热研7-33-97袋装苗叶片愈伤组织诱导培养研究

为扩大橡胶树组织培养外植体来源和建立高效稳定的橡胶树叶片离体再生体系,以1年生巴西橡胶树品种热研7-33-97袋装苗叶片为材料,研究叶片的预处理、0.1%升汞不同消毒时间、离体叶片切取部位、3种激素(6-BA、NAA、2,4-D)不同浓度配比对愈伤组织诱导的影响,筛选愈伤组织诱导最适培养基。结果表明:用液体培养基MS+3mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA对橡胶树袋装苗叶片进行预处理,可诱导出愈伤组织;用0.1%升汞对袋装苗叶片消毒15 min,其存活率达2.47%,为最佳消毒方法;用含主脉叶块和含主脉出愈叶块未出愈伤组织部分进行培养所诱导的愈伤组织质地较坚实、呈黄绿色,为橡胶袋装苗叶片培养的最适宜外植体;橡胶袋装苗叶片最佳愈伤组织诱导培养基是MS+3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA+4%蔗糖+3 g/L植物凝胶,用此培养基对含主脉叶块和含主脉出愈叶块未出愈伤组织部分进行培养,其出愈率分别达49.07%和42.22%。结论:大田1年生橡胶树品种热研7-33-97袋装苗叶片经预处理后选择含主脉叶块为外植体,可诱导出理想的愈伤组织。     

水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织再生体系的建立

采用水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织作为分化再生的外植体，通过优化激素组合和调节培养基渗透压，建立了适合水稻遗传转化的高效再生体系，将水稻成熟胚诱导愈伤组织分化再生的过程划分为3个不同时期，即成熟胚盾片愈伤组织诱导，胚性细胞诱导保持，胚性愈伤组织分化再生，以CultureI(LS 2,4-D2.0mg/L)诱导成熟胚盾片愈伤组织，愈伤组织剥离后接种于Culture II-3(LS 2,4-D 2.5mg/L 山梨醇3g/L)上诱导胚性愈伤组织，继代后接种于Culture Ⅲ-2(MS NAA 0.5mg/L 6-BA 1.0mg/L Kinetin 2.0mg/L 山梨醇8g／L）上分化成苗，培养结果表明，该再生体系所获得的胚性愈伤组织分化再生率均在60％－80％之间，利用本研究建立的高效再生体系建立水稻外源基因遗传转化系统，使转化过程中所得转化愈伤组织高效再生成苗，从而顺利获得转化植株，可以提高水稻外源基因转化的效率，为水稻品种的定向遗传改良提供优良的遗传转化技术体系。     

马铃薯再生体系的建立及其遗传分析

以马铃薯品种中薯2号为试材,筛选不同的培养条件建立了较高效的马铃薯再生体系,并对其再生过程进行了蛋白质检测和RAPD分析。愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA2.25mg.mL-1+NAA0.1￣0.2mg.mL-1,愈伤组织的诱导率达到73.17%～76.01%。自然生长、初代培养和继代培养的马铃薯再生体的水溶性蛋白之间存在着一些差异。利用RAPD标记技术,通过对54个引物的严格筛选,获得了3个扩增产物略有差异的引物。     

马铃薯耐盐碱愈伤组织筛选及分化研究

以马铃薯12个主栽品种的茎、叶为外植体进行愈伤组织诱导和耐盐碱愈伤组织的筛选,MS分化培养上分化及植株再生的研究。结果表明:愈伤组织诱导率高的品种有夏波蒂、大西洋,诱导率分别为96.1%、92.9%,而且愈伤组织质量最好;筛选出耐盐碱性强的愈伤组织品种有坝薯10号、冀张薯5号及1867;对于芽的分化,分化率高的品种有坝薯8号、坝薯10号;筛选出了抗盐碱性强的再生苗7株,抗性中等的60株,抗性弱的3株,共70株。     

马铃薯极早熟品种东农303再生系统的筛选

以马铃薯品种东农 30 3的脱毒试管苗为供试材料 ,进行了 5种培养基对试管苗茎段愈伤组织诱导和植株再生影响的试验。结果表明 :不同的培养基表现出不同的诱导效果 ,愈伤组织诱导的最佳培养基是 2号培养基 (MS + 0 0 1mg/LNAA + 3mg/LBA) ,愈伤率是 90 4 %。植株再生的最佳培养基是 5号培养基 (MS + 2 2 5mg/LBA + 5 0mg/LGA3) ,再生率是 98 3%。     

