.01)或显著(F﹥F0.05)高于添加量为0.725 mg/ml和1.500 mg/ml时的冻后精子活率.     

禽类胃肠道的防御机制（上）

禽类胃肠道可被看作是个储存食物、消化和吸收养分以及排泄废物的柔性管道,但是进入消化道的食物从某种意义上讲仍然处于机体之外。任何动物在其出生或孵出并与其环境接触后不久,就有特定的微生物菌群在其表面,如皮肤、羽毛、鳞片等上繁衍,同时肠道微生物菌群建立。