大豆耐盐离体筛选分化再生植株的初步研究

大豆(Glycine max)小真叶外植体直接接种到含不同浓度NaCl的选择培养基中,愈伤组织诱导率随NaCl浓度增高而降低,获得再生植株的最高NaCl浓度为0.25％。用连续逐级转移愈伤组织不断加强选择压的方法,可使筛选耐盐再生植株的最高NaCl浓度提高到0.3％。     

马铃薯品种‘并薯6号’遗传转化体系的建立

以马铃薯品种‘并薯6号’无菌试管苗茎段作为外植体,通过对遗传转化过程中预培养时间、植物激素的种类及配比、筛选剂浓度和抗生素的种类及浓度进行研究,初步建立了马铃薯品种‘并薯6号’的愈伤再生转化体系。结果表明,预培养时间为2 d时,愈伤组织诱导率、出苗率及转化频率最高。最适外植体愈伤组织诱导的培养基配方为MS+2.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.5 mg/L 2,4-二氯苯酚代乙酚(2,4-D)+0.4 mg/L激动素(KT),愈伤组织的诱导率为86.7%,愈伤组织形态较紧密,为深绿色,茎段两端膨大呈哑铃状,表面的白色须状物和毛状根较少。最适愈伤组织分化的培养基配方为MS+1 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+1 mg/L赤霉素(GA_3)+1 mg/L玉米素(ZT),幼苗比较粗壮,长势良好。最适的植株再生及生根筛选剂为10 mg/L的潮霉素(Hygromycin B,Hyg),转化频率较高,为20.3%。农杆菌抑制剂的最适浓度为200 mg/L的特美汀(Timentin,TMT),且在愈伤组织诱导、分化及生根阶段都需要加入TMT。综上所述,通过对农杆菌介导的愈伤再生转化过程中各个因素的研究,初步建立了‘并薯6号’的遗传转化体系,为马铃薯分子育种发展提供一定的基础。     

马铃薯愈伤组织再生体系的研究进展

马铃薯愈伤组织再生体系的建立是进行马铃薯遗传转化的基础。外植体选择、培养基配方以及培养过程中褐化的控制等都是影响愈伤组织诱导和再生体系建立的关键因素。本文主要从愈伤组织诱导、愈伤组织继代和分化三个阶段进行详细总结,并提出愈伤组织诱导,建立再生体系中存在的问题及今后的研究方向,以期为建立马铃薯愈伤组织再生体系提供理论参考和技术借鉴。     

马铃薯种间体细胞杂种植株的形态学和农艺性状观察

对马铃薯双单倍体品系８１－１５和南美二倍体栽培种Ｓｏｌａｎｕｍ ｐｈｕｒｅｊａ原生质体融合获得的８块愈伤组织再生的１５个株系，８１－１５和二倍体野生种Ｓ．ｃｈａｃｏｅｎｓｅ原生质体融合获得的３块愈伤组织再生的１０个株系的形态学特征和农艺性状进行了观察。     

大麦单粒种子起源的小孢子培养再生频率研究

为提高单株小孢子培养的再生效率,以大麦品种花30为材料,在人工气候室研究了离体穗、离体小花预处理时间和诱导培养基中无机氮、有机氮含量以及添加PEG对愈伤组织产量、绿苗产量和再生能力的影响。结果表明,离体穗5℃处理19 d的愈伤组织和绿苗产量及再生能力均优于32 d的,离体小花预处理1～2 d可促进愈伤组织的形成和绿苗的分化;降低无机氮浓度[KNO_3降至707.5 mg·L~(-1),(NH_4)_2SO_4降至115.75 mg·L~(-1)]可提高愈伤组织和绿苗产量及再生能力;提高有机氮浓度(谷氨酰胺从400 mg·L~(-1)提高到1 600 mg·L~(-1),水解酪蛋白从100 mg·L~(-1)提高到400 mg·L~(-1))可增加小孢子愈伤组织和绿苗产量;培养基中添加4%PEG可提高小孢子愈伤组织产量和质量。     

马铃薯叶盘愈伤组织再生苗抗青枯病变异株的筛选

摘要从340株马铃薯叶盘愈伤组织再生苗中经过试管苗接菌初筛选、温室抗性鉴定、人工病圃和田间自然病圃进一步鉴定获得了2株抗青枯病能力比母体显著提高的变异株.过氧化物酶同工酶分析表明,抗性变异株的酶活性都比母体高,其酶图谱比母体多了两条带,间接证明了它们在遗传上与母体有一定差异.     

马铃薯体细胞杂种的青枯病抗性鉴定

本试验对马铃薯四倍体栽培种(Solanum tuberosum)的双单倍体系81-15与二倍体野生种S.cha-coense的原生质体融合株系进行了青枯病抗性鉴定,其目的是对利用体细胞融合技术获得抗青枯病种质的有效性及抗性鉴定技术进行评价,获得抗病育种材料。结果表明:在鉴定的18个体细胞融合株系中,抗性分离表现为从感病(S)到抗病(R),多数表现为中感(MS)到中抗(MR)水平。田间病圃鉴定、人工接种鉴定和分子标记鉴定的结果显示:田间病圃鉴定的病情指数(DI)和人工接种鉴定病级(DS)的相关性达到极显著水平(DI=-0.39+4 DS,r2=0.921),双侧翼SCAR标记SCA07446和SCA12980鉴定同时具有两个标记特异带的株系均为前两种鉴定表现为中感(MS)以上的材料。综合分析同时利用3种方法鉴定的结果:CHT-3、CHT-5、CHT-6、CHT-10、CHT-15等5个株系为抗病材料,证明体细胞融合是利用野生种质资源抗性的有效途径。     

利用体细胞杂交获取马铃薯软腐病的抗性

对马铃薯四倍体栽培种和二倍体野生种Solanumbrevidens的体细胞杂种通过叶片离体培养获得的四倍体植株,以及用四倍体栽培种进行回交获得的五倍体植株的块茎对软腐病的抗性进行了测定。结果表明,由体细胞杂种通过叶片组织离体培养再生植株中,有一个株系SC107对软腐病菌Erwiniacarotovora具有较强的抗性。在用不抗软腐病的马铃薯栽培种对体细胞杂种进行回交获得的杂种后代中,大部分株系对软腐病菌具有高水平的抗性,从而说明Solanumbrevidens对软腐病的抗性基因已转移到马铃薯栽培种。     

Comparison of the effectiveness of different methods of screening for bacterial soft rot resistance of potato tubers

Tubers from eight potato cultivars (cvs) grown at two different locations in Wisconsin were tested for bacterial soft rot resistance using different inoculation techniques. The procedures included 1) point inoculations of tubers with different inoculum levels followed by incubation in ambient or low oxygen condtions, 2) inoculation of mechanically bruised tubers followed by incubation in a mist chamber, and 3) a standard slice inoculation method. The point titration test followed by incubation in dew chamber and the mist chamber-bruise test showed similar patterns of resistance for cultivars that were used in these experiments. These two methods are considered to be effective for screening potato tubers for bacterial soft rot resistance. Point titration methods are very useful if only limited numbers of tubers are available. The mist chamber-bruise test is simpler than the other procedures; however, to obtain reproducible results large numbers of tubers are required. Because of the great variability of the results obtained in inoculation of slices, the reliability of this approach can be questioned as a standardized method for evaluation of resistance. Tubers of somatic hybrids ofS. brevidens andS. tuberosum and their sexual progeny were significantly more resistant to bacterial soft rot than tubers of moderately resistant cultivars when evaluated by each of the assay procedures.     

An <Emphasis Type="Italic">In Vitro</Emphasis> Assay Method for Resistance to Bacterial Wilt (<Emphasis Type="Italic">Ralstonia solanacearum</Emphasis>) in Potato

To develop an in vitro assay method for bacterial wilt resistance in potato, resistant and susceptible standard genotypes were grown in vitro, and different conditions of inoculation with Ralstonia solanacearum phylotype I/biovar 4 were examined. The optimal condition was the inoculation of 6–8 leaf stage plants with a bacterial concentration of 10² CFU ml^?1 and an incubation temperature of 28 °C. Evaluation of stem wilting was more reliable than that of leaf wilting. Using this method, nine genotypes with different resistance levels in the field were evaluated. Lower disease indices were obtained for genotypes with high resistance levels in the field, suggesting that this assay is useful for evaluating bacterial wilt resistance in a controlled environment.     

Comparison of inoculation methods for field studies on varietal response to verticillium wilt of potatoes

Verticillium albo-atrum, cultured on potato dextrose agar plates or on sterilized wheat kernels, was used to incite disease in field studies. Immediately prior to planting, seed potatoes were dipped in a spore/mycelium suspension that was prepared from agar plate cultures. A second inoculation treatment involved placing infested wheat kernels under the potato seed at planting time. Both inoculation methods resulted in verticillium wilt development. However, the inoculum suspension dip method resulted in slightly greater incidences of verticillium wilt than did the infested wheat method. Inoculation by means of a suspension dip immediately after cutting the seed resulted in more wilted plants than when seed was inoculated 24 hours or 7 days after cutting. The spore/mycelium suspension dip method is now routinely used for field studies on disease susceptibility or resistance in potato cultivars.     

不同处理方法对马铃薯茎尖成苗率的影响

试验以带马铃薯病毒的N88为材料,分别在40℃/25℃(4 h/20 h)的变温环境中,培养2、3、4周处理后茎尖剥离;以N88和D575试管苗为材料,在加入0,20,30 mg·L-1病毒唑的培养基中处理40 d后茎尖剥离。茎尖培养基为MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.1 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 GA3+4 g·L-1琼脂粉+30 g·L-1白砂糖的改良固体培养基,30 d后开始调查成苗率,每隔10 d调查1次,直到60 d,统计茎尖成苗率。结果表明:2周变温处理的茎尖成苗率和对照接近,但脱毒率有所提高;4周变温处理剥离茎尖成苗率最低,60 d成苗率仅为15%,脱毒率为100%;病毒唑浓度对不同材料的茎尖成苗率影响不同,其中D575经过20 mg·L-1病毒唑处理,茎尖培养60 d后成苗率最高达到83.3%,PVS脱除率为40%;材料N88在加入20 mg·L-1和30 mg·L-1浓度病毒唑的培养基中培养40 d后茎尖剥离,60 d成苗率分别为40.0%和41.7%,PVY、PLRV的脱毒率为100%。     

双价抗菌肽基因转化辣椒

在建立高效快速辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ Ｌ．）子叶离体培养和植株再生体系的基础上,将昆虫抗菌肽Ｂ、Ｄ基因构建而成的双价质粒ｐＣＤＢ－Ⅱ以逐杆菌为介导转入５个辣椒栽培品种,共获得Ｋａｎ＾Ｒ植株１２００多株,对部分Ｋａｎ＾Ｒ植株进行点杂交、ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测,结果证明了外源基因被成功整合。盆栽接青枯菌试验,结果显示,转基因植株具有较强的抗病力。     

不同水源及培养瓶对马铃薯试管苗和试管薯的影响

试管薯体积小,不耐储藏是试管薯应用的瓶颈。培育健壮脱毒马铃薯试管苗是生产高质量试管薯的前提。以脱毒马铃薯试管苗克新13和荷兰15为材料,通过对不同水源(自来水和蒸馏水)和培养瓶(透气和不透气)生产的试管苗和试管薯的比较,得出以下结论:自来水比蒸馏水生产的试管苗健壮,试管薯体积比较大;透气瓶生产的试管薯外观好,无气孔外翻现象,耐储藏。     

快中子辐照对花生种子胚小叶植株再生的影响

以花生品种花育22号的成熟饱满种子为试材,采用14Mev不同剂量的快中子(0、9.7、14和18Gy) 进行辐照处理。处理后的种子经表面杀菌后,取胚小叶作为外植体先后在添加2,4-D 和BAP 的培养基上进行培养,诱导体胚形成及其萌发和植株再生。结果表明,体胚诱导率和植株再生率因辐照剂量的不同表现出明显的差异,随辐照剂量的增加,外植体形成体胚的频率及再生植株的频率明显降低。推断快中子辐照花育22号的适宜剂量为9.7~14.0Gy。再生小苗经无菌嫁接驯化后移栽田间,得到了成熟种子。